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氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II G263
氧化应激与自由基
品名货号用途
| 氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II | G263 | 氧化型/还原型谷胱甘肽定量 |
| Total Glutathione Quantification Kit试剂盒 | T419 | 总谷胱甘肽检测 |
| DTNB试剂 | D029 | 氧化应激检测 |
| 2-PDS试剂 | P016 | 总谷胱甘肽GSH检测 |
| 4-PDS试剂 | P017 | 总谷胱甘肽GSH检测 |
细胞中的氧化应激是由代谢、电离辐射和与DNA直接相互作用的致癌化合物产生的ROS导致的。在代谢的过程中，小部分的氧由于一个电子的还原变成超氧阴离子，接着超氧阴离子被超氧化物岐化酶 (SOD) 转变成氧气和过氧化氢。过氧化氢由过氧化氢酶或谷胱甘肽过氧化物酶还原成水。然而如果过氧化氢并没有被这些酶完全还原，当它被铁(Fenton反应)氧化将产生反应性极强的羟自由基。羟自由基还可以由紫外线照射产生或直接电离辐射水产生。羟自由基可以与脂反应产生脂质过氧化物。然而并非所有ROS都是有害的。次氯酸盐离子是一种由中性粒细胞的髓过氧化物酶产生的过氧化氢衍生而来的ROS，它具有杀菌活性。NO也称为内皮来源的舒张因子，它是由NO合成酶产生的。不过NO和超氧阴离子反应可产生具有细胞毒性的过氧亚硝基阴离子。ROS和活性氮化合物在生物系统中具有许多不同的活性。相应地好氧生物会产生防止氧化应激的防御机制。最近在对防御机制以及氧化损伤与疾病或老化过程之间关系的研究中，氧化应激已成为许多研究的焦点。最终已发展出许多用于检测ROS相关或ROS来源的物质的方法，这些物质包括超氧阴离子、超氧化物岐化酶、谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶、谷胱甘肽过氧化物酶、DNA损伤、8-氧基鸟嘌呤、8-硝基鸟嘌呤和蛋白质羰基等。
特点：
● 细胞、组织样品均可检测
● 操作更加简单
● 试剂盒稳定性高
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概述
谷胱甘肽 (γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸) 是体内的一种三肽化合物，它参与抗氧化和药物代谢的过程，还是谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶、巯基转移酶等的底物。谷胱甘肽通常以还原型状态(GSH) 存在，但是GSH在氧化应激的作用下会转化为氧化型状态 (GSSG)。因此GSH/GSSG的比值被认为是氧化应激研究的一个重要指标。
优势
1）可以进行氧化型谷胱甘肽（GSSG）、还原型谷胱甘肽（GSH）的分类定量。
2）操作简单，且可以同时检测多个样品。
操作步骤
详见说明书
注意事项
试剂开封后各溶液的保存方法及保存时间
Substrate Working Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
GSH Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
GSSG Standard Solution：溶解后在-20℃可保存2个月
Enzyme Working Solution：稀释后在4℃可保存2个月
Coenzyme Working Solution：用超纯水溶解后在-20℃可保存2个月
Masking Solution：用乙醇溶解后在4℃可保存2个月
其他材料
酶标仪（405或415 nm）、20 µl和200 µl移液器，多通道移液器、 96孔板、 5-磺基水杨酸 (SSA) 溶液 （点击购买）、 乙醇
常见问题Q&A
| Q1:如何计算GSH浓度？ |
| A1:根据标准曲线得到总谷胱甘肽（GSH+GSSG）的浓度，使用以下公式计算GSH浓度。 GSH浓度=总谷胱甘肽浓度-GSSG浓度×2 GSSG（氧化型谷胱甘肽）相当于两分子的GSH（还原型谷胱甘肽）。 因此，通过将GSSG浓度加倍从而得到GSH浓度。 |
| Q2:是否可以通过添加Masking Reagent来掩盖源自GSSG的GSH？ |
| A2:加入酶/辅酶之后，由GSSG产生的GSH先与DTNB反应，而还原为GSSG。GSSG生成的GSH不会被屏蔽。 |
| Q3:本试剂盒与谷胱甘肽定量试剂盒（货号：T419）有什么区别？ |
| A3:本试剂盒可以分别检测GSSG和GSH，而总谷胱甘肽定量试剂盒（T419）则无法实现。作为氧化应激指标的GSH和GSSG的比例更加受引研究人员关注。 |
| Q4:显色效果弱怎么办？ |
| A4:考虑以下原因：
原因1）本试剂盒的测量范围是0.5 μmol/l及以上，测量样品中所含的谷胱甘肽的量可能小于该值。 对策）本试剂盒无法测量不符合测量范围的样品，请考虑其他方法检测。例如HPLC方法。 也可以通过降低预处理的稀释率或增加样品量来增加检测样品的浓度。 注意：为了加强显色效果而延长显色时间，则无法获得标准曲线。 原因2）可能含有抑制荧光的物质。例如：与SH基团反应的化合物（马来酰亚胺）会干扰测量结果。 对策）由于无法通过预处理等去除这些化合物，因此请在不含有此类物质的情况下再检测。 原因3）反应中的pH值低，有可能抑制显色。 对策）1、测量时，请确保SSA浓度为1％或更低。当SSA浓度为1％或更高时，会抑制显色效果。 2、如果含有其他酸性物质，则在测量前用三乙醇胺等将其中和至pH 7，或将它们稀释至约1％或更低的酸浓度下进行反应。 |
| Q5:该试剂盒可以检测多少样品？ |
| A5:本试剂盒可以进行100次检测（使用1块96孔板） 当n=3时，可以检测9个样品。（样品未染色） 如果仅测量谷胱甘肽的总量，可以检测25个样品。 样品的布局例：通道1～6是GSSG浓度测定，通道7～12是总谷胱甘肽浓度测定。
|
| Q6:样品中有大量谷胱甘肽，如何稀释样品？ |
| A6:用0.5％5-磺基水杨酸（SSA）水溶液稀释。 测量时样品中的SSA浓度应为0.5至1％。 如果SSA浓度高，则反应过程中的pH值会呈酸性，这可能会影响吸光度。 |
| Q7:通过测量GSSG与GSH的比例可以得到什么？ |
| A7:谷胱甘肽通常在体内以还原形式（GSH）存在， 因为它通过刺激（例如氧化应激）转化为氧化形式（GSSG） GSH与GSSG之比是氧化应激的指标。 |
参考文献
1) ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development,Cancer Cell,2014,26, 331–343
2) Rhythmic oscillations of the microRNA miR-96-5p play a neuroprotective role by indirectly regulating glutathione levels,Nature Communications,2014,5,3823
3) Phospholipid methylation controls Atg32-mediated mitophagy and Atg8 recycling,The EMBO Journal,2015,34(21),2703–2719
4) Administering xCT inhibitors based on circadian clock improves antitumor effects,Cancer Research,2017,77(23),6603-6613
5) Cold stress-induced ferroptosis involves the ASK1-p38 pathway,EMBO reports,2017,18(11),2067-2078
6) Chloroplast DNA Replication Is Regulated by the Redox State Independently of Chloroplast Division in Chlamydomonas reinhardtii,Plant Physiology,2013,161,2102–2112
7) Oxidative stress inhibits healthy adipose expansion through suppression of SREBF1-mediated lipogenic pathway,Diabetes,2018,67(6),1113-1127
8）Endogenous reactive oxygen species cause astrocyte defects and neuronal dysfunctions in the hippocampus: a new model for aging brain,Aging Cell,2017,16,39–51
9) Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice,Antioxidants & Redox Signaling,2014,20(16),2606-2620
10) Skeletal muscle-specific eukaryotic translation initiation factor 2α phosphorylation controls amino acid metabolism and fibroblast growth factor 21-mediated non-cell-autonomous energy metabolism,
The FASEB Journal,2016,30(2),798-812
11) Riluzole exerts distinct antitumor effects from a metabotropic glutamate receptor 1-specific inhibitor on breast cancer cells,Oncotarget,2017,8(27),44639-44653
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