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单线态氧检测（EPR）—TEMP货号：T511

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单线态氧检测（EPR）—TEMP货号：T511
2,2,6,6-Tetramethyl-4-piperidone hydrochloride(TEMP)
TEMP
商品信息
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分子式：

C9H17NO·HCl

分子量：

191.70

特点：

• 纯度高

• 杂质峰少

• 灵敏度高

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单线态氧检测
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实验例

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NO.1.    DMPO    超氧阴离子和羟自由基检测   

NO.2.    BMPO    超氧阴离子和羟自由基检测

NO.3.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

NO.4.    Calcein-AM/PI Double Staining Kit    活死细胞双染

NO.5.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

 

产品概述

单线态氧 (Singlet Oxygen，1O2) 即激发态氧分子，是一种具有强氧化性的活性氧 (ROS)，在环境、化学、生物、医学等学科中具有重要的研究价值。在众多检测手段中，电子顺磁共振 (EPR) 公认为选择性最好，灵敏度最高的方法。

单线态氧分子和捕获剂TEMP本身呈EPR沉默 (EPR-silent)，TEMP捕获单线态氧后，可形成稳定的氮氧自由基TEMPO，通过对TEMPO的EPR信号分析并结合反应进程，可获知单线态氧的生成的速率和浓度变化。

产品特点

同仁化学研究所 (DOJINDO) 研发的TEMP(2,2,6,6-四甲基-4-哌啶酮 盐酸盐)，保持了一贯的高品质、高稳定性捕获剂的产品特点。TEMP基线无TEMPO的干扰EPR信号，稳定性更好。同时盐酸盐结构增强了捕获剂的水溶性，避免沉淀的析出。

1622617291651863.png

实验例

使用光敏剂Rose Benga (1 mM) 光照后，检测单线态氧。TEMP终浓度100 mM，PBS缓冲液 (PH 7.5) 中进行检测。

备注：

① 由于跃迁高度禁阻，基态氧分子吸收光不能直接产生1O2，可以通过光敏化法、微波放电法和化学方法得到。

② PBS缓冲液可更换为纯水等其他溶剂，实验者可根据实验设计自行选择。

③如信号较弱，可调节PH至8.5-9.5，以提高TEMPO的稳定性，使信号加强。

1622617324684255.png

DPPP试剂货号：D350 二苯基-1-芘基膦 DPPP

发表于由
DPPP试剂货号：D350
二苯基-1-芘基膦
DPPP
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C28H19P

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氧化应激检测

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ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂
ROS检测
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒
超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit
超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST
二价铁离子检测探针—FerroOrange
细胞亚铁离子检测荧光探针
Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测
细胞脂质过氧化物检测试剂盒

4-PDS试剂货号：P017 4,4′-Dithiodipyridine 2645-22-9

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4-PDS试剂货号：P017
4,4′-Dithiodipyridine
2645-22-9
商品信息
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分子式：

C10H8N2S2

分子量：

220.32

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总谷胱甘肽GSH检测

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ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂
ROS检测
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒
超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit
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2-PDS试剂货号：P016 2,2′-Dithiodipyridine 2127-03-9

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2-PDS试剂货号：P016
2,2′-Dithiodipyridine
2127-03-9
商品信息
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分子式：

C10H8N2S2

分子量：

220.32

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总谷胱甘肽GSH检测

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氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II
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DTNB试剂货号：D029 5’5-二硫（2-硝基苯甲酸） DTNB

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DTNB试剂货号：D029
5’5-二硫（2-硝基苯甲酸）
DTNB
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分子式：

C14H8N2O8S2

分子量：

396.35

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氧化应激检测

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ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂
ROS检测
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒
超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit
超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST
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Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测
细胞脂质过氧化物检测试剂盒

MDA检测试剂盒货号：M496 MDA检测 MDA Assay Kit

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MDA检测试剂盒货号：M496
MDA检测
MDA Assay Kit
商品信息
储存条件：-20度保存，避光
运输条件：常温

特点：

 

● 细胞、组织样品均可检测

● 操作更加简单

● 采用荧光法灵敏度更高

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产品文献
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100tests
现货
产品概述
试剂盒内含
测定原理
产品特点
实验例
产品文献

产品概述

丙二醛(MDA)是脂质过氧化物分解后形成的一种化合物。因此，MDA 是检测细胞和组织中脂质过氧化物的最常见的指标之一，在氧化应激、铁死亡等领域的研究中被广泛使用。MDA Assay Kit 可以检测样品中的 MDA 浓度，通过硫代巴比妥酸（TBA）与水解产生的 MDA 反应形成的 TBA 复合体的吸光度或荧光强度来检测样品中的丙二醛（MDA）。试剂盒中配有抗氧化剂(Antioxidant)，可以防止样品在反应过程中发生不必要的氧化，从而确保获得准确的实验结果。

试剂盒内含

微信截图_20220104144012.png

测定原理

本试剂盒采用经典的TBA法，通过检测MDA/硫代巴比妥酸(TBA)复合体的荧光或吸光度来检测细胞或组织中的MDA浓度。此外，试剂盒中还附带MDA标准溶液，以便通过标准曲线检测样品中的MDA。

1643342259946206.jpg

产品特点

简化操作步骤

一般的MDA检测试剂盒(TBA法)，作为底物的硫代巴比妥酸(TBA)需要天平称量和高温加热溶解的步骤。而同仁化学研究所的MDA试剂盒中的TBA无需称量和加热溶解的操作，从而减少由于称量等造成的误差，使得实验结果的孔间差更小。同时，还可大幅缩短操作所需的时间。

1641278613634226.png

细胞、组织样品均可检测

细胞样品通过荧光法检测。组织样品可以根据样品中MDA的含量在荧光法和吸光度法之间自由选择。具体可参考下表。

1641278820640086.png

实验例

由于Erastin可以抑制xCT（胱氨酸/谷氨酸转运体），是最常见的铁死亡诱导剂之一。使用同仁化学研究所的MDA试剂盒检测Erastin处理的HepG2(人肝癌细胞)中MDA的变化。通过标准曲线(用BCA法蛋白定量校准后)，计算样品中MDA的浓度。可以发现，Erastin处理的细胞中，MDA含量明显上升。

微信截图_20220104144843.png

微信截图_20220104145033.png

产品文献

1、K. Igarashi, H. Iwai, K. Tanaka, Y. Kuwahara, J. Kitanaka, N. Kitanaka, A. Kurimasa, K. Tomita, T. Sato, “Neuroprotective effect of oxytocin on cognitive dysfunction, DNA damage, and intracellular chloride disturbance in young mice after cranial irradiation”, 2022, Biochem. Biophys. Res. Commun., doi:10.1016/j.bbrc.2022.04.099.

2、J. Zhu, X. Wang, Y. Su, J. Shao, X. Song, W. Wang, L. Zhong, L. Gan, Y. Zhao, X. Dong, “Multifunctional nanolocks with GSH as the key for synergistic ferroptosis and anti-chemotherapeutic resistance”, 2022, doi:10.1016/j.biomaterials.2022.121704.

3、B. Yang, G. Joe, W. Li, Y. Shimizu, H. Saeki, “Comparison of Maillard-Type Glycated Collagen with Alginate Oligosaccharide and Glucose: Its Characterization, Antioxidant Activity, and Cytoprotective Activity on H2O2-Induced Cell Oxidative Damage”, 2022, doi:10.3390/foods11152374.

4、L. Dong, Z. Jiang, L. Yang, F. Hu, W. Zheng, P. Xue, S. Jiang, M. E. Andersen, G. He, M. J. C. Crabbe, W. Qu, “The genotoxic potential of mixed nitrosamines in drinking water involves oxidative stress and Nrf2 activation”, 2022, doi:10.1016/j.jhazmat.2021.128010.

5、C. Hou, L. Xiao, X. Ren, L. Cheng, B. Guo, M. Zhang, N. Yan., “EZH2-mediated H3K27me3 is a predictive biomarker and therapeutic target in uveal melanoma”, 2022, Front. Genet., doi:10.3389/fgene.2022.1013475.

6.Lizhong Yao, Junyi Hou, Xiongyan Wu, Yifan Lu, Zhijian Jin, Zhenjia Yu, Beiqin Yu, Jianfang Li, Zhongyin Yang, Chen Li, Min Yan, Zhenggang Zhu, Bingya Liu, Chao Yan, Liping Su，“Cancer-associated fibroblasts impair the cytotoxic function of NK cells in gastric cancer by inducing ferroptosis via iron regulation”，2023，Redox Biology，doi.org/10.1016/j.redox.2023.102923

6、Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”，Antioxidants，2023，doi.org/10.3390/antiox12122097

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超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311

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超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit货号：S311
超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST
SOD Assay Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
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特点：

 

● 可以检测细胞、组织等多种样品

● 准确性和灵敏度高

● 可以测定100%SOD抑制率

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产品文献
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氧化应激与自由基检测方案
试剂盒配套计算器（点击查看下载）
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产品概述
检测原理
所需设备和材料
操作步骤
抑制曲线
实验例
食品抗氧化能力的检测
常见问题Q&A
参考文献

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产品概述

超氧化物歧化酶 (SOD) 是一种重要的抗氧化酶，它可以催化超氧阴离子 (O2–) 的歧化反应，生成过氧化氢和单质氧。目前有很多种直接或间接地测量SOD活性的方法，在这些方法中，使用硝基蓝四唑 (氮蓝四唑NitroblueTetrazolium ，简称NBT) 的一种间接测量方法因其便捷、简单的使用方法而被广泛应用。但是NBT法存在一些缺点，例如生成的甲臜 (Formazan dye) 的水溶性较低，会和黄嘌呤氧化酶的还原型发生反应等问题。SOD检测试剂盒-WST®提供了更为简便的检测SOD的方法，它是利用同仁学研究所研发的高度水溶性四唑盐WST®-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯)-5-(2,4-二磺酸苯基)-2氢-四唑盐,二钠盐)，能与超氧阴离子(O2–) 反应生成一种水溶性的染料。WST®-1被超氧阴离子还原的比率与黄嘌呤氧化酶的活性线性相关，并且会被SOD所抑制 (见下图，即红色区域SOD反应优先发生，SOD反应完后蓝色区域WST®-1反应才能发生)。因此SOD或者SOD类似物的IC50(50%的抑制浓度)就能用比色法来测定。

特点
1)可以测定100%SOD抑制率。
2)不需要甲醛溶解操作，操作简单。
3)一次可以进行多样本的测定。
4)由于灵敏度高，可以提高样品的稀释倍率，所以可以抑制干扰物质带来的影响。

检测原理

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所需设备和材料

2-20 µl和20-200 µl的可调式移液器、多通道移液器，酶标仪（450 nm）、96孔板、37℃培养箱

操作步骤

用96孔板，制作样品到检测可在1小时内完成

1622540502621495.jpg

抑制曲线

                               Cu,Zn-SOD的抑制曲线

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实验例

高知大学的岛村等人对石茶制作的每一步都测定了其SOD活性。据报道，在制造过程中和微生物相关的需氧发酵和厌氧发酵极大地增加了SOD样活性，并且在发酵过程中抗氧化能力随着茶提取物成分的变化而改变。

“ 石茶生产过程中儿茶素含量和超氧阴离子清除活性的变化”，日本食品科学技术学会学报，55（12），640

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L：    新鲜树叶

SL： 蒸煮的树叶

PFL：预发酵（有氧条件下发酵几天）树叶

FL： 发酵（在厌氧条件下发酵数天）树叶

DL： 晒干（数天）树叶

食品抗氧化能力的检测

我们知道，许多由呼吸和各种外在因素产生的活性氧，会降低机体功能，促进各种疾病的发病和老化。
有越来越多对这此类现象的防御机制(抗氧化能力)的文章出现，关于利用食品所具有的抗氧化能力维持健康、预防疾病的研究也备受关注。

常见问题Q&A

Q1：“1 Unit”的定义是什么？
A1：1 Unit是指样品中的还原性染料（如细胞色素C，WST-1，NBT或XTT）与超氧阴离子之间的比色反应，50%被抑制时的点。例如如果不含任何SOD的样品溶液的O.D.值为1.0的话，那么另一个O.D.值为0.5的样品则被定义为具有1个单位的酶活性。可以使用这个单位来确定样品中的

SOD活性。使用不同染料或方法检测SOD活性，它们之间不具有可比性。
Q2：我能使用SOD标准品来确定样品溶液的SOD活性吗？
A2：可以。制备标准曲线，确定样品溶液的SOD活性。SOD Bovine Erythrocytes

（CAS# 9054-89-1，EC 1.15.1.1）能够从Sigma（Catalog# S2525）购得。
Q3：是否可以用动力学法来测定SOD活性？
A3：可以。因为在20分钟内的生色比率是保持一致的，可以测量直线上升阶段5分钟内的斜率来测定SOD活性。
Q4：如果样品自身带有较深的颜色，这样的样品可以使用吗？
A4：可以。稀释样品可以减小干扰，将样品孔的O.D.值减去Blank  2的O.D.值就可以扣除本底的颜色。但是如果样品溶液的SOD活性过低是不能检测出的。
Q5：如何能够制备更多的Dilution Buffer？
A5：Dilution Buffer为PBS。请按以下浓度配制：137 mM NaCl，2.7 mM KCl，

1.47 mM KH2PO4， 8.1 mM Na2HPO4，pH 7.4。
Q6：使用该试剂盒能否分别检测Mn-SOD和Cu/Zn-SOD？
A6：可以。要单独检测Mn-SOD活性，可以添加KCN阻断Cu/Zn-SOD活性。向样品中加入

1 mM的KCN可以完全阻断Cu/Zn-SOD活性。要测定Cu/Zn-SOD的活，可以用总的SOD活性减去Mn-SOD活性，就可以得到。
Q7：怎样保存样品？
A7：在-80℃可以保存1年。
Q8：能否使用该试剂盒检测超氧化物阴离子的水平？
A8：不必用这个试剂盒，可以使用WST-1来检测超氧化物。但是必须有一个检测样品溶液中超氧化物量的标准。因为超氧化物不稳定，而且会和其它物质反应，要确定系统中生成的超氧化物的总量是比较困难的。试剂盒中的黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系可以被用作检测每个样品中超氧化物相对生成量的标准。

参考文献

1. Manganese superoxide dismutase polymorphism affects the oxidized low-density lipoproteininduced apoptosis of

macrophages and coronary artery disease, European Heart Journal, 2008, 29, 1267-1274

2. Extracellular Superoxide Dismutase Accelerates Endothelial Recovery and Inhibits In-Stent Restenosis in Stented

Atherosclerotic Watanabe Heritable Hyperlipidemic Rabbit Aorta,

Journal of the American College of Cardiology, 2007, 50, 2249-2253

3. An Abnormal Mitochondrial–Hypoxia Inducible Factor-1-Kv Channel Pathway Disrupts Oxygen Sensing and Triggers

Pulmonary Arterial Hypertension in Fawn Hooded Rats: Similarities to Human Pulmonary Arterial Hypertension,

Circulation, 2006, 113, 2630-2641

4. Deficient plastidic fatty acid synthesis triggers cell death by modulating mitochondrial reactive oxygen species,

Cell Research, 2015, 25, 621-633

5. A Tau-Targeted Multifunctional Nanocomposite for Combinational Therapy of Alzheimer’s Disease,

ACS Nano, 2018, 12(2), 1321-1338

6. Endothelial Cell Palmitoylproteomic Identifies Novel Lipid-Modified Targets and Potential Substrates for Protein Acyl

Transferases, Circulation Research, 2012, 110(10), 1336-44

7. Lung EC-SOD overexpression attenuates hypoxic induction of Egr-1 and chronic hypoxic pulmonary vascular remodeling,

American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 2008, 295, L422-L430

8. Inhaled Ethyl Nitrite Prevents Hyperoxia-impaired Postnatal Alveolar Development in Newborn Rats,

American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine, 2007, 176, 291-299

9. In vivo guiding nitrogen-doped carbon nanozyme for tumor catalytic therapy,

Nature Communications, 2018, 9(1), 1440

10. A lytic polysaccharide monooxygenase-like protein functions in fungal copper import and meningitis,

Nature Chemical Biology, 2020, doi.org/10.1038/s41589-019-0437-9

11. Nestin regulates cellular redox homeostasis in lung cancer through the Keap1-Nrf2 feedback loop,

Nature Communications, 2019, 10, 5043

12. Allelopathic interactions of linoleic acid and nitric oxide increase the competitive ability of Microcystis aeruginosa,

The ISME Journal, 2017, 11, 1865-1876

13. Phase I Study of Copper-Binding Agent ATN-224 in Patients with Advanced Solid Tumors,

Clinical Cancer Research, 2008, 14, 7526-7534

14. Chemoprevention of Carcinogenic Progression to Esophageal Adenocarcinoma by the Manganese Superoxide Dismutase

Supplementation, Clinical Cancer Research, 2007, 13, 5176-5182

15. Development of insulin resistance and obesity in mice overexpressing cellular glutathione peroxidase,

抗氧化能力检测试剂盒 (DPPH法 )货号：D678 DPPH Antioxidant Assay Kit

发表于由
抗氧化能力检测试剂盒 (DPPH法 )货号：D678
DPPH Antioxidant Assay Kit
DPPH Antioxidant Assay Kit
商品信息
储存条件：0-5度保存
运输条件：常温

特点：

● 即用型试剂盒、数据重现性好

● 配制试剂所需的时间大幅缩短

● 检测结果不易受pH, 溶剂等因素影响

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产品文献
选择规格：
100tests
500tests
期货
规格性状
产品概述
操作时间大幅缩短
检测原理
检测步骤
检测结果不受各因素影响
检测例
参考文献
FAQ

规格性状

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产品概述

近年来的研究发现，人体内的抗氧化能力的降低与各种疾病的产生息息相关，因此人们对于具有抗氧化能力的功能食品的需求越来越高。 根据日本高知大学岛村等人的文献报道 1)，使用稳定的自由基 DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl)作为底物的抗氧化能力检测法是数据重现性最好的一种方法。本试剂盒依据岛村老师的检测方法，将DPPH法的过程进行了改良和标准化，解决了以往实验中孔间差较大、试剂配制过程繁冗等问题。

本试剂盒在日本高知大学农林海洋学部的岛村智子老师的指导下开发而成 。

1) T. Shimamura et al., Anal. Sci., 2014, 30, 717-721

操作时间大幅缩短

DPPH和Trolox在溶液状态下都不稳定，需要现配现用。特别是作为底物的DPPH，一般还需要检测吸光度来确定含量，因此操作的步骤和时间都十分冗长。本试剂盒已经将所需的试剂准备好并分成小份单独包装，检测前只需要溶解定容即可开始实验，大幅缩短了操作步骤和时间。(DPPH的溶解需要超声波振荡发生器)

1653030304342874.png

检测原理

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检测步骤

将试剂盒样品加至96孔板，培养30分钟后即可上机检测。

1653030491451060.png

将试剂盒样品加至96孔板，培养30分钟后即可上机检测。

检测结果不受各因素影响

用DPPH法检测抗氧化能力的时候，溶液中的pH以及溶剂的浓度等因素会对检测结果产生影响。本试剂盒通过优化操作步骤、调整溶液添加顺序等方法最大程度抑制pH和溶剂浓度对检测结果的影响。

pH对检测结果的影响                                                样品溶剂对检测结果的影响

1653030770245173.png1653030864800906.png

试剂盒内含的Assay Buffer可以保证检测反应在一定         样品量只占检测溶液体积的1/10(20 μl)，因此样品的

的pH下进行。                                                                 溶剂无论是水还是无水乙醇，都不影响最终检测结果。

IC50值的复孔差

1653031472328701.png

如果只用样品的抗氧化能力IC50值来评价，比较容易出现检测结果的波动。用标准物质(Trolox)和样品同时检测，通过Trolox等价活性值(TEAC)来评价的话，可以得到重现性高的检测结果。

TEAC（ μg TE/μg）= Trolox IC50 （μg/ml）/ Sample IC50（ μg/ml）

检测例

不同检测机构之间的检测结果的差异

下面3个不同的检测机构，使用本试剂盒检测已知的抗氧化物：没食子酸、儿茶酸、桑色素。用比色皿通过分光光度计检测Trolox等价活性值(TEAC)，结果显示3个检测机构之间的检测结果基本上没有差异。

image.png

参考文献：T. Shimamura et al., NipponShokuhin Kagaku Kogaku Kaishi, 2007, 54, 482 – 487

分光光度计和酶标仪检测结果的一致性

按照上面的实验的同样的方法，改用酶标仪和96孔板进行检测并计算Trolox等价活性值(Trolox)，检测结果也高度一致。

1653031974338823.png

参考文献

1、Enjuro Harunari, Chiaki Imada, Yasuhiro Igarashi, “Konamycins A and B and Rubromycins CA1 and CA2, Aromatic Polyketides from the Tunicate-Derived Streptomyces hyaluromycini MB-PO13T”, J. Nat. Prod., 2019, 82, (6), 1609-1615.

2、Hiroki Ishida, Naoki Yamasaki, Yuuki Otsuka, Daichi Mori, Tomoko Shimamura, Takuya Hasegawa, Shuhei Ogo, Tadaharu Ueda, “Electrochemical Antioxidant Capacity Measurement: A Downsized System and Its Application to Agricultural Crops”, Anal. Sci., 2021, doi:10.2116/analsci.21P217.

3、M. A. Maky and T. Zendo, “Generation and Characterization of Novel Bioactive Peptides from Fish and Beef Hydrolysates”, Appl. Sci., 2021, doi:10.3390/app112110452.

4、S. Kato, K. Kuwata, “Pro-/anti-oxidative properties of dopamine on membrane lipid peroxidation upon X-ray irradiation”, Radiat. Phys. Chem., 2021, doi:10.1016/j.radphyschem.2021.109518.

5、F. F. Sofian, N. Kikuchi, T. Koseki, Y. Kanno, S. Uesugi, Y. Shiono, “Antioxidant p-terphenyl compound, isolated from edible mushroom, Boletopsisleucomelas”, Biosci., Biotechnol., Biochem., 2022, doi:10.1093/bbb/zbab224.

6、S. Jin, S. Kim, D. S. Kim, D. Son and M. Shin, “Optically Anisotropic Topical Hemostatic Coacervate for Naked-Eye Identification of Blood Coagulation”, Adv. Funct. Mater., 2022, doi:10.1002/adfm.202110320.

7、Mohamed Abdelfattah Maky，Takeshi Zendo，“Identification of a Novel Bioactive Peptide Derived from Frozen Chicken Breast Hydrolysate and the Utilization of Hydrolysates as Biopreservatives“，Bioactive Peptides in Health and Disease【A special issue of Biology (ISSN 2079-7737).】，2023，doi.org/10.3390/biology12091218

FAQ

Q：是否可以用涡旋振荡或者移液器吹打来溶解DPPH？
A：由于DPPH较难溶解，无法用涡旋振荡或者移液器吹打完全溶解。溶解不充分是造成误差的原因，请务必用超声振荡完全溶解。
Q：计算得到的IC50值的数据重现性不好，有哪些需要注意的地方？
A：(1)  请确认DPPH Reagent在溶解时，管内是否有残留。

由于DPPH较难溶解，请务必使用超声振荡器充分溶解后再使用。特别需要注意管底部是否有残留。具体的判断方法请参照下图或操作说明书。

1653033688556249.png

(2) 样品的稀释浓度间隔过大，或者抑制曲线已经达到饱和的情况下检测出来的IC50值，可能会有较大差距。因此，请务必做预实验，摸索最佳浓度范围。

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Q：每个试剂盒可以检测多少个样品？
A：<100 tests包装>

・每个试剂盒可以用于一块96孔板的检测

・为了确保数据的准确性，建议至少设置3个复孔，下面按照复孔数为3计算可检测的样品数。

・每个试剂盒的DPPH Reagent的量可以检测96孔板的100个孔。

(Blank 2和DPPH Reagent不需要添加，所以不计入孔数)

未知样品：可以检测1个样品

・对于未知的检测样品，需要做预实验，每个试剂盒可以检测1个样品。

<预实验的孔数：确认最佳浓度范围>

样品： 8个点(8个不同的梯度浓度系列) × 3 (3个复孔) = 24 well

Blank：1 (Blank 1) × 3 (3个复孔) = 3 well

<计算IC50所需要的孔数>

样品： 8个点(8个不同的梯度浓度系列) × 3 (3个复孔) = 24 well

Trolox：4个点(4个不同的梯度浓度稀释系列) × 3 (3个复孔) = 24 well

Blank：1 (Blank 1) × 3 (3个复孔) = 3 well

*不需要预实验时，可以多检测一个样品。

已知IC50值大致范围的样品：可以检测3个样品

・对于已知大致IC50值范围的样品，每个试剂盒可以检测3个样品。

对于不知道IC50值大致范围的未知样品，请按照操作步骤做预实验。

<计算IC50所需要的孔数>

样品： 8个点(8个不同的梯度浓度系列) × 3 (3个复孔) × 3 (3个样品)= 72 well

Trolox：4个点(4个不同的梯度浓度系列) × 3 (3个复孔) = 12 well

Blank：1 ( Blank 1) (n=3) = 3 well

 

<500 tests包装>

・每个试剂盒可以用于5块96孔板的检测（DPPH Reagent和Trolox Standard各5管）

・以下是500 tests包装可检测的样品数，100 tests包装请参考上面。

每个500 tests包装的试剂盒可以检测

(Blank 2和DPPH Reagent不需要添加，所以不计入孔数)

未知样品：可以检测8个样品

・对于未知的检测样品，需要做预实验，每个试剂盒可以检测8个样品。

<预实验的孔数：确认最佳浓度范围>

样品： 8个点(8个不同的梯度浓度系列) × 3 (3个复孔) × 8 (8个样品) = 192 well

Blank：1 (Blank 1) × 3 (3个复孔) × 3 (3块板) = 9 well

<计算IC50所需要的孔数>

样品： 8个点(8个不同的梯度浓度系列) × 3 (3个复孔) × 8 (8块板) = 192 well

Trolox：4个点(4个不同的梯度浓度稀释系列) × 3 (3个复孔) × 5 (5块板) = 60 well

Blank：1 (Blank 1) × 3 (3个复孔) × 3 (3块板) = 9 well
Q：如果从开始反应到检测的时间间隔比较长，是否会影响检测值？
A：如果反应时间过长，可能会影响检测结果。为了得到重现性高的检测数据，请严格按照操作说明书的步骤(25℃，30 min，避光)后，立即进行检测。检测多个孔板的时候，请保证各孔板的上机检测前的时间相同。
Q：食品样品如果进行样品的前处理？
A：关于食品样品的前处理方法，有下列检测实例供参考。<茶叶>

 

1)  取5 g 茶叶样品，加入50 ml 100℃的超纯水。

2)  在100℃下持续搅拌10 min。

3）10分钟搅拌后，用纱布过滤，并用超纯水将样品溶液调整至55 g。

4）将样品溶液转移至离心管，23℃，4000×g离心10 min。

5）用过滤膜(孔径0.45 μm)过滤上清液，制成样品溶液。

 

 

<青椒、红椒>

1) 将样品冻结干燥后用搅拌机打成粉末。

2) 取0.5 g粉末状的样品，添加2.5 g海砂和5 ml MWA提取溶剂。

(MWA溶剂的配制方法为 无水乙醇：超纯水：醋酸 = 90：9.5：0.5)

3) 搅拌10 s后，在超声波浴中37℃超声振荡5 min。

4) 23℃，1600×g离心10 min，回收上清。

5) 向沉淀物中再次加入5 ml MWA，重复步骤3，步骤4的操作3次。

6) 将所有回收得到的上清液加入25 ml容量瓶，用MWA定容作为检测样品。
Q：如果样品有混浊，是否可以检测？
A：<对于有混浊的样品>

样品中的混浊会影响检测结果。

我们尝试过用以下溶剂检测样品：水、无水乙醇、甲醇、WMA、DMSO。

*MWA溶剂的配制方法为 无水乙醇：超纯水：醋酸 = 90：9.5：0.5

*DMSO可能会造成TEAC值偏高。

如果样品不能完全溶解，仍然有混浊时，请将样品过滤后再使用。

混浊部分的抗氧化能力无法检测。

如果溶剂是水，还可以用SOD Assay Kit-WST检测。

由于DPPH的检测原理与SOD试剂盒的原理不同，可以用双指标进行验证。

另外，含有大量胡萝卜素的样品或者溶液呈紫色的样品不适用本试剂盒检测。

推荐用其他方法检测。

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Cell Cycle Assay Solution Blue
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