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Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341

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Cellstain- Hoechst 33258 solution细胞核染色试剂货号：H341
2′-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
CAS号：23491-45-4
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C25H27Cl3N6O

分子量：

533.88

特点：

 

● 可用于活/死细胞DNA检测

● 蓝色荧光，毒性低

● 试剂盒稳定性高。

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1ml
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细胞染色
规格性状
产品概述
荧光特性
原理
操作说明
文献
常见问题Q&A

规格性状

规格

特性：该产品为黄色液体。

内容：试验成功

产品概述

荧光染料Hoechst 33258是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258,常用于细胞凋亡检测。

Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst染料可透过细胞膜并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。它们在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合。Hoechst 33258和Hoechst 33342均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechst-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

图片1.png

荧光特性

λex=350nm, λem=461nm

原理

图片2.jpg

操作说明

染色步骤

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMHoechst染料溶液。a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的Hoechst染料溶液。b）

3.将细胞在37ºC下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.在带有350 nm激发和460 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。

a）由于赫斯特染料可能具有致癌性，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的Hoechst染料缓冲溶液代替培养基。

文献

1) M.   J. Lydon, K. D. Keeler and D. B. Thomas, “Vital   DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry”, J. Cell Physiol., 1980, 102(2), 175.

2) M. Sriram, van der G. A. Marel, H.   L. Roelen, van J. H. Boo and A. H. Wang,   “Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA:   Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin   Complex”, Biochemistry, 1992, 31(47), 11823.

3) T. Ohara and T. Tsuge, “FoSTUA, Encoding a Basic Helix-Loop-Helix Protein, Differentially   Regulates Development of Three Kinds of Asexual Spores, Macroconidia,   Microconidia, and Chlamydospores, in the Fungal Plant Pathogen Fusarium oxysporum”, Eukaryot. Cell, 2004, 3, 1412.

常见问题Q&A

Q1:如何使用Hoechst 33258。

 
 

 

 

 

 

A1：有多种使用方法，但以形态观察为例。

它用作观察凋亡细胞中核变化（染色质浓缩，断裂）的简便方法。

<试剂>

・细胞固定液：1％戊二醛/ PBS（-）

・荧光染色：1 mM Hoechst33258 / PBS（-）

•Dojindo的产物为[1 mg / mL]（约1.87 mmol / L）

<操作方法>

1. 将含有约1 x 106个细胞的细胞培养基以400 Xg离心5分钟，并弃去上清液。

2.加入100μL细胞固定溶液，并通过移液或类似方法混合。

3.在室温下静置30分钟。

4.离心400Xg，5分钟，弃去上清液。

加入1 mL PBS（-），用移液器等混合，以400Xg离心5分钟，弃去上清液。

（*此时，戊二醛经常被洗涤和去除。可能会导致变色）

5.添加20μLPBS（-）并混合，然后添加4μL荧光染料并混合。

6.将1滴（5）的细胞溶液滴在载玻片上，盖上玻璃盖，然后按边缘。

7.在荧光显微镜下观察。

*由田沼靖（Yasushi Tanuma）指导的细胞工程独立体积实验规程系列“细胞凋亡实验规程”

 
 

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。
A2：

excel11.png

Q3：Hoechst 33258和Hoechst 33342解决方案的激发波长和发射波长及其区别。

 
 

 

 

 

 

 

A3:波长如下。
Hoechst33342 Ex：350 nm Em：461 nm
Hoechst33258 Ex：352 nm Em：461 nm

两者的基本用法是相同的。
我们的产品是水溶液，所以稀释至所需浓度并添加。

两者之间的区别在于，它基本上是一种特异性结合腺嘌呤-胸苷部分的药物。
它也穿过活细胞的膜并与活细胞的DNA结合。
Hoechst 33342的膜渗透性略高。
Hoechst 33258似乎是dsDNA的选择性抗体。

Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂货号：H342

发表于由
Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂货号：H342
2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
CAS号：23491-52-3
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C27H31Cl3N6O

分子量：

 561.93

特点：

 

● 结合活细胞DNA

● 试剂盒稳定性高。

● 激发和发射波长分别为350 nm和460 nm

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细胞染色
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荧光特性
文献
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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.3.    Cellular Senescence Detection Kit    细胞衰老检测

NO.4.    Calcein-AM/PI Double Staining Kit    活死细胞双染

NO.5.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

 

规格性状

规格

特性：该产品为黄色液体

含量：试验成功

产品概述

荧光染料Hoechst 33342是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，也称bisBenzimide H33342或HOE33342常用于细胞凋亡检测。

Hoechst 33342是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。

Hoechst染料可透过细胞膜并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。它们在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合。Hoechst 33258和Hoechst 33342均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechst-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。

33342.jpg

荧光特性

λex=352 nm, λem=461 nm

文献

1) M. J. Lydon, K. D. Keeler and   D. B. Thomas, “Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow   Microfluorometry”, J. Cell Physiol., 1980, 102(2), 175.

2) M. Sriram, van der G. A. Marel, H. L. Roelen, van J. H. Boo   and A. H. Wang, “Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation   Lesion on DNA: Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the   d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin Complex”, Biochemistry, 1992, 31(47), 11823.

3) Y. Tadokoro, K. Yomogida, Y. Yagura, S. Yamada, M. Okabe   and Y. Nishimune, “Characterization of Histone H2A.X Expression in   Testis and Specific Labeling of Germ Cells at the Commitment Stage of Meiosis   with Histone H2A.X Promoter-Enhanced Green Fluorescent Protein   Transgene”, Biol. Reprod., 2003, 69,   1325.

4) F. Wada, A. Ogawa, Y. Hanai, A. Nakamura, M. Maki and K.   Hitomi, “Analyses of Expression and Localization of Two Mammalian-Type   Transglutaminases in Physarum polycephalum, an Acellular Slime   Mold”, J. Biochem.(Tokyo), 2004, 136, 665.

5) M.   Oka, N. Kobayashi, K. Matsumura, M. Nishio and K. Saeki, “Exogenous Cytokine-Free Differentiation of Human   Pluripotent Stem Cells into Classical Brown   Adipocytes”, Cells., 2019, 8, (4), 373

6)   T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y.   Morita, “Lactobacillus paracasei KW3110   Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human   Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy   Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

常见问题Q&A

Q1:如何使用Hoechst 33258。

 
 

 

 

 

 

A1：有多种使用方法，但以形态观察为例。

它用作观察凋亡细胞中核变化（染色质浓缩，断裂）的简便方法。

<试剂>

・细胞固定液：1％戊二醛/ PBS（-）

・荧光染色：1 mM Hoechst33258 / PBS（-）

•Dojindo的产物为[1 mg / mL]（约1.87 mmol / L）

<操作方法>

1. 将含有约1 x 106个细胞的细胞培养基以400 Xg离心5分钟，并弃去上清液。

2.加入100μL细胞固定溶液，并通过移液或类似方法混合。

3.在室温下静置30分钟。

4.离心400Xg，5分钟，弃去上清液。

加入1 mL PBS（-），用移液器等混合，以400Xg离心5分钟，弃去上清液。

（*此时，戊二醛经常被洗涤和去除。可能会导致变色）

5.添加20μLPBS（-）并混合，然后添加4μL荧光染料并混合。

6.将1滴（5）的细胞溶液滴在载玻片上，盖上玻璃盖，然后按边缘。

7.在荧光显微镜下观察。

*由田沼靖（Yasushi Tanuma）指导的细胞工程独立体积实验规程系列“细胞凋亡实验规程”

 
 

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。
A2：

excel11.png

Q3：Hoechst 33258和Hoechst 33342解决方案的激发波长和发射波长及其区别。

 
 

 

 

 

 

 

A3:波长如下。
Hoechst33342 Ex：350 nm Em：461 nm
Hoechst33258 Ex：352 nm Em：461 nm

两者的基本用法是相同的。
我们的产品是水溶液，所以稀释至所需浓度并添加。

两者之间的区别在于，它基本上是一种特异性结合腺嘌呤-胸苷部分的药物。
它也穿过活细胞的膜并与活细胞的DNA结合。
Hoechst 33342的膜渗透性略高。
Hoechst 33258似乎是dsDNA的选择性抗体。

Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 水溶液 Cellstain- DAPI solution

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Cellstain- DAPI solution试剂货号：D523
4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 水溶液
Cellstain- DAPI solution
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
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分子式：

C16H17Cl2N5

分子量：

350.25

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细胞染色

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Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒
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2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂
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实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

Cellstain- DAPI试剂货号：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐 Cellstain- DAPI

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Cellstain- DAPI试剂货号：D212
4’6-二脒-2-苯胺，二盐酸盐
Cellstain- DAPI
商品信息
储存条件：-20度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C16H17Cl2N5

分子量：

350.25

特点：

 

● 可用于流式细胞仪

● 活细胞核染色试剂

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细胞染色
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产品概述
荧光特性
操作说明
文献
常见问题Q&A

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规格

 

特性：该产物为黄色至微黄色的绿棕色粉末或固体，可溶于水和稀盐酸。

水溶性：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料DAPI是一种可对DNA 染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测。DAPI是含有特定AT序列DNA的一种嵌入剂，它能像Hoechst染料一样粘附在DNA双螺旋的小沟区。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但却能穿透扰乱的细胞膜而对细胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，microplasm  DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360 nm和460 nm。

DAPI.jpg

荧光特性

λex=360 nm, λem=460 nm

操作说明

产品使用步骤 

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMDAPI溶液。a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的DAPI溶液。b）

3.将细胞在37℃下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.使用带有360 nm激发光和460 nm发射滤光片的荧光显微镜观察细胞。

a）由于DAPI可能致癌，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的DAPI缓冲溶液代替培养基。

注意事项

制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。

考虑长期存储时，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（代码：D523），以提高解决方案的稳定性。

文献

1) W.Schnedl,A.V.Mikelsaar,M.Breitenbach and O.Dann,”DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading”,Hum. Genet.,1977,36,167.

2) I.W.Taylor and B.K.Milthorpe,”An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and  Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J.Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.

3) F.Otto and K.G.Tsou,”A Comparative Study of DAPI,DIPI,and Hoechst 33258 and 33342 as  Chromosomal DNA Stains”, Stain Technol.,1985, 60, 7.

4) N.Poulin, A.Harrison and B.Palcic,”Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric  System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled  with Fluorescent Nucleic Acid Stains”, Cytometry, 1994,16,227.

5)M.Kawai,N.Yamaguchi and M.Nasu,”Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in  Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process”, J.Appl. Microbiol.,1999, 86 (3),496.

常见问题Q&A

Q1 核染色中所用染料的特征和区别是什么？ 
 

 

 

A1:这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。

除荧光波长以外的差异如下。

[EB]

它没有碱基特异性，可与所有DNA和RNA结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[PI]

像EB一样，它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料，因为插入时它的荧光强度比EB高。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[DAPI]

与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[AO]

通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实，可以在双链和单链之间进行区分。

它渗透到活细胞的细胞膜上。

[Hoechst33342，33258]

它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。

它是一种颜料，可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。
 

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。
A2：

excel11.png

 

 

Q3 如何使用DAPI进行核染色？
 

 

A3:有以下使用情况报告示例。制备DAPI储备溶液时要用水（难溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物质不适合长期储存。

对于长期存储，请使用解决方案类型产品-Cellstain®-DAPI解决方案（货号：D523），具有更高的解决方案稳定性。使用时，用缓冲液或有机溶剂将储备溶液稀释至所需浓度。

[使用DAPI进行细胞染色的示例]

包含实体瘤或簇的样品的DAPI染色示例（参考文献3）

1）用0.02％胰蛋白酶-EDTA处理，在37°C下孵育30分钟，以1,500 rpm离心5分钟，然后冲洗上清液。

2）在-20°C下用50％甲醇（也可以使用乙醇）固定后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

3）在-20℃下用30％甲醇洗涤后，以1,500rpm离心5分钟以除去上清液。

4）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

5）每106个细胞添加0.2 mL的RNase的0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）（pH 7.2）（1 mg / mL），并在37°C下孵育30分钟。

6）用0.2 M磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1,500 rpm离心5分钟以除去上清液。

7）加入10 mL 1μg/ mL DAPI溶液，并在黑暗中于4°C染色2小时。

[使用DAPI进行细胞染色的例子] Vollenweider等人在磷酸化因子激活的杀伤（LAK）细胞的细胞增殖试验中。

使用荧光打印机执行DAPI染色并进行测量（参考2）。

那时，请使用0.1 mg / mL的水溶液和1μg/ mL的甲醇溶液。

使用每孔100μL进行荧光染色。

Cellstain- PI solution试剂货号：P378 CAS号：25535-16-4

发表于由
3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘，水溶液（3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide,aqueous solution）
CAS号：25535-16-4
商品信息
储存条件：-20度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C27H34I2N4

分子量：

668.39

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细胞染色

关联产品

Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒
活死细胞双染试剂盒
活细胞质染色-绿色——Calcein-AM
3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester
Cellstain- Hoechst 33342 solution试剂
2′-(4-Ethoxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride
PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂
细胞膜染色试剂—绿色
Cellstain- CFSE试剂
5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate
在线小工具

实验工具|稀释计算器|摩尔浓度计算器

Cellstain- PI试剂货号：P346 CAS号：25535-16-4

发表于由
Cellstain- PI试剂货号：P346
3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘（3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide）
CAS号：25535-16-4
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温

分子式：

C27H34I2N4

分子量：

668.39

特点：

 

● 与死细胞DNA结合

● 常用于细胞凋亡检测

● 可与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用

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细胞染色
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产品概述
荧光特性
操作说明
文献
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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Calcein-AM    细胞质染色

NO.2.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽

NO.3.    Amine Coupling Kit    自组装单分子膜SAM

NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

 

规格性状

规格

特性：该产品为红棕色粉末或固体，易溶于水和稀盐酸。

水溶性：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

荧光染料PI（碘化丙啶）是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测，英文全称是Propidium  Iodide。它是一种溴化乙啶的类似物，在嵌入双链DNA后释放红色荧光。尽管PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色。PI经常被用来与Calcein-AM或者FDA等荧光探针一起使用，能同时对活细胞和死细胞染色。PI-DNA复合物的激发和发射波长分别为535nm和615nm。

PI.jpg

荧光特性

λex=530 nm, λem=620 nm

操作说明

1.用PBS或适当的缓冲液制备10-50μMPI溶液。a）

2.在细胞培养基中加入体积为细胞培养基1/10的PI溶液。b）

3.将细胞在37oC下孵育10-20分钟。

4.用PBS或适当的缓冲液清洗细胞两次。

5.在带有535 nm激发光和615 nm发射滤光片的荧光显微镜下观察细胞。

a）由于PI可能致癌，因此在处理过程中必须格外小心。

b）或者您可以用1/10浓度的PI缓冲溶液代替培养基。

文献

1) I. W.  Taylor and B. K. Milthorpe, “An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining  Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed  Cellpopulations”, J. Histochem. Cytochem., 1980, 28(11), 1224.

2) W. M. J. Vuist, F. V.  Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief,  “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with  Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation  Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.

3) A. K. El-Naggar, J. G.  Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, “Single- and  Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid  Neoplasms”, Cytometry, 1991, 12, 330.

4) C. Souchier, M. Ffrench,  M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, “Methods for Cell Proloferation  Analysis by Fluorescent Image Cytometry”, Cytometry, 1995, 20, 203.

5) T. Irino, T. Kitoh, K.  Koami, T. Kashima, K. Mukai, E. Takeuchi, T. Hongo, T. Nakahata, S. M.  Schuster and M. Osaka, “Establishment of Real-Time Polymerase Chain  Reaction Method for Quantitative Analysis of Asparagine Synthetase  Expression”, Mol. Diagn., 2004, 6,  217.

常见问题Q&A

Q1:核染色中所用染料的特征和区别是什么？

 
 

 

 

 

 

A1：

这里引入的染料具有通过与核酸相互作用而发出荧光或增加荧光强度的特性。

除荧光波长以外的差异如下。

[EB]

它没有碱基特异性，可与所有DNA和RNA结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[PI]

像EB一样，它没有基础特异性。它是一种更广泛使用的染料，因为插入时它的荧光强度比EB高。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[DAPI]

与双链小槽结合。它与腺嘌呤-胸苷簇具有高度结合。

它没有活细胞的膜通透性，并且可以染色死细胞。

[AO]

通过利用插入双链时和与单链磷酸结合时荧光波长不同的事实，可以在双链和单链之间进行区分。

它渗透到活细胞的细胞膜上。

[Hoechst33342，33258]

它与DNA的腺嘌呤胸苷部分特异性结合。

它是一种颜料，可以渗透到活细胞的细胞膜上并染色活细胞的DNA。

 
 

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。
A2：

excel11.png

Q3:如何使用PI进行核染色？

 
 

 

 

 

 

 

 

A3:一个例子如下所示。根据细胞类型和观察条件，考虑细胞固定和试剂浓度。

[使用示例①]

Vollenweider等人进行了PI染色，并在荧光素激活的杀伤（LAK）细胞增殖试验中使用了荧光板读数器进行了测量。

此时的浓度为0.5 mg / mL PBS（-）。所用浓度为5μg/ mL柠檬酸钠溶液，每孔100μL用于荧光染色。

·I.Vollenweider，P.Groscurth，J.Immunol.Methods，149，133（1992）。

[用法示例（2）]

（1）对于包含实体瘤或团块的样品，请用0.02％tripsin EDTA处理。

在37°C下孵育30分钟后，以1500 rpm进行5分钟，然后弃去上清液。

（2）在-20℃用50％甲醇固定后，以1500rpm进行5分钟，并弃去上清液。

（3）在-20℃下用30％甲醇洗涤后，以1500rpm进行5分钟，弃去上清液。

（4）用0.2 mol / L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）洗涤后，以1500 rpm进行5分钟，并弃去上清液。

（5）每106个细胞RNase 0.2 mol / L磷酸盐缓冲液（pH 7.2）溶液（1 mg / mL）

加入0.2 mL，并在37°C下孵育30分钟。

（6）用0.2 mol / L磷酸盐洗涤后，以1500 rpm进行5分钟，并弃去上清液。

（7）加入10 mL PI溶液（50μg/ mL），在黑暗中于4°C染色2小时。

・医学院出版《流式细胞仪入门》

Nucleolus Bright Red试剂货号：N512 核仁荧光染色试剂-红色

发表于由
Nucleolus Bright Red试剂货号：N512
核仁荧光染色试剂-红色
Nucleolus Bright Red
商品信息
储存条件：冷暗处保存
运输条件：室温

特点：

 

● 高特异性核仁定位

● 可通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

● 两种颜色可供选择

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60 nmol
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衰老检测方案
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荧光特性
产品概述
原理
核仁染色试剂的比较
产品特点
衰老细胞的评价例
产品实验例
核仁数分析
常见问题Q&A
产品文献

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DNA损伤检测
 γ-H2AX DNA损伤检测试剂盒- γH2AX（绿、红、深红）
AP位点 DNA损伤检测试剂盒（AP位点法）
核小体 Nucleolus Bright (绿、红）
细胞周期 Cell Cycle Assay Kit – PI/RNase Staining
DNA损伤关联指标 氧化损伤 DMPO
BMPO
TEMP
SOD Assay Kit
DPPH Antioxidant Assay Kit
凋亡 Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit/PI
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit/PI
Cell Cycle Assay Solution Deep Red/Blue
JC-1 MitoMP Detection Kit
Caspase-3 Assay Kit
铁死亡 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11
Liperfluo
GSSG/GSH Quantification Kit II
Iron Assay Kit
Mito-FerroGreen
衰老 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
SPiDER-βGal
自噬 Mitophagy Detection Kit
DALGreen – Autophagy Detection
DAPGreen – Autophagy Detection
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荧光特性

1607065982812396.png

产品概述

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料，只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应，不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所，荧光尤为强烈。

成像时，通过与核染色试剂DAPI[产品货号：D523]共染色，可以更清楚地确认核仁。有关详细信息，请参阅使用说明书中的实验例。

原理

核仁是不带膜的核内结构体，也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行，因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一，近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系，因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

1622192902845747.png

核仁染色试剂的比较

最大激发波长 最大发射波长 MeOH固定后染色 PFA固定后染色 活细胞染色
Nucleolus Bright Green 513 nm   538 nm 〇 〇 △※
Nucleolus Bright Red 537 nm 605 nm 〇 〇 △※

※希望通过活细胞进行评价时，请咨询公司技术支持。

产品特点

特点1：清晰地观察核仁

用4％ PFA或MeOH固定HeLa细胞后，用PBS洗净后用1％ Triton X-100进行破膜处理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养，然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

1622192822119035.png

<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4％PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

 

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2：核仁定位

用4％PFA固定WI-38细胞后，用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ，培养后，用落射式荧光显微镜 (Keyence，BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

1608620937494572.png

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3：与核仁相关的领域的报告示例

相关领域 概要 文献
评论(衰老）    关于各种参与细胞功能的核仁，
包括与癌症和早老症的已知关系、
特别是关于衰老的核仁功能。		 V. Tiku, A.   Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol.,   2018, 28(8), 662.
细胞衰老    由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、
核仁数量的减少和核仁总面积的加。		 H. Tanaka,   S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M.   Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent   Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.
细胞衰老     由于rRNA加工因子的枯竭导致
核仁肥大化，
同时SA-βGal和p16表达增加。		 K.   Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R.   Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome   biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53   activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.
自噬    通过抑制RNA聚合酶的转录，
确认自噬的诱导和核仁的形状变化。		 N. Katagiri,   T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The   nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by   inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI:   10.1038/srep08903.

衰老细胞的评价例

将不同传代数的WI-38细胞用4％ PFA固定后，用PBS洗净并用1％ Triton X-100进行破膜处理，然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI)，培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁，而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

1608621093791795.png

<染色条件>

细胞在4％ PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

产品实验例

实验例：通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后，分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像，在488nm处拍摄核仁体像，通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁，并计算出其数量。

1613715296471660.png

横河电机CQ1拍摄条件

使用板：96孔板

物镜：40倍

激发波长：

405nm（DAPI）：蓝色

488nm（Nucleolus Bright Green）：绿色

视野：16视野

<解析图像>

蓝框线：核

红框线：核仁

核仁数分析

在传代数较多的细胞中，得到了1个细胞核中只有1个核仁的比例增加，而2个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1，以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。

1606358872798301.png

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

常见问题Q&A

Q1：可以染色活细胞吗？
A1：本试剂建议用于固定细胞染色，不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色，请联系我们的技术支持。

产品文献

1、T. Miki, T. Nakai, M. Hashimoto, K. Kajiwara, H. Tsutsumi and H. Mihara, “Intracellular artificial supramolecules based on de novo designed Y15 peptides”, Nat. Comm., 2021, doi:10.1038/s41467-021-23794-6.

2、T. Nozaki and S. Shigenobu, “Ploidy dynamics in aphid host cellsharbor ing bacterial symbionts”, Sci. Rep., 2022, doi:10.1038/s41598-022-12836-8.

Nucleolus Bright Green试剂货号：N511 核仁荧光染色试剂-绿色

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DAPGreen – Autophagy Detection
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产品概述

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料，只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应，不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所，荧光尤为强烈。

成像时，通过与核染色试剂DAPI[产品货号：D523]共染色，可以更清楚地确认核仁。有关详细信息，请参阅使用说明书中的实验例。

原理

核仁是不带膜的核内结构体，也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行，因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一，近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系，因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

1622192461330857.png

核仁染色试剂的比较

最大激发波长 最大发射波长 MeOH固定后染色 PFA固定后染色 活细胞染色
Nucleolus Bright Green 513 nm 538 nm 〇 〇 △※
Nucleolus Bright Red 537 nm 605 nm 〇 〇 △※

※希望通过活细胞进行评价时，请咨询公司技术支持。

产品特点

特点1：清晰地观察核仁

用4％ PFA或MeOH固定HeLa细胞后，用PBS洗净后用1％ Triton X-100进行破膜处理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养，然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

1622192625285429.png

<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4％PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

 

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2：核仁定位

用4％PFA固定WI-38细胞后，用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ，培养后，用落射式荧光显微镜 (Keyence，BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

1608620937494572.png

＜检测条件＞

Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3：与核仁相关的领域的报告示例

相关领域 概要 文献
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包括与癌症和早老症的已知关系、
特别是关于衰老的核仁功能。		 V. Tiku, A.   Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol.,   2018, 28(8), 662.
细胞衰老    由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、
核仁数量的减少和核仁总面积的加。		 H. Tanaka,   S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M.   Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent   Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.
细胞衰老     由于rRNA加工因子的枯竭导致
核仁肥大化，
同时SA-βGal和p16表达增加。		 K.   Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R.   Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome   biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53   activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.
自噬    通过抑制RNA聚合酶的转录，
确认自噬的诱导和核仁的形状变化。		 N. Katagiri,   T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The   nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by   inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI:   10.1038/srep08903.

衰老细胞的评价例

将不同传代数的WI-38细胞用4％ PFA固定后，用PBS洗净并用1％ Triton X-100进行破膜处理，然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI)，培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁，而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

1608621093791795.png

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细胞在4％ PFA室温下浸泡5 min，再用Triton X-100在室温下浸泡20 min，加入各种荧光探针后培养5 min。

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Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

产品实验例

实验例：通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

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通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像，在488nm处拍摄核仁体像，通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁，并计算出其数量。

1613714955722638.png

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物镜：40倍

激发波长：

405nm（DAPI）：蓝色

488nm（Nucleolus Bright Green）：绿色

视野：16视野

<解析图像>

蓝框线：核

红框线：核仁

核仁数分析

在传代数较多的细胞中，得到了一个细胞核中只有一个核仁的比例增加，而两个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1，以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。

blob.png

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

荧光特性

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常见问题Q&A

Q1：可以染色活细胞吗？
A1：本试剂建议用于固定细胞染色，不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色，请联系我们的技术支持。

BCECF-AM试剂货号：B262 3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester CAS号：117464-70-7

发表于由
BCECF-AM试剂货号：B262
3′-O-Acetyl-2′,7′-bis(carboxyethyl)-4 or 5-carboxyfluorescein, diacetoxymethyl ester
CAS号：117464-70-7
商品信息
储存条件：-20度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C35H28O15

分子量：

688.59

特点：

 

● 水溶性好，可进入细胞膜

● 荧光强度高

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1mg
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荧光探针检测方案
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规格性状
产品概述
产品特性
操作说明
文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.2.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.3.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.4.    Cell Viability Assay Kit    细胞增殖/毒性检测

NO.5.    Fluo 4-AM special packaging    细胞内钙离子检测

 

规格性状

规格

 

特性：该产物为浅橙色至浅橙色棕色粉末或固体，可溶于DMSO和乙腈。

纯度(HPLC)：90%以上

荧光光谱：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

BCECF被广泛地用于细胞内pH的测定。Tsien博士和其他人通过加入2个额外的羧化物基团改进了这种羧基荧光素。加入的两个羧基使得它能更好地被固定在细胞内。BCECF具有很好的水溶性，是因为它在中性pH时带有4-5个负电荷。但是BCECF却很难穿过细胞膜进入到细胞内。它的pKa值为6.97，高于其它的羧基荧光素。BCECF在激发光谱439nm处有等吸收点，因此它能和Fura 2一样可用比率法测定。505nm和439nm通常是非常有用的用于比率测量的波长，一般会将490nm和450nm的滤光片加在激发光源的前面。而530nm的滤光片则是用来查看它的荧光信号的。这里要注意的是激发光谱与吸收光谱有一些细微的区别。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF。它能够轻易地进入到细胞内。就和其他的乙酰甲酯类一样，BCECF-AM只需要通过孵育就能进入细胞。BCECF-AM对潮湿非常敏感，所以要小心保存。如果DMSO储存液的颜色从浅黄色变为深橙色就代表了AM的分解。所以通过对颜色变化的观测，能判断AM酯的水解情况。

B262-1.gif

产品特性

BCECF-AM是一种对细胞内pH敏感的新型荧光探针，分别用490nm和440nm波长激发BCECF所得到的发射荧光之比与pH有很好的线性关系。BCECF-AM是乙酰甲酯化的BCECF，BCECF-AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，BCECF-AM没有荧光，进入细胞后被细胞内的酯酶水解成BCECF，从而被留在细胞内。BCECF在适当的pH值情况下可以被激发形成绿色荧光。BCECF-AM不仅被广泛用于哺乳动物细胞的研究，也有报道用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。在有细胞内pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中BCECF AM被广泛应用。BCECF-AM(pH荧光探针)需用无水DMSO(anhydrous DMSO)配制。

BCECF-AM(x600)-2.jpg

操作说明

试剂 (溶解方法):   

1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液(将1 mg 的BCECF-AM溶于1mlDMSO)HEPES缓冲液(20mM HEPES，153mM NaCl，5mM KCl，5mM glucose，pH7.4)

操作：

1.用HEPES制备细胞悬液，细胞浓度为4×107个/ml。

2.将1.45 mM的BCECF-AM/DMSO溶液加入细胞悬液中 (细胞悬液的1/300体积)，BCECF-AM终浓度为3mM。

3.37℃培养30min。

4.用HEPES缓冲液清洗细胞3次，制成3×106个/ml的细胞悬液。

5.使用荧光显微镜或带有图像分析系统的激光共聚焦显微镜检测细胞的荧光强度。

*标记的条件因细胞种类而异，在每次实验前，请先确定最佳条件。以上方法仅供参考。

B262-3.png

文献

1.R.A.Steinhardt, et al.,Development of K+-conductance and Membrane Potentials in Unfertilized Sea Urchin Eggs After Exposure to NH4OH. Nature.1973;241:400-401.

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FDA试剂货号：F209 Fluorescein diacetate

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FDA试剂货号：F209
Fluorescein diacetate
Fluorescein diacetate
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光
运输条件：室温
分子式：

C24H16O7

分子量：

416.38

特点：

 

● 激发和发射波长分别为488 nm和530 nm

● 可用于流式细胞仪

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常见问题Q&A

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规格

特性：该产物为白色结晶粉末或固体，可溶于二甲基亚砜。

可溶于二甲基亚砜：试验成功

NMR光谱：试验成功

产品概述

FDA可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较BCECF或Calcein的亲水性低，因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。FDA也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488 nm和530 nm。

荧光特性

荧光特性：λex=488 nm, λem=530 nm

参考文献

1) B. Rotman and B. W. Papermaster, “Membrane Properties of Living Mammalian Cells as Studied by Enzymatic Hydrolysis of Fluorogenic Esters”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1966, 55, 134.

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3) K. H. Jones and J. A. Senft, “An Improved Method to Determine Cell Viability by Simultaneous Staining with Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide”,J.Histochem.Cytochem., 1985, 33, 77.

4) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, “A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry”, J. Immunol. Methods, 1986, 86, 7.

5) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”, Cancer Res., 1989, 49, 3783.

6) E. Prosperi, “Intracellular Turnover of Fluorescein Diacetate. Influence of Membrane Ionic Gradients on Fluorescein Efflux”, Histochem.J., 1990, 22, 227.

常见问题Q&A

Q1:如何使用FDA。

 
 

 

 

 

A1:下面给出一个例子。请根据细胞的种类，观察条件讨论细胞的固定和试剂浓度。

【例1】HeLa细胞的形态观察

将1mg的FDA溶解在2ml的DMSO中(储存溶液)

用PBS(-)溶液稀释，设为2μmol/L。(用5ml PBS(-)稀释8μl贮存溶液)

1)用胰蛋白酶-EDTA等回收HaLa细胞，制备细胞悬浊液。

2)离心分离细胞悬浊液(1000rpm, 3min)

3)除去上清，添加PBS(-)(此时细胞数为105 ~ 106cells /mL)

4)通过粘贴等充分分散。

*因为培养液中的血清等有使背景上升的危险重复②~④的操作充分清洗。

5)在1.5 mL微管中添加用4)得到的30μL细胞悬浊液。

6)在此加入15μL的FDA溶液。

7)盖上微管，37℃下孵育15min。

8)在玻璃罩上放上7)的溶液10μL，从上面再盖上一层玻璃，夹入染色的细胞悬浊液。

9)将盖杯置于荧光显微镜下，用490nm滤光器激发，观察发出黄绿色荧光的活细胞。

例2:C57BL/6小鼠脾脏细胞的双重染色，使用FDA和PI。

k.h.j ones, j.a. senft, J.Histochem.Cytochem.， 33, 77 (1985).

将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液)

将上述0.04 mL溶液稀释为10ml PBS(-)。

PI将1mg溶解在50ml PBS(-)中。

在0.2 mL D-PBS溶液中混浊的细胞(2×106 cells/mL)溶液中添加0.1 mL的FDA溶液和0.03 mL的PI溶液。

孵化后观察。

【例3】使用HeLa细胞的细胞膜离子梯度对Fluorescein溶出的影响

·E.Prosperi, Histochem. J.， 22, 227 (1990).

将5mg的FDA溶解在1ml的丙酮中(储备溶液)

用PBS(-)，终浓度2.4μmol/L染色。
 

Q2：细胞染料的激发波长和发射波长是多少。
A2：

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