产品用途	点击查看产品详情	产品优势
细胞凋亡检测	Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit （手机端点击）	灵敏度高 象限区分好 性价比高
	Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit （手机端点击）
	Caspase-3 Assay Kit -Colorimetric- （手机端点击）
细胞毒性检测 （检测死细胞数量）	Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST （手机端点击）	与CCK-8双重验证细胞毒性 CAR-T&ADCC实验可用
活死细胞双染	Calcein-AM/PI细胞双染试剂盒 （手机端点击）	荧光结果与CCK-8双重验证 高分文献支持 操作简便
细胞内亚铁离子 检测	FerroOrange （手机端点击）	更多铁死亡检测方法 点击查看

Cell Counting Kit-8是用于化学药物等对细胞增殖或毒性实验时进行细胞计数的试剂盒。试剂盒中使用高灵敏度的新型水溶性四唑盐WST-8甲臜染料作为显色底物，与传统的细胞计数试剂盒相比，灵敏度大幅度的提高。WST-8被细胞内的脱氢酶还原产生水溶性的甲臜染料。通过直接测量甲臜染料（450 nm）的吸光度，即可测出活细胞的数量。细胞数量与甲臜染料成正比关系。同时试剂盒为配置好的1瓶溶液，易于使用。

1）对比[³H]法，无需放射性同位素。

2）使用水溶性四唑盐与水溶性甲臜染料，因此无需DMSO换液操作步骤。（如MTT分析等需要）

3）与其他水溶性四唑盐法（XTT，MTS）相比，灵敏度更高的同时毒性更低。

4）试剂盒为1瓶装，无需提前配置，无需准备其他试剂。

5）试剂盒稳定性高。

6）试剂可以与酚红同时使用。

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 包含了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST^®-8和电子载体(1-Methoxy PMS)。由于WST^®-8具有高水溶性，它存在于细胞外而不渗透活细胞膜，通过1-Methoxy PMS接受乳酸脱氢酶的辅酶NADH的电子而被还原，生成水溶性WST^®-8甲臜染料（最大吸收波长450nm：详见下方吸收光谱）。

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 利用了Dojindo开发的水溶性四唑盐—WST^®-8 (2- (2-甲氧基-4-硝苯基) -3- (4-硝苯 基) -5- (2,4-二磺基苯) -2H-四唑单钠盐)，它在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的橙黄色甲臜。 CCK-8溶液可以直接加入到细胞样品中，无需配制。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的 一种高灵敏度，无放射性的比色检测法。WST^®-8被细胞内脱氢酶氧化还原后生成的橙黄色甲臜能够溶解在培养基中 ，生成的甲臜物的数量与活细胞数量成正比。

 

本试剂盒测定方法简单，只需一瓶试剂即可操作，无需二次配制工作液，从而提高实验者的效率。

细胞增殖实验(左)与细胞毒性实验(右)

Cell Counting Kit-8 与Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST同时检测细胞毒性

检测药物： Mitomycin C

细胞: HeLa

培养基: MEM, 10% FBS

孵育条件: 37℃, 5% CO₂, 48小时

检测波长: Cell Counting Kit-8 (450 nm), Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST^® (490 nm)

使用Mitomycin C 检测检测HeLa细胞毒性。通过使用Cell Counting Kit-8和Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST^® [货号: CK12]两种方法检测。Cell Counting Kit-8以细胞活性为指标，Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST以游离的LDH为指标，实验证实两种指标检测存在差异性。二者联用，能更全面的表征细胞毒性。

WST®-8甲臜染料吸光度与续细胞数量的关系

培养基: MEM, 10%FBS(HeLa ) , RPM1640(HL60)

孵育条件:37℃, 5%CO₂, 2hr (HeLa、HL60)

检测试剂:Cell Counting Kit-8

(●) 450 nm, XTT (◆) 450 nm, MTS

(▲) 490 nm, MTT(■) 570 nm

将HeLa细胞和HL60细胞以不同的细胞数接种到96孔板中，按孵育条件处理后加入以上每种试剂测定吸光度。根据细胞数量增加吸光度。CCK-8灵敏度、线性范围优于以上其他方法。

Cell Counting Kit-8可冷藏保存1年以上，避免试剂浪费！

试剂本身对细胞毒性的比较

HeLa细胞在96孔板中孵育(5000个/孔)。在CO2培养箱中开始显色反应，每隔3、6、24小时在显微镜下观察细胞形态。Cell Counting Kit-8在24小时后细胞形态没有改变。在使用药物进行细胞毒性试验时，应选择测量试剂本身对细胞毒性影响更小的试剂。

3D培养检测细胞毒性指南，

详见OECD Guidelines for the Testing of Chemicals, Section 4 Test No. 492

Q1：96孔板操作实例外，24孔板，12孔板如何检测？

A1：与培养基1:10的比例加入。

Q2：如何测定空白孔？

A2：空白读值的来源有两部分，还原性物质与细胞本身活性。请确认以下细节。 ·还原性物质：可在正式实验之前，在培养基中加入CCK-8和待测药物。如果变色，证明药物有还原性。正式实验检测时，请在加入CCK-8前更换培养基。 ·细胞活性变化：CCK-8检测细胞活性，因此细胞活性变化，即使细胞数量不变，空白也会变化。因此需要确认细胞活性是否存在变化。

Q3：如何终止反应？

A3：有一下几种方法（96孔板）： 1、 在显色反应后，将培养板放置4℃冰箱内。 2、 每孔加10 μl 0.1 M HCL溶液。 3、 每孔加10 μl 1%（w/v）的SDS（十二烷基硫酸钠）溶液。 注意：反应停止后，应在24小时之内测定。 4、使用本公司Stop Solution for CCK-8(货号:CK13).

Q4：我可以使用450 nm以外的滤光片吗？

A4：可使用430-490nm的滤光片，450nm滤光片最优。WST-8甲臜染料吸收光谱：

Q5：CCK-8运输与保存条件？

A5：试剂在4℃下可稳定保存24个月。如需长期存放可保存-20℃，但不要反复冻融。如更换其他容器，请先进行稳定性实验，确认试剂稳定性。

Q6：一个孔中应接种多少个细胞？

A6：当使用标准96孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μl 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μl 培养基)。如果要使用24孔板或6孔板实验，请先计算每孔相应的接种量，并按照每孔培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。

Q7：能否用384孔板进行试验？

A7：可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液，如果加入的CCK-8体积太少，可以先将CCK-8溶液稀释1倍，然后加入培养基体积20%的量

Q8：能否用24孔板进行试验？

A8：可以。向各孔中加入培养基体积10%的CCK-8溶液。

Q9：酚红会影响检测吗？

A9：不会。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

Q10：CCK-8与胸苷结合检测之间是否有相关性？

A10：有。然而，请注意由于CCK-8使用的检测原理与胸苷检测的不同，因此结果可能不同。

Q11：CCK-8能否检测细菌细胞？

A11：可以检测E.coli，但不能检测酵母细胞。向100 μl E.coli培养液中加入10 μl CCK-8溶液，并培养1-4个小时或过夜。但是更推荐使用我公司货号M439的：细菌活性检测试剂盒。

Q12：如何减少由于CCK-8试剂在枪头上或孔壁上的残留所带来的误差？

A12：可以在加样前用培养基稀释CCK-8试剂并混匀后加样。

Q13：CCK-8是什么颜色？

A13：应该是粉红色。若颜色不一样，有可能会影响测定。

Q14：CCK-8能否对活细胞进行染色？

A14：不能。因为CCK-8的主要成分是一种水溶性的四唑盐 (WST®-8)，并通过电子载体1-Methoxy PMS将活细胞中的电子交换到培养基中的WST®-8上。由于生成的甲臜也是高度水溶性的，因此CCK-8不能对细胞进行染色。

Q15：CCK-8检测溶液对细胞是否有毒？

A15：CCK-8溶液自身因为高浓度的1-Methoxy PMS的存在而具有一点毒性。但是，加到培养基中的CCK-8是没有毒性的，因为被稀释了10倍。因此，长时间的培养，如过夜或者培养数天是可以的。同一个细胞培养液在CCK-8检测后还可以用于其他细胞增殖检测，如结晶紫检测，中性红检测或者DNA荧光检测等。由于每种细胞对于CCK-8的耐受力都不同，因此在需要进行长时间培养时，先检测一下细胞在加入CCK-8培养后的活力。

Q16：在做加药实验时，药物对测定是否有影响？如何解决？

A16：有时会有影响。如果药物具有还原性，会和CCK-8发生显色反应，增加吸光度。解决办法：首先要确认药物是否有吸收，在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450 nm的吸光度，如果它的吸光度比不含药物的培养基 (加CCK-8)的吸光度高，则证明药物有影响，可在加CCK-8之前更换培养基，去掉药物的影响。

Q17：每次测定的数值不一样，是什么原因？如何解决？

A17：可能会有以下几个原因： 1. 当在培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔最容易干燥挥发，由于体积不准确而增加误差。 一般情况下，最外一圈的孔只加培养基，不作为测定孔用。 2. 有可能会因为CCK8沾在壁上而产生误差，建议在加入CCK-8后，轻轻敲击培养板以帮助混匀。 3. 每孔的细胞数量过多或过少。请预先在1,000-100,000个/孔范围内摸索条件。

Q18：如何设定空白对照？

A18：在不含细胞的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度即为空白对照。在做加药实验(细胞毒性实验)时，还应考虑药物的吸收，可在不含细胞，加入药物的培养基中加入CCK-8，培养一定的时间，测定450 nm的吸光度作为空白对照。

Q19：哪些物质会影响CCK-8的测定？

A19：当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定，例如含有维生素C的Glucose等 (一般培养基中的量不多，酚红或血清不影响测定)。在有酚红存在的情况下，会增加空白吸收，但不影响测定，扣除空白吸收即可。

Q20：在实验中吸光度值太高，如果不能减少细胞数量，如何解决？

A20：可以缩短加入CCK-8后的培养时间。例如：可以把加入CCK-8试剂后的培养时间由2小时缩短为1小时。

Q21：设定参比波长的目的是什么？必须设定吗？

A21：不一定要设定。CCK-8试剂在参比波长没有吸光度。设定参比波长的目的是为了取出由于样品混浊所带来的吸收。

Q22：说明书上仅写了96孔板的测定方法，如果使用24孔板货12孔板，应该加多少量的CCK-8试剂？

A22：一般情况下建议加入CCK-8试剂的量是培养基体积的1/10。

Q23：必须预培养细胞吗？

A23：不一定。如果要向保持细胞的最好状态，建议预培养细胞。如果不做细胞预培养，细胞内的脱氢酶可能会不稳定。也有人不做细胞预培养，但在做标准曲线和检测时需要统一检测条件。

Q24：如果加入的药物中含有金属，是否会有影响？

A24：金属对CCK-8显色有影响。当终浓度为1 Mm的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制5%、15%、90%的显色反应，使灵敏度降级。如果终浓度是10 Mm的话，将会100%抑制。

Q25：预培养后，更换培养基需要细胞计数吗？

A25：一般情况下用胰蛋白酶处理对数增长期的细胞，用血球计数盘计数，制备成一定浓度的细胞悬液即可。如果想要精密计数细胞的话，可以预培养后取培养基用血球计数盘进行计数。

Q26：CCK-8对于不同的细胞，灵敏度是否一样？

A26：不一样，悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于贴壁细胞，一般加入CCK-8培养1-4小时吸光度已经很高，但对于悬浮细胞则可能吸光度较低，可以通过延长CCK-8的加入时间或增加细胞数量来解决。

Q27：悬浮细胞和贴壁细胞在数量上有何区别？

A27：悬浮细胞由于显色比较困难，一般需要增加细胞数量和延长培养时间。贴壁细胞显色比较容易，若细胞数量过大，有时吸光度会超过酶标仪的读数。

Q28：应该每次做标准曲线吗？

A28：建议每次做。虽然细胞是一样的，但是细胞的状态不一定一样，对于状态不一样的细胞，建议每次做标准曲线。如果试剂的批号不一样，灵敏度可能会有轻微的差异，对于不同的批号建议分别做标准曲线。

Q29：有时在药物作用情况下，细胞已经死亡，但是脱氢酶的活性还在，是否能计算细胞数量？

A29：不能。由于CCK-8是通过和细胞内的脱氢酶进行反应间接反映活细胞数量

1.Potential circadian effects on translational failure for neuroprotection，Nature,2020,582, 395–398

Epigenetic therapy inhibits metastases by disrupting premetastatic niches.Nature,2020,doi.org/10.1038/s41586-020-2054-x

2.Chimeric peptidomimetic antibiotics against Gram-negative bacteria，Nature,2019,doi:10.1038/s41586-019-1665-6

PU.1 controls fibroblast polarization and tissue fibrosis.Nature,2019,566,344–349

3.Mitochondrial unfolded protein response controls matrix pre-RNA processing and translation,Nature,2016,534,710-713

4.Transfer of mitochondria from astrocytes to neurons after stroke.Nature,2016,535,551-555

5.Signalling thresholds and negative B-cell selection in acute lymphoblastic leukaemia.Nature,2015, 521,357–361

6.The sonic hedgehog factor GLI1 imparts drug resistance through inducible glucuronidation.Nature,2014,511(7507),90-93

7.The sonic hedgehog factor GLI1 imparts drug resistance through inducible glucuronidation.Nature,2014,511(7507),90-93

8.Sema3A regulates bone-mass accrual through sensory innervations,Nature,2013,497(7450),490-493

9.Acetylation-dependent regulation of endothelial Notch signalling by the SIRT1 deacetylase.Nature,2011,473(7346),234-238

10.Embryonic lethal phenotype reveals a function of TDG in maintaining epigenetic stability.Nature,2011,470(7334),419-423

11.Intravenous delivery of a multi-mechanistic cancer-targeted oncolytic poxvirus in humans.Nature,2011,477(7362),99-102

12.Frequent inactivation of A20 in B-cell lymphomas.Nature,2009,459(7247),712-716

13.Modulation of microRNA processing by p53.Nature,2009,460(7254),529-33

14.Oncogenic mutations of ALK kinase in neuroblastoma.Nature,2008,455(7215),971-4

15.Hyaluronic acid–bilirubin nanomedicine for targeted modulation of dysregulated intestinal barrier, microbiome and immune responses in colitis.Nature Materials,2019,doi: 10.1038/s41563-019-0462-9

16.Parenchymal and stromal tissue regeneration of tooth organ by pivotal signals reinstated in decellula….Nature Materials,2019,18(6),627-637

17.Guiding intracortical brain tumour cells to an extracortical cytotoxic hydrogel using aligned polymer….Nature Materials,2014,13(3),308-16

18.A Bacterial Effector Reveals the V-ATPase-ATG16L1 Axis that Initiates Xenophagy.Cell,2019,178(3),552-566

19.Higher-Order Clustering of the Transmembrane Anchor of DR5 Drives Signaling.Cell,2019,176(6),1477-1489

20.Insulin Receptor Associates with Promoters Genome-wide and Regulates Gene Expression.Cell,2019,177(3),722-736

21.B-Cell-Specific Diversion of Glucose Carbon Utilization Reveals a Unique Vulnerability in B Cell Mali….Cell,2018,173(2),470-484

22.Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy

Cell,2017,170(3),548-563

23.Methyltransferase SETD2-Mediated Methylation of STAT1 Is Critical for Interferon Antiviral Activity

Cell,2017,170(3),492-506

24.Loss of 5-Hydroxymethylcytosine Is an Epigenetic Hallmark of Melanoma.Cell,2012,150(6),1135-1146

25.Mapping the Hallmarks of Lung Adenocarcinoma with Massively Parallel Sequencing.Cell,2012,150(6),1107-1120

26.Iron-Export Ferroxidase Activity of β-Amyloid Precursor Protein Is Inhibited by Zinc in Alzheimers D….Cell,2010,142(6),857-867

27.Autocrine VEGF Signaling Is Required for Vascular Homeostasis.Cell,2007,130(4),691-703

28.Genetic risk of extranodal natural killer T-cell lymphoma: a genome-wide association study in multipl…

Lancet Oncology,2019,pii: S1470-2045(19)30799-5

29.Precise targeting of?POLR2A?as a therapeutic strategy for human triple negative breast cancer.Nature Nanotechnology,2019,14 , 388–397

30.Metal nanoparticles in the presence of lipopolysaccharides trigger the onset of metal allergy in mice…

Nature Nanotechnology,2016,11,808–816

31.Chemical modification of PS-ASO therapeutics reduces cellular protein-binding and improves the therap…

Nature Biotechnology,2019,37640–650

32.Multi-omic measurements of heterogeneity in HeLa cells across laboratories

Nature Biotechnology,2019,37,314–322

33.Dual effects of carbon monoxide on pericytes and neurogenesis in traumatic brain injury.

Nature Medicine,2016,22,1335–1341

34.Orphan nuclear receptor NR4A1 regulates transforming growth factor-β signaling and fibrosis.Nature Medicine,2015,21(2),150–158

35.Randomized dose-finding clinical trial of oncolytic immunotherapeutic vaccinia JX-594 in liver cancer….Nature Medicine, 2013,19,329–336

36.Compromised CDK1 activity sensitizes BRCA-proficient cancers to PARP inhibition.Nature Medicine, 2011, 17(7), 875-882

37.Mesenchymal stem cell–based tissue regeneration is governed by recipient T lymphocytes via IFN-γ an….Nature Medicine, 2011,17(12), 1594-1601

38.Monoclonal antibody targeting of N-cadherin inhibits prostate cancer growth, metastasis and castratio….Nature Medicine, 2010, 16(12), 1414-1420

39.Identification of tendon stem/progenitor cells and the role of the extracellular matrix in their nich….Nature Medicine, 2007, 13(10), 1219-1227