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Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号：B299 CAS号：374592-98-0

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Biotin-PEAC5-maleimide试剂货号：B299
N-6-(Biotinylamino)hexanoyl-N’-[2-(N-maleimido)ethyl]piperazine, hydrochloride
CAS号：374592-98-0
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C26H41ClN6O5S

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585.16

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产品概述
原理
操作步骤
参考文献

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规格性状

性状：该产品为白色至微黄色粉末，溶于二甲基亚砜。

纯度（HPLC）：90.0％以上

二甲基亚砜可溶：测试合格

产品概述

已知生物素与抗生物素蛋白牢固结合，其特性已广泛用于高灵敏度分析。由于生物素与抗生物素蛋白之间的结合稳定性常数为1015，比抗原-抗体反应高3至4个数量级，因此一旦结合至抗生物素蛋白的生物素在生理条件下不会脱落。另外，生物素是具有羧基的小分子，可以容易地化学修饰，并且可以在不损害蛋白质等的活性的情况下进行标记。因此，已经开发出许多生物素化合物作为使用抗体进行免疫测定的标记剂。具有活性酯基的生物素通常用于与蛋白质的氨基（NH2基）结合，具有马来酰亚胺基的生物素用于巯基（SH基）。

根据目的，有必要选择在抗生物素蛋白识别的生物素头和反应性基团之间的间隔物的长度，但是通常，间隔物越长，当抗生物素蛋白结合时，对抗体的抗原识别活性越强。可以认为，间隔物的影响可能引起非特异性吸附，并且在测量期间的背景可能很高。因此，为了提高测量灵敏度，请查看S/N（信噪比）。必须选择适当长度的垫片。

间隔基通常使用氨基己酸，并且存在一种化合物，其中一个分子的氨基己酸通过酰胺键被引入生物素中，并且该化合物中的两个分子被引入。由于己酸间隔物变长，水溶性变差，因此通常将生物素标记试剂溶解在DMSO中并添加到含有蛋白质的缓冲液中的方法是普遍的。

当在用氨基标记蛋白质时不能使用有机溶剂时，可以使用具有磺酸基的活性酯化合物。此外，在与巯基的反应中，以相同的方式使用由DMSO制备的溶液，但是由于其在间隔部分具有哌嗪结构，因此通过质子化在中性区域显示水溶性。

用于还原糖的生物素酰肼化合物的水溶性低，需要在DMSO溶液中进行调节。

在ELISA（酶联免疫吸附测定）中，将酶标记的链霉亲和素与生物素标记的抗体结合的方法是常见的。与抗生蛋白链菌素相比，抗生物素蛋白便宜，但很少用于ELISA中。原因是背景极高，并且认为高PI是原因。抗生物素蛋白通常用于通过柱分离生物素结合蛋白等的目的。

原理

1606961245315403.png

操作步骤

产品使用步骤:

1. 制备含巯基的抗体

1) 用PBS溶解DTT (浓度为200mmol/l)，制成DTT溶液。

2) 精确称量1.0-5.0mg抗体并记录，加入500ul 10mmol/l HEPES Buffer (pH8.0) 溶解蛋白质，制成抗体溶液。

3) 在抗体溶液加入2ul DTT溶液，充分混合。

2. 凝胶过滤纯化

1) 打开NAP-5层析柱上的盖子，弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约10ml的洗脱液，使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取500μl标记好的抗体溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一根管子，在层析柱中加入1mlPBS，收集流出的抗体。

3. 生物素标记

1) 用DMSO溶解Biotin-PE-maleimide (浓度为50mmol/l，4.7mg/200ul或10mg/424ul)。

＊用Biotin-PEAC5-maleimide时浓度为5.9mg/200ul或10mg/342ul。

2) 在纯化好的抗体溶液中加入配制好的生物素标记试剂溶液，抗体：生物素标记试剂的混合摩尔比为1:10左右。

3) 充分混合后，在水浴恒温摇床 (25℃)中过夜培养。

4. 标记抗体的凝胶过滤纯化

1) 打开NAP-10层析柱上的盖子，弃去填充液。

2) 打开层析柱出口的盖子，用PBS分数次洗脱，每根层析柱收集大约15ml的洗脱液，使凝胶平衡。

3) 用移液器吸取1ml标记好的抗体溶液加入到层析柱中，弃去此时的流出液。

4) 在层析柱的出口处放置一根管子，在层析柱中加入1.5ml PBS，收集流出的生物素标记抗体。

参考文献

1) S. Hashida, M. Imagawa, S. Inoue, K. H. Ruan and E. Ishikawa , “Mor Useful Maleimide Compounds for the Conjugation of Fab’ to Horseradish Peroxidase throuth Thiol Groups in the Hinge”, J. Appl. Biochem., 1984, 6, 56.

2) E. Ishikawa, M. Imagawa, S. Hashida, S. Toshitake, Y. Hamaguchi and T. Ueno, “Enzyme-labeling of Antibodies and their Fragments for Enzyme Immunoassay and Immunohistochemical Staining”, J. Immunoassay, 1983, 4, 209.

3) H. -J. Friesen, P. Hermentin and P. Gronski, “Novel Maleimido-Biotins for the Selective Biotinylation of Sulfhydrils”, Protides Biol. Fluids, 1987, 34, 43.

4) E. Ishikawa, S. Hashida, T. Kohno, T. Kotani and S. Ohtani, “Modification of Monoclonal Antibodies with Enzymes, Biotin, and Fluorochromes and Their Applications”, Immunol. Ser., 1987, 33, 113.

5) R. B. del Rosalio and R. L. Wahl, “Disulfide Bond-targeted Radiolabeling : Tumor Specificity of a Streptavidine-biotinylated Monoclonal Antibody Complex”, Cancer Res. (Suppl.), 1990, 50, 804S.

Biotin-SS-Sulfo-Osu试剂货号：B572 CAS号：325143-98-4

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Biotin-SS-Sulfo-Osu试剂货号：B572
N-[[2-(Biotinylamino)ethyl]dithiopropionyloxy]sulfosuccinimide, sodium salt
CAS号：325143-98-4
商品信息
储存条件：-20度保存,防潮
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分子式：

C19H27N4NaO9S4

分子量：

606.69

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Isothiocyanobenzyl-EDTA（ITCBE）

Biotin-PE-maleimide试剂货号：B592 CAS号：374592-99-1

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Biotin-PE-maleimide试剂货号：B592
N-Biotinyl-N’-[2-(N-maleimido)ethyl]piperazine
CAS号：374592-99-1
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储存条件：-20度保存
运输条件：室温
分子式：

C20H29N5O4S

分子量：

435.54

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Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37 生物素快速标记试剂盒（微量）

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Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit试剂盒货号：LK37
生物素快速标记试剂盒（微量）
Ab-10 Rapid Biotin Labeling Kit
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Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10 生物素标记试剂盒-巯基

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Biotin Labeling Kit – SH试剂盒货号：LK10
生物素标记试剂盒-巯基
Biotin Labeling Kit – SH
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储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

 

● 整个标记过程仅需3个小时

● 整个标记过程在1支过滤管中进行

● 荧光标记抗体回收率高

● 适用于50-200 μg的IgG

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试剂盒内含
产品概述
原理
操作步骤
产品优势
常见问题Q&A
参考文献

试剂盒内含

1622187843944908.png

产品概述

生物素标记试剂盒-SH是用于在具有SH基团的蛋白质（尤其是抗体）上标记生物素的试剂盒。由于试剂盒中包含的SH反应性生物素分子中具有马来酰亚胺基团，因此仅通过与具有SH基团的分子混合即可形成稳定的共价键。如果蛋白质具有S-S键，则可以使用连接的还原剂制备游离的SH基团。（但是，由于SS键的断裂，蛋白质的活性可能会丢失。）当用生物素标记高分子量蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））时，可以使用所附的过滤管轻松进行预采样。如果可以进行处理并且将铰链区中的SH基团用于标记，则可以制备生物素标记的还原IgG，而不会损害抗体活性。另外，未反应的SH-反应性生物素可以在反应后通过使用滤管的纯化操作除去。

原理

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操作步骤

使用注意事项:

1. 用该试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。

3. 如果蛋白质溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果蛋白质溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 1管SH-Reactive Biotin可以标记50-200ug蛋白质。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。b）

（3）将150μl WS buffer加入到Reducing agent管中，并用移液器吹打使其溶解。

（4）将100μl Reducing agent溶液转移到过滤管的滤膜上，吹打使IgG在膜上溶解。

（5）37℃培养30分钟。加入100μl Reaction buffer，8,000-10,000g离心10分钟。b）

（6）将10μl DMSO加入到SH-reactive biotin中，吹打使其溶解。c）

（7）将100μl Reaction buffer与8μl SH-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）

（8）37℃培养30分钟。将100μl WS buffer加入到过滤管中8,000-10,000g离心10分钟。 b）

（9）加入200μl WS buffer，8,000-10,000g离心10分钟。b）再重复该步骤一次。

（10）加入200μl WS buffer，吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

1622187895930177.jpg

a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度<0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的IgG聚积量达到100ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400 ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c) NH2-Reactive Biotin/SH-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。

d) 如果IgG的量为200ug，在步骤4时加入所有的NH2-ReactiveBiotin溶液。

e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1、整个标记过程仅需3个小时

2、整个标记过程在1支过滤管中进行

3、荧光标记抗体回收率高

4、适用于50-200 μg的IgG

常见问题Q&A

Q1:样品溶液中的共存会影响反应吗？
A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。 在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。
*不仅对于生物素标记试剂盒-SH，而且对于其他标记试剂盒，都需要采取相同的预防措施。
Q2:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。
A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

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离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。
Q3:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？
A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。  （2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。

根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。 （回收的抗体/蛋白质的量将减少。）如果上述方法没有帮助，请与公司技术支持联系。

*如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。

替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33）
Q4:该试剂盒可以标记什么？
A:可以标记分子量为“50,000或更高”并且具有[S-S]或[SH]的任何化合物（抗体，蛋白质等）。量为“50-200μg”。
*由于试剂盒中包含的过滤管尺寸为30K，因此无法纯化低分子量化合物。

参考文献

1) E. Terasaka, K. Yamada, P.H. Wang, K. Hosokawa, R. Yamagiwa, K. Matsumoto, S. Ishii, T. Mori, K. Yagi, H. Sawai, H. Arai, H. Sugimoto, Y. Sugita, Y. Shiro and T. Tosha, “Dynamics of nitric oxide controlled by protein complex in bacterial system”, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.., 2017, 114, (37), 9888.

2) J. Hiruma, K. Harada, A. Motoyama, Y. Okubo, T. Maeda, M. Yamamoto, M. Miyai, T. Hibino and R. Tsuboi, “Key component of inflammasome, NLRC4, was identified in the lesional epidermis of psoriatic patients”, J. Dermatol.., 2018, 45, (8), 971.

3) K. Gonda, M. Watanabe, H. Tada, M. Miyashita, Y. Takahashi-Aoyama, T. Kamei, T. Ishida, S. Usami, H. Hirakawa, Y. Kakugawa, Y. Hamanaka, R. Yoshida, A. Furuta, H. Okada, H. Goda, H. Negishi, K. Takanashi, M. Takahashi, Y. Ozaki, Y. Yoshihara, Y. Nakano and N. Ohuchi, “Quantitative diagnostic imaging of cancer tissues by using phosphor-integrated dots with ultra-high brightness”, Sci. Rep.., 2017, 7, (1), 7509.

4) K. Saito, M. Sakaguchi, H. Iioka, M. Matsui, H. Nakanishi, N.H. Huh and E. Kondo, “Coxsackie and adenovirus receptor is a critical regulator for the survival and growth of oral squamous carcinoma cells”, Oncogene., 2014, 33, (10), 127401286.

5) K. Yamamoto, H. Murata, E.W. Putranto, K. Kataoka, A. Motoyama, T. Hibino, Y. Inoue, M. Sakaguchi and N.H. Huh, “DOCK7 is a critical regulator of the RAGE-Cdc42 signaling axis that induces formation of dendritic pseudopodia in human cancer cells”, Oncol. Rep.., 2013, 29, (3), 1073.

6) M. Sakaguchi, H. Murata, K. Yamamoto, T. Ono, Y. Sakaguchi, A. Motoyama, T. Hibino, K. Kataoka and N.H. Huh, “TIRAP, an Adaptor Protein for TLR2/4, Transduces a Signal from RAGE Phosphorylated upon Ligand Binding”, PLoS ONE., 2011, 6, (8), e23132.

7) M. Sakaguchi, H. Murata, Y. Aoyama, T. Hibino, E.W. Putranto, I.M. Ruma, Y. Inoue, Y. Sakaguchi, K. Yamamoto, R. Kinoshita, J. Futami, K. Kataoka, K. Iwatsuki and N.H. Huh, “DNAX-activating Protein 10 (DAP10) Membrane Adaptor Associates with Receptor for Advanced Glycation End Products (RAGE) and Modulates the RAGE-triggered Signaling Pathway in Human Keratinocytes”, J. Biol. Chem.., 2014, 289, (34), 23389.

8) N. Kobayashi, K. Odaka, T. Uehara, K. Imanaka-Yoshida, Y. Kato, H. Oyama, H. Tadokoro, H. Akizawa, S. Tanada, M. Hiroe, T. Fukumura, I. Komuro, Y. Arano, T. Yoshida and T. Irie, “Toward in Vivo Imaging of Heart Disease Using a Radiolabeled Single-Chain Fv Fragment Targeting Tenascin-C”, Anal. Chem.., 2011, 83, (23), 9123.

9) T. Ikeda, R. Shinohata, M. Murakami, K. Hina, S. Kamikawa, S. Hirohata, S. Kusachi, A. Tamura and S. Usui, “A rapid and precise method for measuring plasma apoE-rich HDL using polyethylene glycol and cation-exchange chromatography: a pilot study on the clinical significance of apoE-rich HDL measurements”, Clin. Chim. Acta.,2017, 465, 112.

10) T. Into, M. Inomata, M. Nakashima, K. Shibata, H. Hacker and K. Matsushita, “Regulation of MyD88-Dependent Signaling Events by S Nitrosylation Retards Toll-Like Receptor Signal Transduction and Initiation of Acute-Phase Immune Responses”, Mol. Cell. Biol.., 2008, 28, (4), 1338.

11) W. Nakai, T. Yoshida, D. Diez, Y. Miyatake, T. Nishibu, N. Imawaka, K. Naruse, Y. Sadamura and R. Hanayama, “A novel affinity-based method for the isolation of highly purified extracellular vesicles”, Sci. Rep.., 2016, 6, 33935.

12) Y. Terasaki, T. Akuta, M. Terasaki, T. Sawa, T. Mori, T. Okamoto, M. Ozaki, M. Takeya and T. Akaike, “Guanine Nitration in Idiopathic Pulmonary Fibrosis and Its Implication for Carcinogenesis”, Am. J. Respir. Crit. Care Med.., 2006, 174, (6), 665.

13) I. W. Sumardika, C. Youyi, E. Kondo, Y. Inoue, I. M. W. Ruma, H. Murata, R. Kinoshita, K. Yamamoto, S. Tomida, K. Shien, H. Sato, A. Yamauchi, J. Futami, E. W. Putranto, T. Hibino, S. Toyooka , M. Nishibori and M. Sakaguchi, “β-1,3-Galactosyl-O-Glycosyl-Glycoprotein β-1,6-N-Acetylglucosaminyltransferase 3 Increases MCAM Stability, Which Enhances S100A8/A9-Mediated Cancer Motility.”, Oncol. Res., 2018, 26, (3), 431.

14) J. Iwano, D. Shinmi, K. Masuda, T. Murakami and J. Enokizono, “Impact of Different Selectivity between Soluble and Membrane-bound Forms of Carcinoembryonic Antigen (CEA) on the Target-mediated Disposition of Anti-CEA Monoclonal Antibodies.”, Drug Metab. Dispos., 2019, 47, (1), 1240.

15) D. S. On, P. Chertchinnapa, Y. Shinkai, T. Kojima and H. Nakano, “Development of a dual monoclonal antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of swine influenza virus using rabbit monoclonal antibody by Ecobody technology.”, J. Biosci. Bioeng., 2020, DOI:10.1016/j.jbiosc.2020.03.003.

Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55 生物素标记试剂盒-氨基

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Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)试剂盒货号：LK55
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Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)
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NO.1.    Biotin Labeling Kit – NH2    生物素标记-氨基

NO.2.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.3.    Viability/Cytotoxicity Multiplex Assay Kit    细胞活性/毒性双重检测

NO.4.    Fluorescein Labeling Kit – NH2    FITC（488激发）标记-氨基

NO.5.    Biotin Labeling Kit – SH    生物素标记-巯基

Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03 生物素抗体标记试剂盒-氨基

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Biotin Labeling Kit – NH2试剂盒货号：LK03
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Biotin Labeling Kit – NH2
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特点：

 

 

● 生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。

● 只需将NH2反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。

● 可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

● 可以标记50-200μg的蛋白质。

● 可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

● 生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8     细胞增殖毒性检测   

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST   乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Fluorescein Labeling Kit – NH2    荧光素标记试剂盒-氨基

NO.4.    Peroxidase Labeling Kit – NH2    过氧化物酶标记试剂盒-氨基

NO.5.    Biotin Labeling Kit – NH2 (for 1mg)    生物素标记试剂盒-氨基

 

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1622187810391199.jpg

产品概述

生物素标记试剂盒-NH2是用于用生物素标记带有氨基基团的蛋白质的试剂盒，尤其是抗体，由于该试剂盒中包含的NH2-反应性生物素分子中具有活性酯基，因此仅通过与生物素混合即可形成稳定的共价键。当生物素标记在蛋白质（例如免疫球蛋白G（IgG））上时，可以使用随附的过滤管轻松去除抑制标记反应和未反应的NH2-反应性生物素的低分子量化合物（例如Tris）。因此，没有必要进行诸如透析和凝胶过滤的处理，并且可以以高回收率获得高纯度的标记化合物。

原理

1606802630883952.png

操作步骤

 

使用注意事项：

1. 用本试剂盒标记的蛋白质的分子量要>50,000。

2. 在标记过程中，IgG或者Biotin-IgG标记物始终存在于过滤管的滤膜上。

3. 如果IgG溶液中含有分子量>10,000的其他蛋白质，如BSA或明胶时，在使用该试剂盒标记前，先要纯化IgG溶液。IgG溶液能够用IgG Purification Kits (不包含于本试剂盒中) 来纯化。

4. 如果IgG溶液含有小的不溶物，离心后取上清液来进行标记。

5. 1管NH2-Reactive Biotin可以标记50-200 ug蛋白质。

标记IgG操作步骤

（1）将100μl WS buffer以及含有100μg IgG的样品溶液加入到过滤管中。a）

（2）8,000-10,000g离心10分钟。b）

（3）将10μl DMSO加入到NH2-reactive biotin中并用移液器吹打使其溶解。c）

（4）将100μl Reaction buffer以及8μl NH2-reactive biotin溶液加入到过滤管中，吹打使其混合。d）

（5）将过滤管放入培养箱中，37℃培养10分钟。

（6）将100μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）除去滤液。

（7）将200μl WS buffer加入到过滤管中，8,000-10,000g离心10分钟，b）重复该步骤一次。

（8）将200μl WS buffer加入到过滤管中吹打10-15次来回收标记产物。e）将该溶液转移到0.5ml试管中，在0-5℃下保存。

1622186808508717.jpg

a) 样品溶液的体积不应超过100ul。如果蛋白质浓度低于0.5mg/ml，重复操作步骤1和2直至总的蛋白质聚积量达到50-200ug。如果聚积过程中滤液的体积超过400ul，则在进行后续的离心操作前应除去滤液。

b) 如果溶液在离心后仍然残留在膜上，可以再离心5min或者适当增加转速直至膜上没有残留液体。

c) NH2-Reactive Biotin在管子的底部，向管底加入10ul DMSO，吹打数次使其溶解。

d) 如果蛋白质的量为200ug，在操作步骤4时加入所有的NH2-Reactive Biotin-DMSO溶液。

e) 并不一定要使用WS Buffer来回收标记产物，可以选择任何适合于该实验的缓冲液来替代。

产品优势

1）生物素标记的产品可以在大约2小时内制备。

2）只需将NH2反应性生物素与目标蛋白混合即可形成稳定的共价键。

3）可以标记分子量为50,000或更高的蛋白质。

4）可以标记50-200μg的蛋白质。

5）可以通过使用过滤管的分离操作以高回收率获得标记物质。

6）生物素标记的产品可以与试剂盒中包含的存储溶液一起存储。

常见问题Q&A

Q1:这个试剂盒可以用于标记其他蛋白质吗？
A:可以。但是如果含有像血清白蛋白或者明胶的蛋白，标记反应可能会受到干扰。用这个试剂盒标记之前，有必要先纯化抗体溶液。如果您想进一步了解纯化过程可以联系我们。
Q2:我只有少量的IgG，可以标记吗？
A:在该试剂盒中，标记所需的IgG量为50至200μg。

在此范围内，性能没有太大差异。

可以用10μg IgG进行标记，但是可能会出现诸如背景升高的问题。
Q3:样品溶液中的共存会影响反应吗？
A:它可能会受到共存类型的影响。确认溶液中包含哪种物质后，根据情况纯化用于标记的蛋白质，并将其用于标记反应。

<聚合物：分子量10,000以上>它可能会影响。即使使用Filtration Tube，也无法去除具有氨基的高分子量化合物，例如BSA和明胶。因此，它被标记并充当荧光杂质。 在反应中使用之前，请执行单独的清除操作。另一方面，如果存在许多高分子杂质，即使没有氨基的化合物也可能导致过滤器堵塞。它可能会干扰标记/纯化操作。

*生物素标记试剂盒-不仅需要对NH2采取相同的预防措施，还需要对其他标记试剂盒采取相同的预防措施。
Q4:标记小分子蛋白质（分子量50,000或以下）的方法。
A:由于该试剂盒中包含的过滤管是分子量截断值为30K的超滤过滤器，因此我们建议使用50,000或分子量更大的蛋白质，并留有余量。

当标记分子量为50,000或更小的蛋白质时，可以通过更换为分子量分数较小的超滤过滤器来标记甚至很小的蛋白质，如下所示。

——————————————

PALL Nanocep 3K产品编号OD003C33

PALL Nanocep 10K产品编号OD010C33

——————————————

离心所需的时间可能比试剂盒中随附的过滤器要长，因此请注意离心时间。
Q5:标记后，离心过滤管，液体仍会留在膜上怎么处理？
A:（1）目视检查隔膜时，如果液体稍微残留在隔膜杯的边缘，请继续执行下面操作。如果倾斜和旋转膜杯时液体残留在膜上或滴下，请以8,000 g离心约15至30分钟。

（2）即使在1）中的离心操作之后，如果液体仍留在膜上，请检查标记物质是否聚集。根据抗体或蛋白质本身的特性，用小分子标记剂进行标记可能会增加抗体或蛋白质的疏水性并使其聚集。如果在标记的物质上观察到团聚，将其转移到另一个微管中一次，离心并使用上清液。 （回收的抗体/蛋白质的量将减少。）

*如果您怀疑过滤器堵塞，可以通过更换新的膜过滤器来解决。

替代品：PALL Nanocep 30K（制造商代码：OD030C33）
Q6:该试剂盒可以标记什么？
A:可以标记分子量为“ 50,000或更高”和反应性氨基（NH2）的化合物（抗体，蛋白质等）。标记样品量为“50-200μg”。

*当考虑标记“ mg”的量时，也可以使用“生物素化试剂盒（Sulfo-OSu）；同仁产品货号：BK01”。

*由于试剂盒附带的过滤管为30K，因此无法纯化低分子量化合物。
Q7:一个IgG分子能标记多少生物素？
A:每个IgG分子平均能标记7至10个生物素。
Q8:标记产物能保存多久？
A:在0-5℃下能够保存2个月。如果需要保存更久，可以添加等量的丙三醇，并在-20℃下 (只要该蛋白可以冷冻) 存放。但是，还要注意样品自身是否稳定。
Q9:能不能用这个试剂盒标记寡核苷酸和寡肽？
A:不能，寡核苷酸和寡肽的分子量太小不能使其保留在过滤膜上。请参照Q4。
Q10:含有生物素标记蛋白质的活细胞怎么处理？
A:我们推荐使用PBS (含2-10% FBS) 制备细胞悬液，保持最佳细胞状态。
Q11:回收缓冲液 (WS Buffer)对活细胞有危害吗？
A:没有。WS Buffer含有表面活性剂，它的浓度控制在对细胞没有毒性的范围内。如果您担心WS Buffer中的添加剂，请您使用常用的缓冲液代替。

参考文献

1) Y. Kubota, Y. Oike, S. Satoh, Y. Tabata, Y. Niikura, T. Morisada, M. Akao, T. Urano, Y. Ito, T. Miyamoto, N. Nagai, G. Y. Koh, S. Watanabe and T. Suda, “Cooperative Interaction of Angiopoietin-like Proteins 1 and 2 in Zebrafish Vascular Development “, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2005, 102(38), 13502.

2) T. Yamabuki, A. Takano, S. Hayama, N. Ishikawa, T. Kato, M. Miyamoto, T. Ito, H. Ito, Y. Miyagi, H. Nakayama, M. Fujita, M. Hosokawa, E. Tsuchiya, N. Kohno, S. Kondo, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Dikkopf-1 as a Novel Serologic and Prognostic Biomarker for Lung and Esophageal Carcinomas”, Cancer Res., 2007, 67, 2517.

3) H. Kohara, Y. Omatsu, T. Suhiyama, M. Noda, N. Fujii and T. Nagasawa, “Development of Plasmacytoid Dendritic Cells in Bone Marrow Stromal Cell niches Requires CXCL12-CXCR4 Chemokine Signaling”, Blood, 2007, 110(13), 4153.

4) N. Ishikawa, A. Takano, W. Yasui, K. Inai, H. Nishimura, H. Ito, Y. Miyagi, H. Nakayama, M. Fujita, M. Hosokawa, E. Tsuchiya, N. Kohno, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Cancer-testis Antigen Lymphocyte Antigen 6 Complex Locus K is a Serologic Biomarker and a Therapeutic Target for Lung and Esophageal Carcinomas”, Cancer Res., 2007, 67(24), 11601.

5) A. Fukuda, T. Goto, K.N. Kuroishi, K.K. Gunjigake, S. Kataoka, S. Kobayashi and K. Yamaguchi, “Hemokinin-1 competitively inhibits substance P-induced stimulation of osteoclast formation and function”, Neuropeptides., 2013, 47, (4), 251.

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7) D. Men, T.T. Zhang, L.W. Hou, J. Zhou, Z.P. Zhang, Y.Y. Shi, J.L. Zhang, Z.Q. Cui, J.Y. Deng, D.B. Wang and X.E. Zhang, “Self-Assembly of Ferritin Nanoparticles into an Enzyme Nanocomposite with Tunable Size for Ultrasensitive Immunoassay”, ACS Nano., 2015, 9, (11), 10852.

8) D. Sugahara, Y. Kobayashi, Y. Akimoto, H. Kawakami, “Mouse intestinal niche cells express a distinct α1,2-fucosylated glycan recognized by a lectin from Burkholderia cenocepacia”, Glycobiology., 2017, 27, (3), 246.

9) H. Sasaki-Iwaoka, M. Ohori, A. Imasato, K. Taguchi, K. Minoura, T. Saito, K. Kushima, E. Imamura, S. Kubo, S. Furukawa and T. Morokata, “Generation and characterization of a potent fully human monoclonal antibody against the interleukin-23 receptor”, Eur. J. Pharmacol.., 2018, 828, 89.

10) K. Kaneshiro, M. Watanabe, K. Terasawa, H. Uchimura, Y. Fukuyama, S. Iwamoto, T.A. Sato, K. Shimizu, G. Tsujimoto and K. Tanaka, “Rapid quantitative profiling of N-glycan by the glycan-labeling method using 3-aminoquinoline/α-cyano-4-hydroxycinnamic acid”, Anal. Chem.., 2012, 84, (16), 7146.

11) K.S. Tan, K. Kulkeaw, Y. Nakanishi, D. Sugiyama, “Expression of cytokine and extracellular matrix mRNAs in fetal hepatic stellate cells”, Genes Cells., 2017, 22, (9), 836.

12) M. Tahara, S. Ohno, K. Sakai, Y. Ito, H. Fukuhara, K. Komase, M.A. Brindley, P.A. Rota, R.K. Plemper, K. Maenaka and M. Takeda, “The receptor-binding site of the measles virus hemagglutinin protein itself constitutes a conserved neutralizing epitope”, J. Virol.., 2013, 87, (6), 3583.

13) M. Takahashi, Y. Ishida, D. Iwaki, K. Kanno, T. Suzuki, Y. Endo, Y. Homma and T.  Fujita, “Essential role of Mannose-binding lectin-associated serine protease-1 in activation of the complement factor D”, J. Exp. Med.., 2010, 207, (1), 29.

14) N. Hosen, Y. Matsunaga, K. Hasegawa, H. Matsuno, Y. Nakamura, M. Makita, K. Watanabe, M. Yoshida, K. Satoh, S. Morimoto, F. Fujiki, H. Nakajima, J. Nakata, S. Nishida, A. Tsuboi, Y. Oka, M. Manabe, H. Ichihara, Y. Aoyama, A. Mugitani , T. Nakao, M. Hino, R. Uchibori, K. Ozawa, Y. Baba, S. Terakura, N. Wada, E. Morii, J. Nishimura, K. Takeda, Y. Oji, H. Sugiyama, J. Takagi and A. Kumanogoh, “The activated conformation of integrin β7 is a novel multiple myeloma-specific target for CAR T cell therapy”, Nat. Med.., 2017, 23, (12), 1436.

15) R. Nishino, A. Takano, H. Oshita, N. Ishikawa, H. Akiyama, H. Ito, H. Nakayama, Y. Miyagi, E. Tsuchiya, N. Kohno, Y. Nakamura and Y. Daigo, “Identification of Epstein-Barr virus–induced gene 3 as a novel serum and tissue biomarker and a therapeutic target for lung cancer”, Clin. Cancer Res.., 2011, 17, (19), 6272.

16) T. Hiono, A. Matsuda, T. Wagatsuma, M. Okamatsu, Y. Sakoda and A. Kuno, “Lectin microarray analyses reveal host cell-specific glycan profiles of the hemagglutinins of influenza A viruses”, Virology., 2019, 527, 132.

17) T. Oshima, S. Sato, J. Kato, Y. Ito, T. Watanabe, I. Tsuji, A. Hori, T. Kurokawa and T. Kokubo, “Nectin-2 is a potential target for antibody therapy of breast and ovarian cancers”, Mol. Cancer., 2013, 12, (60), .

18) T. Yoshida, N. Shiraki, H. Baba, M. Goto, S. Fujiwara, K. Kume and S. Kume, “Expression patterns of epiplakin1 in pancreas, pancreatic cancer and regenerating pancreas”, Genes Cells., 2008, 13, (7), 667.

19) X. Piao, T. Ozawa, H. Hamana, K. Shitaoka, A. Jin, H. Kishi and A. Muraguchi, “TRAIL-receptor 1 IgM antibodies strongly induce apoptosis in human cancer cells in vitro and in vivo”, Oncoimmunology., 2016, 5, (5), e1131380.

20) Y. Shimazaki, Y. Kohno, “Successive analysis of antigen trapping and enzymatic digestion on membrane-immobilized avidin”, Anal. Biochem.., 2012, 422, (1), 55.

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DTCS Na试剂货号：D465 N-(二硫代羧基)肌氨酸,二钠盐,二水合物 DTCS Na

发表于由
DTCS Na试剂货号：D465
N-(二硫代羧基)肌氨酸,二钠盐,二水合物
DTCS Na
商品信息
储存条件：0-5度保存,避光
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分子式：

C4H5NNa2O2S2･2H2O

分子量：

245.23

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Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号：G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

发表于由
Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光，防潮
运输条件：室温

特点：

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

产品文献
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1set
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试剂盒内含
产品概述
原理
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

 

试剂盒内含

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产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成，而且还作为神经递质发挥重要作用，谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道，胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能，而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡，近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量，谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外，本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

       本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外，本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液，可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

image.png

操作步骤

　只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中，加入试剂后孵育即可。

image.png

实验例

标准曲线的实验例：

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高，则可以通过稀释样品进行检测。

1609314887231458.png

谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例：

将A549细胞接种在6孔板中，用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果，培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低，而谷氨酸浓度则升高。

image.png

铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白，抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡，即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中，确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示，通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少，抑制胱氨酸的摄取，从而导致谷胱甘肽的量减少。

image.png

Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例：

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后，确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示，SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少，细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。1612749142364629.png

<使用产品>

· 细胞内GSH：GSSG/GSH Quantification Kit II（货号：G263）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ROS：ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-（货号：R252）⬅电脑浏览点击品名（手机浏览点击此处）

· 细胞内ATP：ATP Assay Kit-Luminescence（货号：A550）

· 细胞内α-KG：α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric（货号：K261）

<实验条件>

细胞：A549细胞 (1 x 106 cells) 　药物处理时间：48 h

1622087224726487.png

1622087244529743.png1622087268638819.png

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1：一个试剂盒可以检测样品的数量是多少？
A1：制备标准曲线和样品(n=3)，可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

1609381817863934.png
Q2：配制后的Working solution可以保存多久？
A2：Working solution无法保存，需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性，所以配制后请避光。

※Working solution配制后，避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下，溶液的颜色会变成褐色。
Q3：是否可以定量D-Glutamate？
A3：该试剂盒是用于L-Glutamate定量，无法定量D-Glutamate。
Q4：是否可以检测含有还原性物质的样品？
A4：如果样品中含有还原性的物质，则WST染料也会发生显色，此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况，可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5：待测样品可以保存吗？
A5：我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是，在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。
Q6：为什么我的样品孔没有显色？
A6：样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l)，谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释，则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例，从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。
Q7：是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测？
A7：也可以使用490 nm的滤光片。但是，吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

1622087017370785.png

参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

 

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

发表于由
Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号：I291
Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒
Iron Assay Kit -Colorimetric-
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：室温

特点：

● 适合组织检测

● 配有标准品，可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

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产品文献
选择规格：
50tests
现货
 
组织/细胞检测
试剂盒配套计算器（点击查看下载）
活动进行中
试剂盒内含
产品概述
原理
金属离子选择性
加标回收实验
实验例
参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.3.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.4.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

NO.5.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽

 

试剂盒内含

1622442415301288.png

产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一，生物体内铁元素的含量虽少，但有着重要的生理作用。近年来，随着铁死亡概念的提出，细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒 是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒 相比 ，可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的 吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度，即可确定组织样品中的二价铁含量。同时，还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁，以确定总铁含量，进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

1622441352106908.png

金属离子选择性

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加标回收实验

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实验例

组织样品中的Fe2+和 Fe3+的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织 。

2. 加入 1 ml冷 PBS，移液器吹打 20次， Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min，去除上清 。

3. 将样品转移至研钵，加入液氮充分研磨成粉末后，加入 1.3 ml Assay Buffer，回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。（为防止样品温度上升，每 1 min间隔置于冰浴上 20 s）。

5. 16,000 g离心 10 min，除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液，每管分别加入 400 μl上清液，制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管 中加入 Reducer solution。 （参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl）。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2，加入至 96孔板中 37 培养 60 min，检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”，自动计算 出二价铁和三价铁浓度。

image.png

1622614667979843.png

参考文献

No.       检测对象                                           引用 (含链接) 影响因子
1 组织

(小鼠肿瘤组织)

 H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Self-assembled FeS-based cascade   bioreactor with enhanced tumor penetration and synergistic treatments to trigger   robust cancer immunotherapy”, Acta Pharm. Sin. B, 2021,   doi:10.1016/j.apsb.2021.05.005. 7.097
2 细胞

Kasumi-1

(人急性白血病细胞)

 L.   Zhang, Y. Song, K. Cao, Y. Du, M. Han, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Hepcidin-Based   Nanocomposites for Enhanced Cancer Immunotherapy by Modulating Iron   Export-Mediated N6-Methyladenosine RNA Transcript”, Adv. Funct.   Mater., 2021, doi: 10.1002/adfm.202107195. 18.808
3 细胞

(II型肺泡细胞)

 H.   Cheng, D. Feng, X. Li, L. Gao, S. Tang, W. Liu, X. Wu, S. Yue, C. Li, Z. Luo,   “Iron   deposition-induced ferroptosis in alveolar type II cells promotes the   development of pulmonary fibrosis”, Biochim. Biophys. Acta,   Mol. Basis Dis., 2021, doi: 10.1016/j.bbadis.2021.166204. 5.187
4 细胞

MV4-11; Kasumi-1; NB4

(白血病细胞)

 Y.   Du, M. Han, K. Cao, Q. Li, J. Pang, L. Dou, S. Liu, Z. Shi, F. Yan and S.   Feng, “Gold   Nanorods Exhibit Intrinsic Therapeutic Activity via Controlling N6‑Methyladenosine   Based Epitranscriptomics in Acute Myeloid   Leukemia”, ACS Nano, 2021, doi:   10.1021/acsnano.1c05547. 15.881
5 组织

(人软骨组织)

 H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X.   Li, “Contribution   of ferroptosis and GPX4’s dual functions to osteoarthritis progression”,   EBioMedicine, 2022, doi: 10.1016/j.ebiom.2022.103847. 8.143
6 组织

(小鼠肺、肝脏、肾脏)

 T.   Wu, X. Wang, M. Chen, X. Zhang, J. Zhang, J. Cheng, L. Kong, M. Tang,”Respiratory exposure to graphene   quantum dots causes fibrotic effects on lung, liver and kidney of mice”,   Food Chem. Toxicol., 2022, doi: 10.1016/j.fct.2022.112971. 6.023
7 组织

(小鼠海马组织)

 T.   Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, “Nitrogen‑doped   graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium   homeostasis in microglia”, Part. Fibre Toxicol., 2022,   doi: 10.1186/s12989-022-00464-z. 9.4
8 组织

(宫颈管粘膜)

 T.   Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and   R. Ju, “Persistent   ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and   oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV   infection”, 2022, Cell Death Discovery, doi:   10.1038/s41420-022-01013-5. 5.241
9 组织

(小鼠肺组织)

 M.   Li, L. Fu, B. Lv, Y. Xiang, H. Xiang, D. Xu, H. Zhao, “Arsenic   induces ferroptosis and acute lung injury through mtROS-mediated   mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane dysfunction”,   Ecotoxicol. Environ. Saf., 2022, doi: 10.1016/j.ecoenv.2022.113595. 6.291
10 细胞

BEL-7402, SMMC-7721

(人肝癌细胞系)

 L.   Guan, F. Wang, M. Wang, S. Han, Z. Cui, S. Xi, H. Xu and S. Li, “Downregulation of HULC   Induces Ferroptosis in Hepatocellular Carcinoma via Targeting of the   miR-3200-5p/ATF4 Axis”, 2022, Oxid. Med. Cell.   Longevity, doi: 10.1155/2022/9613095. 6.543
11 组织

(小鼠肺部组织)

 Z.   Zeng, H. Huang, J. Zhang, Y. Liu, W. Zhong, W. Chen, Y. Lu, Y. Qiao, H. Zhao,   X. Meng, F. Zou, S. Cai, H. Dong, “HDM induce airway   epithelial cell ferroptosis and promote inflammation by activating ferritinophagy in asthma”,   FASEB J., 2022, doi: 10.1096/fj.202101977RR. 5.191
12 组织

(大豆叶片)

 Y.   Cheng, H. Zhang, W. Zhu, Q. Li, R. Meng, K. Yang, Z. Guo, Y. Zhai, R. Ji, H.   Peng, D. Dou, M. Jing, “Ferroptosis   induced by the biocontrol agent Pythium oligandrum enhances   soybean resistance to Phytophthora sojae”,   Environ. Microbiol., doi: 10.1111/1462-2920.16248. 5.476
13 组织

(小鼠睾丸组织)

 Y.   Zhao, H. Zhang, J. Cui, J. Wang, M. Chen, H. Wang, X. Li, J. Li, “Ferroptosis is   critical for phthalates driving the blood-testis barrier dysfunction via   targeting transferrin receptor”, Redox Biol., 2022,   doi: 10.1016/j.redox.2022.102584. 10.787
14 组织

(小鼠结肠组织)

 F.   Yang, Y. Chen, Y. Xiao, H. Jiang, Z. Jiang, M. Yang, M. Li, Y. Su, Z. Yan, Y.   Lin, D. Li, “pH-sensitive   Molybdenum (Mo)-based polyoxometalate nanoclusters have therapeutic efficacy   in Inflammatory Bowel disease by counteracting ferroptosis”, Pharmacol.   Res., 2023, doi: 10.1016/j.phrs.2023.106645. 10.334
15 组织

(小鼠肺部组织)

 W.   Tang, J. Qin, Y. Zhou, W. Wang, F. Teng, J. Liu, L. Yi, J. Cui, X. Zhu, S.   Wang, J. Dong, Y. Wei, “Regulation of   ferroptosis and ACSL4-15LO1 pathway contributed to the anti-asthma effect of   acupuncture”, Int. Immunopharmacol., 2023, doi:   10.1016/j.intimp.2022.109670. 5.714
16 组织

(小鼠心脏组织)

 H.   Hu, L. Li, H. Zhang, Y. Zhang, Q. Liu, M. Chen, J. Ning, Y. Pang, W. Hu, Y. Niu,   R. Zhang, “Mechanism   of YY1 mediating autophagy dependent ferroptosis in PM2.5 induced cardiac fibrosis”, Chemosphere, 2023,   doi: 10.1016/j.chemosphere.2023.137749. 8.943
17 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

 L.   Kang, D. Wang, T. Shen, X. Liu, B. Dai, D. Zhou, H. Shen, J. Gong, G. Li, Y.   Hu, P. Wang, X. Mi, Y. Zhang, X. Tan, “PDIA4 confers   resistance to ferroptosis via induction of ATF4/SLC7A11 in renal cell   carcinoma”, Cell Death Dis., 2023, doi:   10.1038/s41419-023-05719-x. 9.685
18 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

 C.   Dong, C. Song, Z. He, Q. Song, T. Song, J. Liu, Y. Xiong, X. Su, J. Zhou, X.   Yang, W. Liao, “Protective   efficacy of Schizandrin B on ameliorating   nephrolithiasis via regulating GSK3β/Nrf2 signaling-mediated ferroptosis in vivo   and in vitro”, 2023, Int. Immunopharmacol.,   doi:10.1016/j.intimp.2023.110042. 5.714
19 组织

(小鼠肺部组织)

 B.   Guo, Z. Zuo, X. Di, Y. Huang, G. Gong, B. Xu, L. Wang, X. Zhang, Z. Liang, Y.   Hou, X. Liu, Z. Hu, “Salidroside   attenuates HALI via IL-17A-mediated ferroptosis of alveolar   epithelial cells by regulating Act1-TRAF6-p38 MAPK pathway”, 2022,   Cell Commun. Signaling, doi: 10.1186/s12964-022-00994-1. 7.525
20 组织

(小鼠睾丸组织)

 J.   Ding, B. Lu, L. Liu, Z. Zhong, N. Wang, B. Li, W. Sheng, Q. He, “Guilu-Erxian-Glue   alleviates Tripterygium wilfordii polyglycoside-induced oligoasthenospermia in rats by   resisting ferroptosis via the Keap1/Nrf2/GPX4 signaling pathway”, Pharm.   Biol., 2023, doi:10.1080/13880209.2023.2165114. 3.889
21 细胞

(人髓核细胞)

 X.   Yang, Y. Chen, J. Guo, J. Li, P. Zhang, H. Yang, K. Rong, T. Zhou, J. Fu, J.   Zhao, “Polydopamine   Nanoparticles Targeting Ferroptosis Mitigate Intervertebral Disc Degeneration   Via Reactive Oxygen Species Depletion, Iron Ions Chelation, and GPX4   Ubiquitination Suppression”, Adv. Sci., 2023, doi:10.1002/advs.202207216. 17.521
22 组织

(小鼠心脏组织)

 J.   Pan, W Xiong, A. Zhang, H. Zhang, H. Lin, L. Gao, J. Ke, S. Huang, J. ZHang,   J. Gu, A. Chang, C. Wang, “The   Imbalance of p53–Park7 Signaling Axis Induces Iron Homeostasis Dysfunction in   Doxorubicin-Challenged Cardiomyocytes”, Adv. Sci, 2023,   doi:10.1002/advs.202206007. 17.521
23 细胞

(H9c2, 4T1)

 T.   Chen, Y. Qin, Y. Li, Y. Li, J. Luo, L. Fan, M. Feng, Z. Wang and Y. Zhao, “Chiral Polymer Micelles   Alleviate Adriamycin Cardiotoxicity via Iron Chelation and Ferroptosis   Inhibition”, Adv. Funct. Mater., 2023, doi:10.1002/adfm.202300689. 19.923
24 细胞

(乳腺癌细胞)

 Z.   ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J.   Tang., “GATA3   mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction   in breast cancer cells”, Drug Resistance Updates, 2023,   doi:10.1016/j.drup.2023.100974. 22.841
25 组织

（the brains of 3 × Tg-AD mice）

 Xinlu Li, Jianfeng Chen, Wennuo Feng ,Chao Wang, Minyu Chen, Yifan Li, Jinghong Chen, Xinwei Liu, Qiong Liu, Jing Tian,“Berberine ameliorates iron levels and ferroptosis in the brain of 3 × Tg-AD mice”2023, PHYTOMEDICINE, doi:10.1016/j.phymed.2023.154962

 

 7.9
26 组织

（Testicular tissues）

 Lipeng Li , Zijie Pei , Ruiting Wu , Yaling Zhang , Yaxian Pang , Huaifang Hu , Wentao Hu , Zihan Geng , Tengfei Feng , Yujie Niu , Guimin Hao , Rong Zhang“FDX1 regulates leydig cell ferroptosis mediates PM2.5-induced testicular dysfunction of mice”，Ecotoxicology and Environmental Safety，2023，doi.org/10.1016/j.ecoenv.2023.115309 6.8
27 细胞（macrophage） Wenlin Yuan , Yuting Yang , Yingming Wei , Xufei Yu , Jiaqi Bao , Jiahui Zhong , Zhongxiu Wang , Lili Chen“Macrophage ferroptosis promotes MMP2/9 overexpression induced by hemin in hemorrhagic plaque”，Thromb Haemost，2023，doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110916 6.7
28 细胞（HT-22） Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”，Antioxidants，2023，doi.org/10.3390/antiox12122097 7.0