DAB是在免疫组化中最常用的氧化型过氧化物酶显色底物之一。在过氧化氢和过氧化酶存在时，DAB被氧化成棕色的显色底物。这种棕色的显色底物是苯胺黑类化合物，可以牢固的沉积在细胞膜或组织上的过氧化物酶的周围。市面上销售的DAB往往由于生产和保存期间的氧化问题呈褐色。而同仁化学研究所的提供的高纯度DAB的性状呈白色或略带红色的灰色粉末，可以得到灵敏度更高的染色效果。

1. 用1 ml PBS溶解9 mg DAB制备成100 x DAB solution。

2. 用1 ml PBS混合5 μl 的30%过氧化氢酶溶液制备成200 x H₂O₂ solution。

3. 向1 ml PBS中加入10 μl 的100 x DAB solution和5 μl的 200 x 的H₂O₂ solution制成Staining soluiton¹⁾。

4. 将Staining solution加入到染色容器中并将样品在室温下培养1 h²⁾。

5. 用PBS清洗样品数次使染色反应停止。

1) Staining solution不稳定，请现配现用。

2) 为了获得更好的染色效果，可以在加入Staining solution之前预先用0.09 mg DAB/PBS溶液培养样品10 min。

1) A. B. Novikoff, et al., Studies on Microperoxisomes V. Are Microperoxisomes Ubiquitous in Mammalian Cells. J Histochem Cytochem. 1973;21:737.

2) V. Herzog, et al., A New Sensitive Colorimetric Assay for Peroxidaase Using 3, 3 EDiaminobenzidine as Hydrogen Donor. Anal Biochem. 1973;55:554.

3) H. Yamada, et al., Improvement of Technique of Immunohistochemical Demonstraction of Bioactive Substances in the Central Nervous System. Acta Histochem Cytochem. 1987;20:629.

4) K. L. Cheng, Determination of Traces of Selenium 3,3 EDiaminobenzidine as Selenium(IV) Organic Reagent. Anal Chem. 1956;28:1738.

规格：

性状：红色或略带红色的灰色粉末

纯度(滴定法)：≥97.0%(干燥固态)

水中溶解度：通过检测

Tris缓冲液中溶解度：通过检测

吸光度(硒化合物)：≧ 0.500 (420 nm附近)

干燥失重：≤5.0%

硫酸盐灰分：≤0.05%

IR谱图：一致

操作和储存条件：

0-5℃，避光

危险/有害性标志