Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18 细胞活性(ATP检测)
ATP Assay Kit-Luminescence
商品信息
储存条件:0-5°C
运输条件:常温

特点:

 

● 操作简便,检测仅需10分钟

● 灵敏度高,微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

选择规格:
200 tests
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不可定量检测(无标准品)
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活动进行中
产品原理
实验注意事项
实验操作步骤
参考文献

产品解说

 

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

 

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源,在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用,甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸(ATP)的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板,10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外,本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

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图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法:多功能酶标仪

检测结果:化学发光值

image.png

注意:该试剂盒只能比较实验组对照组结果,但是不能完全定量检测

(试剂盒内不含标准品)

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中,每孔加入 100 μl 细胞悬液(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl 细胞悬液)。

*为了获得更准确的检测结果,建议每个实验组至少设置三个复孔(n=3)。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl Working solution)。

*气泡会对实验结果产生影响,如果孔中有气泡请尽量清除。 使用电动移液器时,建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后,建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果,如果必须在 有光源的地方震荡,建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能,请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下,避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性,建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值(RLU)。

CCK-L,仪器检测实验例,详见如下:(实验例仅供参考)

细胞内ATP活性检测(CCK-L)的仪器设置

参考文献

编号 文献 IF
1 Impact   of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy
on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021,   6(2):100094
2021 6.5
2 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells   ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
3 An Fc-muted bispecific antibody targeting PD-L1 and 4-1BB induces antitumor immune activity in colorectal cancer without systemic toxicity,Cellular & Molecular Biology Letters, 2023,doi.org/10.1186/s11658-023-00461-w 2023 8.3

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18

Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒货号:CK18
细胞活性(ATP检测)
ATP Assay Kit-Luminescence
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特点:

 

● 操作简便,检测仅需10分钟

● 灵敏度高,微量细胞也可检测

● 悬浮细胞和原代细胞适合

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实验操作步骤
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NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

NO.3.    Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-    细胞凋亡检测

NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

产品原理

ATP是生物体内最直接的能量来源,在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用,甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸(ATP)的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板,10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外,本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

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图1. Cell Counting Kit Luminescence 检测原理

实验注意事项

检测方法:多功能酶标仪

检测结果:化学发光值

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注意:该试剂盒只能比较实验组对照组结果,但是不能完全定量检测

(试剂盒内不含标准品)

实验操作步骤

1. 白色 96 孔板中,每孔加入 100 μl 细胞悬液(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl 细胞悬液)。

*为了获得更准确的检测结果,建议每个实验组至少设置三个复孔(n=3)。

2. 各孔中加入 100 μl Working solution(白色 384 孔板,每孔加入 25 μl Working solution)。

*气泡会对实验结果产生影响,如果孔中有气泡请尽量清除。 使用电动移液器时,建议使用反向吸液模式(RevPIP Mode)。

*加入 Working solution 后,建议用酶标仪的振荡混匀功能震荡 2 min。由于光照会影响检测结果,如果必须在 有光源的地方震荡,建议用铝箔纸包覆孔板。

3. 将孔板静置于温度设定在 25℃的酶标仪内 10 min。

*如果酶标仪没有温度设定的功能,请将孔板至于 25℃培养箱或 25℃左右室温下,避光培养 10 min。

*为了保证发光信号的稳定性,建议此处的培养时间不要低于 10 min。

4. 检测发光值(RLU)。

CCK-L,仪器检测实验例,详见如下:(实验例仅供参考)

细胞内ATP活性检测(CCK-L)的仪器设置

参考文献

编号 文献 IF
1 Impact   of the combined timing of PD-1/PD-L1 inhibitors and chemotherapy
on the outcomes in patients with refractory lung cancer, ESMO Open,2021,   6(2):100094
2021 6.5
2 SIRT3-Mediated   SOD2 and PGC-1α Contribute to Chemoresistance in Colorectal Cancer Cells   ,Annals of Surgical Oncology,2021, 28(8):4720-4732 2021 5.3
3 An Fc-muted bispecific antibody targeting PD-L1 and 4-1BB induces antitumor immune activity in colorectal cancer without systemic toxicity,Cellular & Molecular Biology Letters, 2023,doi.org/10.1186/s11658-023-00461-w 2023 8.3

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Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号:C548 细胞周期检测试剂盒-深红色

Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号:C548
细胞周期检测试剂盒-深红色
Cell Cycle Assay Solution Deep Red
商品信息
储存条件:0-5 ℃
运输条件:常温

特点:

·检测时间短

·固定和不固定都可以

·悬浮细胞和贴壁细胞都可以

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选择规格:
50 tests
价格:
期货 
 
细胞周期
产品概述
产品特性
实验案例
常见问题Q&A
参考文献

产品概述

  细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义

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产品特性

产品特点:检测时间短

碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。

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实验案例

对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期

用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。

1607484701403788.png

示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化

阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09)

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常见问题Q&A

Q1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗?
A1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以使用。
Q2:胰酶会影响检测吗?
A2:如果实验中有胰酶残留,会影响检测;

如果回收细胞时使用胰酶,请确保按照方案进行清洁操作,去除残留胰酶。

Q3:需要固定细胞吗?
A3:固定和不固定细胞都可以。
Q4:如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存?
A4:都可以,本公司实际对比案例:

分别在保存固定细胞前后做了染色实验,检测结果没有差异

・将固定细胞冷藏(4℃)后保存1周,根据使用说明书对细胞进行染色。

・根据使用说明书对固定细胞进行染色,将细胞冷藏(4℃)后保存1周。

*冷冻保存细胞的话有可能会沉淀不溶物,所以不推荐冷冻保存。

Q5:用Cell Cycle Assiay  Soluton染色后,为了除去过量的试剂可以清洗细胞吗?
A5:不推荐染色后清洗细胞。

由于洗涤时的离心操作,有可能影响细胞周期解析的实验结果。

Q6:做流式检测时,应该注意哪些方面呢?
A6:流式检测时,需要在合适的条件下进行测检测。

以下列举了一些失败的案例。

1、检测通道选择不合适

例如一般的细胞周期检测都会使用PI(PE)通道,但是我们试剂盒选择PI通道并不能得到最适结果,请参照一下波段选择最适通道:

2、检测时电压过高(或过低)。

当流式检测时电压过高(或过低)时,都无法得到最适结果。

请通过直方图将G0/G1期、S期、G2/M期调整为清晰的测量电压。

3、细胞数量选择不合适

例如流式检测是圈门选择不恰当,会导致结果不好。

分析时请对选择所有细胞。

参考文献

1)細胞(HCAECs)

N. Sasaki, Y. Itakura and M. Toyoda, “Rapamycin promotes endothelial-mesenchymal transition during stress-induced premature senescence through the activation of autophagy”, Cell Commun. Signal, 2020, 18(1), 43

2)細胞(ARPE-19)

T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, “Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

2)細胞(MIA PaCa-2)

N. Sasaki, F. Gomi, F. Hasegawa, K. Hirano, M. Fujiwara, M. Toyoda and T. Ishiwata, “Characterization of the metastatic potential of the floating cell component of MIA PaCa-2, a human pancreatic cancer cell line”, Biochem. biophys. res. commun, 2020, 522(4), 881-888

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商品信息
储存条件:0-5 ℃
运输条件:常温

特点:

·检测时间短

·固定和不固定都可以用

·悬浮细胞核贴壁细胞都可以用

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50 tests
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细胞周期
产品概述
产品特性
实验案例
常见问题Q&A

产品概述

细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义

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产品特性

产品特点:检测时间短

碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。

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实验案例

对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期

用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。

1607484701403788.png

示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化

阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09)

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常见问题Q&A

Q1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗?
A1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以使用。
Q2:胰酶会影响检测吗?
A2:如果实验中有胰酶残留,会影响检测;

如果回收细胞时使用胰酶,请确保按照方案进行清洁操作,去除残留胰酶。

Q3:需要固定细胞吗?
A3:固定和不固定细胞都可以。
Q4:如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存?
A4:都可以,本公司实际对比案例:

分别在保存固定细胞前后做了染色实验,检测结果没有差异

・将固定细胞冷藏(4℃)后保存1周,根据使用说明书对细胞进行染色。

・根据使用说明书对固定细胞进行染色,将细胞冷藏(4℃)后保存1周。

*冷冻保存细胞的话有可能会沉淀不溶物,所以不推荐冷冻保存。

Q5:用Cell Cycle Assiay  Soluton染色后,为了除去过量的试剂可以清洗细胞吗?
A5:不推荐染色后清洗细胞。

由于洗涤时的离心操作,有可能影响细胞周期解析的实验结果。

Q6:做流式检测时,应该注意哪些方面呢?
A6:流式检测时,需要在合适的条件下进行测检测。

以下列举了一些失败的案例。

1、检测通道选择不合适

例如一般的细胞周期检测都会使用PI(PE)通道,但是我们试剂盒选择PI通道并不能得到最适结果,请参照一下波段选择最适通道:

2、检测时电压过高(或过低)。

当流式检测时电压过高(或过低)时,都无法得到最适结果。

请通过直方图将G0/G1期、S期、G2/M期调整为清晰的测量电压。

3、细胞数量选择不合适

例如流式检测是圈门选择不恰当,会导致结果不好。

分析时请对选择所有细胞。

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Cell Count Normalization Kit试剂盒货号:C544
细胞计数标准化试剂盒
Cell Count Normalization Kit
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温

特点:

● 荧光强度与细胞(核)呈正相关,线性好。

● 作为细胞数量的二次校正,用于计算各种指标在细胞中的平均值。

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选择规格:
200tests
1000tests
操作简便
实验多样本同时检测
细胞计数校正
更高灵敏度检测方法CCK-L(点击查看)
试剂盒内含
产品概述
原理
与细胞数量的关联性

试剂盒内含

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产品概述

本试剂盒包含细胞核染色试剂(Hoechst 33342)和优化微孔板法的专用缓冲液,只需添加到细胞培养基中即可轻松测得细胞数量。

原理

细胞计数校正的必要性

使用微孔板分析细胞时。细心的实验者会发现:每次获得的结果可能会有所不同,这是因为因为孔板中实际的细胞数量会有所不同。

在这种情况下,有必要根据样品中细胞的实际数量来校正测量值(达到归一化)。

1622195220610090.jpg

主流方法比较

作为吸光度实验校正的方法,细胞计数检测的指标(细胞核、蛋白质的质量)有很多,

在这之中细胞核染色作为最简便的操作方法,并可以实验多样本同时检测。

本试剂盒

(细胞核染色法)

细胞计数法 蛋白定量法
操作简便性 ×
对应多种样品处理 ×
可检测活细胞 ×
细胞裂解后检测 × ×
和实际细胞数的一致性 △*1 △*2

※1 : 细胞核数量改变的话,可能会有和实际数目不一致的情况。

※2 : 蛋白质的量改变的话,可能会有和实际数目不一致的情况。

与细胞数量的关联性

在微孔法测定实验中,需要进行数据校正时,必须使用与细胞数相对应的评估方法。 在下面的实验中,证实了荧光强度与细胞数一致性,并且作为实验例,证实了方法的可靠性。

荧光强度与细胞数的一致性比较

荧光强度根据细胞数而变化,并且获得高度线性的结果。

1613812398758584.jpg

梯度稀释HeLa细胞,接种于96孔板上,培养过夜,然后用该试剂盒进行测量。

与细胞计数方法的比较

实验过程中,校正产生的结果与细胞计数方法。

1622195397163958.jpg

HeLa细胞中添加2-DG(2-脱氧葡萄糖)后培养24小时,使用乳酸检测试剂盒Lactate Assay Kit-WST(货号:L256)测量培养基上清液中乳酸的含量。

然后分别使用本试剂盒或细胞计数法对获得的结果进行校正。

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细胞增殖/毒性检测试剂盒-发光法(CCK-L)
Cell Viability Assay Kit – Luminescent Detection
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

● 灵敏度远高于吸光度法,

10 min即可检测,

微量细胞也可检测。

● 试剂稳定性高,重复性好。

● 高性价比。

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选择规格:
200 tests
600 tests
1000 tests
2000 tests
高灵敏度
10分钟检测
悬浮细胞、原代细胞适合
活动进行中
试剂盒内含
产品概述
原理
操作步骤
产品优势
实验例

活动进行中

订购满5000元,200元礼品等你拿

凑单关联产品TOP5

NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.2.    Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST    乳酸脱氢酶(LDH)检测

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NO.4.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.5.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

试剂盒内含

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产品概述

ATP是生物体内最直接的能量来源,在肌肉收缩、代谢反应、主动运输等方面被广泛使用,甚至被称作生物体内的能量货币。同仁化学研究所开发的Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒是一种通过Luciferase来确定细胞中的腺苷三磷酸(ATP)的细胞增殖-毒性检测试剂盒。

本试剂盒只需将各试剂混合后加入孔板,10 分钟后即可检测。不需要去除培养基、清洗细胞等复杂的操作。此外,本试剂盒还有诸如发光的半衰期在3 小时以上、数据的重现性高 、兼容96孔板 、384孔板的多样品检测等诸多优点。

原理

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操作步骤

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产品优势

特点1.微量细胞的高灵敏度快速检测

在相同实验条件下(1000 cells/well HeLa细胞,经过连续2倍稀释,制成500 cells, 250 cells, 125 cells, 63 cells, 31 cells, 16 cells细胞悬液),CCK-L经10 min培养即可获得高灵敏度结果,0cell(RLU 59)和16cells(RLU 900)的发光值的差距约15倍!而CCK-8即使经过3 h的培养,虽然标准曲线的相关系数仍然很高(0.9982),但是实验孔与空白孔之间的差值相对较小。

image.png

1622095339391896.png特点2.发光信号稳定持久

3.png

图3.A549细胞3小时内发光信号检测实例

实验例

白色96孔板各种细胞的检测示例

各细胞进行2倍梯度稀释制成细胞悬液。白色96孔板中,每孔加入100 μl细胞悬液,过夜培养后加入相同体积的Working soluiton,震荡后静置10 min,检测发光值。

*HeLa:含10% FBS的MEM培养基;A549:含10% FBS的DMEM培养基;Jurkat:含10% FBS的RPMI培养基;HEK293:含10% FBS的DMEM培养基;HL 60: 含10% FBS的RPMI培养基。

1622095973918349.png

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