脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号:UP07

脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit货号:UP07
脂肪酸摄取测定试剂盒
Fatty Acid Uptake Assay Kit
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:常温

特点:

 

● 灵敏度高,操作简便

● 操作简单三步即可完成实验

● 无需清洗细胞

下载说明书
宣传资料
选择规格:
100tests
期货
产品解说
试剂盒内含
产品概述
检测产品优势
选择指南
产品Q&A

产品解说

 

试剂盒内含

image.png

产品概述

该试剂盒使用Fatty Acid Uptake Probe作为脂肪酸类似物,通过位于细胞膜表面的脂肪酸转运蛋白进入细胞,可以通过荧光显微镜、流式细胞仪和荧光酶标仪等荧光测量方法检测细胞的摄取能力。此外,该试剂盒配备了Quenching Buffer,可消除未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe的荧光,因此无需清洗细胞也可以检测。

检测产品优势

 

为什么脂肪酸摄取能力越来越受到关注?

脂肪酸是为生物体供应能量的重要物质。脂肪酸摄取能力不仅与肥胖和糖尿病等疾病有关,也是癌细胞的代谢指标之一(左下图)。细胞增殖活跃的癌细胞往往需要很多脂质,所以细胞内的脂肪酸合成和细胞外的脂肪酸摄取很活跃(右下图)。因此,以癌细胞的脂肪酸代谢途径为目标,开发了很多药物。

1665475248585592.png1665475280244946.png

用单个试剂盒即可解决整个脂肪酸摄取实验!

1665475321825088.png

本试剂盒所内含的脂肪酸类似物通过脂肪酸转运体被转运至细胞内,再通过荧光探针(荧光法)检测该类似物的摄入量【检测原理】。Quenching buffer可以省去清洗操作的麻烦和时间成本,进行检测【操作步骤】。

检测原理

1665475427372904.png

操作步骤

1665475458696616.png

检测仪器

HepG2细胞通过添加脂肪酸转运蛋白抑制剂CB-2,在不同仪器中检测其脂肪酸摄取能力的变化。

1665475487584787.png

选择指南

Washing Buffer或Quenching Buffer的选择指南

请参考下表,根据细胞种类和实验系统(操作和测量装置)选择Washing Buffer或Quenching Buffer。

〇:可测量、×:不可测量、△:参考注释

Washing Buffer (10×) Quenching Buffer
贴壁细胞 悬浮细胞 贴壁细胞 悬浮细胞
清洗操作 必要 不需要
荧光酶标仪 底部读数(透明底) △※1
顶部读数 ×
荧光显微镜
激光共聚焦显微镜 △※2
流式细胞仪 ×

※1接种的细胞需要覆盖板底(大约:3x105cells/well),使之静置一段时间,从而可检测在板底的贴壁细胞。

※2使用激光共聚焦显微镜时,请将Quenching Buffer用Washing Buffer稀释10倍后使用,如果不能使用ex:488nm,请使用ex:640nm进行检测。

实验例

确认细胞中脂肪酸代谢状态

在A549细胞中添加不含葡萄糖或含有25mmol/l葡萄糖的DMEM培养基,制备了正常状态(control)和饥饿状态(Starved)的两组细胞。使用本试剂盒对两组细胞进行染色,并使用荧光显微镜观察。

结果显示,在对照组细胞中,荧光素大多聚集在脂肪滴中,而在饥饿状态的细胞中荧光素主要集中在线粒体和内质网上。由此可看出在饥饿状态下的细胞脂肪酸代谢的变化。

1665476343582003.png

对照组细胞和饥饿组细胞的荧光图

1665476375765131.png

*供参考的可检测数:35 mm dish 10块、 96孔板 1 块

产品Q&A

Q: 可用于哪些种类的细胞
A:在下述细胞中有使用实例。

 

细胞 由来
A549 人肺泡基底上皮腺癌细胞
HepG2 人肝癌细胞
HeLa 人宫颈癌细胞
Jurkat 人白血病T细胞
MOLT-4 人急性淋巴白血病细胞
3T3-L1 (preadipocyte) 前脂肪細胞
3T3-L1 (adipocyte) 脂肪細胞

 

Q: 将Fatty Acid Uptake Probe孵育进活细胞后,可以固定细胞吗?
A:<实验例>使用4%PFA固定染色后的细胞实验案例

Protocol:贴壁细胞

1.     将制备好的细胞接种在培养皿或96孔板上;

2.     用无血清培养基洗涤两次;

3.     加入无血清培养基,在培养箱(37℃,5%CO2存在下)中静置孵育15 min;

4.     去除上清液,添加Fatty Acid Uptake Probe working solution,在培养箱(37℃、5%CO2存在下)中静置15 min;

5.     去除上清液,用Washing Buffer solution清洗1次;

6.     向细胞中加入4%PFA/PBS并在室温下孵育5 min;

7.     用PBS洗涤细胞3次,用荧光显微镜检测,荧光酶标仪检测。

bc5b27025062ab6f6f42cee13ef9977.png

8fdfa63cc177ba94974f267f0abff7b.png

※固定会降低荧光强度

悬浮细胞

1.      取细胞样品至微管中;

2.      300×g离心5min,去除上清液;

3.      加入无血清培养基,300×g离心5min,去除上清液,重复两次;

4.      加入无血清培养基,混匀细胞,在培养箱(37℃,5%CO2)中静置15 min;

5.      300×g离心5 min,去除上清液;

6.      加入Fatty Acid Uptake Probe working solution,混匀细胞,在培养箱(37℃,5%CO2)中静置15 min ;

7.      300×g离心5min,去除上清液;

8.      用Washing Buffer solution清洗一次;

9.      加入4%PFA/PBS,混匀细胞,在室温下孵育5 min;

10.    300×g离心5 min,去除上清液;

11.    加入PBS,混匀细胞,300×g离心5 min,去除上清液;重复两次。

12.    用荧光显微镜或流式细胞仪检测。

1665476467676262.png

Q: 用荧光酶标仪检测时,应该用哪种板子?
A: 检测荧光,请使用细胞培养用的黑色孔板。

〇:可使用、×:不可使用、△:参考注释

 

贴壁细胞 悬浮细胞
不透明底 透明底 不透明底 透明底
Washing Buffer (10×) Top Reading
Bottom Reading × ×
Quenching Buffer Top Reading × ×
Bottom Reading × × △※

※接种的细胞需要覆盖板底,使之静置一段时间,从而可检测在板底的贴壁细胞。

〈使用Quenching Buffer时,悬浮细胞的数据〉

1665477515110488.png

实验案例使用孔板:

 

厂家 产品名 Cat No.
ibidi µPlate 96 well   ibiTreat black S 15 ib89626
Thermo   Fisher 96 Well Black/Clear   Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10 165305

 

Q: Fatty Acid Uptake Probe working solution可以保存吗?
A:无法保存。
Q:背景较高怎么办?
A:样品中可能存在未进入细胞的Fatty Acid Uptake Probe。可重复使用Washing Buffer solution清洗,或者考虑使用Quenching Buffer。
Q:试剂盒可检测的样品数量是多少?
A:请参照下表。

 

贴壁细胞 悬浮细胞
培养皿

(添加量)

6   well

(1.5   ml/well)

24-well

(0.3   ml/well)

 

96-well

(0.1   ml/well)

 

35-mm   dish

(1.5   ml/well)

 

1.5-ml   microtube

(0.5   ml/tube)

 

样本数 7   sample 34   sample 100   sample 7   sample 20   sample

 

Q:使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测,应该怎么做?
A:使用Quenching Buffer用激光共焦显微镜进行检测时,请将Quenching Buffer用Washing Buffer solution稀释10倍后使用,或者使用640nm激发光检测。

<用用激光共焦显微镜进行透射光观察时所看到的现象>

1665478016663968.png

Q:可以进行脂肪酸定量吗?
A:不能使用本产品定量脂肪酸。
Q:可以量化细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe吗?
A:无法定量细胞内摄取的Fatty Acid Uptake Probe。该试剂是为了确认脂肪酸摄取能力的增减的配合用试剂。
Q:可以和其他荧光染料共染吗?
A:Fatty Acid Uptake Probe是使用红色荧光观察。因此,请使用绿色或者红色荧光检测以外的试剂进行共染色。

与本公司线粒体染色试剂MitoBright LT Deep Red(MT12)共染色的实绩。

〈进入红色荧光〉

1665478635264548.png

〈与MitoBright LT Deep Red共染色〉

1. 制备细胞样品接种到培养皿或者孔板中;

2.去除培养基,用无血清培养基洗涤两次;

3.加入无血清培养基,在培养箱(37℃,5%CO2)中静置15 min;

4.去除上清液后,添加Fatty Acid Uptake Probe working solution,在培养箱(37℃,5%CO2)中静置15 min;

5. 去除上清液后,添加0.1µmol/l MitoBright LT working solution,在培养箱(37℃,5%CO2)中静置30 min;

6. 去除上清液后,用HBSS洗涤两次;

7.加入HBSS并用荧光显微镜观察。

1665478420992147.png

Q: 荧光显微镜观察时有什么注意事项吗?
A:荧光显微镜观察时,如果持续照射激发光,Fatty Acid Uptake Probe的荧光可能会淬灭。请控制连续的激发光的照射次数。

1665478445399847.png

BAPTA试剂货号:B019 85233-19-8(free acid)

BAPTA试剂货号:B019
O,O’-Bis(2-aminophenyl)ethyleneglycol-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetrapotassium salt, hydrate
85233-19-8(free acid)
商品信息
储存条件:室温
运输条件:室温
分子式:

C22H20K4N2O10

分子量:

628.79

SDS下载
选择规格:
500mg
期货 
 
钙离子掩蔽
性质
溶解例
规格性状

性质

  酸解离常数为pKa3 = 5.47和pKa4 = 6.36,金属离子的稳定常数为logKCa = 6.97和logKMg = 1.77。 因此,它是接近中性的Ca2 +的选择性螯合剂。

长期以来,GEDTA被认为是一种选择性捕获钙的螯合剂。 GEDTA首先证明了钙在肌肉收缩研究中的重要性。 如果要在生理pH条件(pH值为7)下进行实验,则需要将GEDTA的酸解离常数进一步降低2到3个数量级,以抑制质子化的副反应。

Tsien等人通过合成BAPTA(一种使用芳族胺而不是脂肪族胺的螯合剂)达到了这一要求。 下面是GEDTA和BAPTA常数值的比较,图中显示了各种Ca2 +配合物的条件常数与pH之间的关系。 可以看出,即使接近中性,BAPTA也不容易受到质子的影响。

1618537796893302.png

各种钙离子螯合剂的条件常数与pH的关系

溶解例

1.8 g/50 mL(水)

规格性状

规格性状:

本产品为白色粉末或结晶性粉末,可溶于水。

纯度(滴定,干物质转化率):95.0%或更高

水溶性:测试合格

PH(25°C):8.0-9.5

水分:3.5至14.0%或更高

灼烧残渣(硫酸盐):46.0-53.0%或更高

红外光谱:测试合格