细胞内代谢系统(糖酵解系统，TCA回路和电子转移系统)的分析对于理解细胞状态非常重要。
| 脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit | UP07 | 脂肪酸摄取检测 |
| Lipi-Blue试剂 | LD01 | 脂滴检测（蓝色） |
| Lipi-Green试剂 | LD02 | 脂滴检测（绿色） |
| Lipi-Red试剂 | LD03 | 脂滴检测（红色） |
| Lipi-Deep Red试剂 | LD04 | 脂滴检测（深红色） |
| Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂 | LD05 | 脂滴荧光检测（蓝色） |
| Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂 | LD06 | 脂滴荧光检测（深红色） |
特点：
● 检测灵敏度高
● 操作简便，用时短
● 可以用荧光酶标仪做高通量筛选
● 荧光染料泄露少，数据重现性高
产品解说
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凑单关联产品TOP5
NO.1. Cell Viability Assay Kit – Luminescent Detection 细胞增殖/毒性检测-发光法(CCK-L)
NO.2. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric- 细胞凋亡检测
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. DALGreen – Autophagy Detection 细胞自噬检测
NO.5. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
产品概述
细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Green是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。
产品优势
与传统方向相比的优势！ 4大特征
由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。
① 高灵敏度
2-NBDG在水中的荧光强度很低，而本试剂盒采用的荧光染料可以进行高灵敏度的葡萄糖摄取能力检测。
<观测条件>
细胞： A549细胞
检测仪器：荧光显微镜
检测滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
② 快速检测
使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Green，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。
操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便
③ 荧光酶标仪的多样品检测
2-NBDG很难用于荧光酶标仪的检测，而本试剂盒可用于荧光酶标仪的高通量筛选实验。
<检测条件>
细胞：A549细胞
Ex: 488 nm; Em: 520 nm
④ 减少荧光染料的泄漏
使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。
使用HBSS清洗细胞时
使用WI Solution清洗细胞时
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：A549细胞
检测仪器：荧光显微镜
检测滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
与传统法的比较
Glucose Uptake Probe-Green和2-NBDG都可以用于荧光显微镜和流式细胞仪的检测。而相比较于2-NBDG的激发波长，Glucose Uptake Probe-Green对于488 nm的激发光以及GFP, FITC滤光片的适用度更高。
| 产品名 | 荧光
显微镜 |
荧光
酶标仪 |
流式
细胞仪 |
染料滞留时间 | 荧光特性 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Green | 〇 | 〇 | 〇 | 1 h※ | λex: 507 nm, λem: 518 nm |
| 2-NBDG | 〇 | × | 〇 | 30 min以下※ | λex: 465 nm, λem: 540 nm |
※A549细胞的检测结果，不同的细胞种类，染料的滞留时间可能会有差异。
相关产品区别
与Glucose Assay Kit的不同点
Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。
1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消耗量。
Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。
2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。
Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。
Glucose Assay Kit-WST与本试剂盒的差别，通过下面的检测实例来说明。
实验例：用葡萄糖摄取抑制剂(Cytochalasin B)处理的HepG2细胞的葡萄糖消费量和葡萄糖摄取能力的检测。
实验的流程和检测结果：
实验例
实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用
HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察以及数值化的检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：HepG2细胞
使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)
培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h
染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜； 滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
荧光酶标仪
<检测条件>
Ex: 488 nm; Em: 520 nm
实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进
胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：mouse adipocyte
使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min
染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜； 滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
荧光酶标仪检测
<检测条件>
Ex: 488 nm; Em: 520 nm
※由于脂肪细胞的特性，很难在孔板上均匀分布，所以实验数据会有一些孔间差。
<实验操作>
1.脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中，过夜培养。
2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后，加入不含葡萄糖的培养基(0 or 1 μmol/l Insulin)。
3.在37℃下培养15 min。
4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution， 37℃下培养15 min。
5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后，再次添加WI Solution(4℃)。
6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。
实验例3：前脂肪细胞和细胞脂肪细胞的葡萄糖摄取能力的比较
使用本试剂盒对前脂肪细胞(preadipocyte)和脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞：preadipocyte, adipocyte
使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
检测仪器：荧光显微镜； 滤光片：GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
荧光酶标仪检测
<检测条件>
Ex: 488 nm; Em: 520 nm
※由于脂肪细胞的特性，很难在孔板上均匀分布，所以实验数据会有一些孔间差。
<实验操作>
1.前脂肪细胞和脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中，过夜培养。
2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后，加入不含葡萄糖的培养基。
3.在37℃下培养15 min。
4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution， 37℃下培养15 min。
5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后，再次添加WI Solution(4℃)。
6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。
实验例4：饥饿培养引起的细胞自噬和葡萄糖摄取变化
用自噬体染料DAPRed和自噬溶酶体染料DALGreen染色HeLa细胞后，用不含氨基酸的培养基培养3小时诱导细胞自噬。通过DAPRed和DALGreen的荧光强度增高确认细胞发生了细胞自噬，另外通过使用Glucose Uptake Probe-Blue发现细胞摄取葡萄糖的能力上升。
(Scale Bar: 50 μm)
<检测条件>
荧光显微镜
Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm
Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm
Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm
常见问题Q&A
| Q1: Glucose Uptake Probe-Green具体是通过哪种葡萄糖转运蛋白进入细胞的? |
| A：对于具体的每一种葡萄糖转运蛋白的特异性目前还没有详细的数据。 |
| Q2：目前有过检测实例的细胞有哪些? |
| A：目前的检测实例细胞系请参考下表： |
| 细胞种类 | Probe stock solution
的稀释倍率 |
染色时间 | |
| 人肺腺癌细胞 | A549 | x 500 | 15 min |
| 人肝癌细胞 | HepG2 | x 500 | 15 min |
| 前脂肪细胞 | preadipocyte(3T3-L1) | x 500 | 15 min |
| 脂肪细胞 | adipocyte(3T3-L1) | x 500 | 15 min |
| 恶性黑色肿瘤细胞 | MO5 | x 500 | 15 min |
| 小鼠成肌细胞 | C2C12 | x 500 | 5 min |
| 人星形胶质瘤细胞 | U-251 MG | x 500 | 15 min |
| 人子宫颈癌细胞 | HeLa | x 500 | 15 min |
| 小鼠肺癌细胞 | 3LL | x 50000 | 15 min |
| T细胞 | CD4+ T cell | x 50, x500 | 15 min |
| 小鼠巨噬细胞 | J774.1 | x 500 | 15 min |
| 线虫 | N2 | x 500 | 90 min |
| Q3：Glucose Uptake Probe-Green被细胞摄入后，会被分解或代谢掉吗? |
| A：染料的荧光部分非常稳定，实验范围内的操作不会造成分解。另外，类葡萄糖的部位，从结构上考虑可能会被Hexokinase(己糖激酶)磷酸化，除此以外应该不会参加任何代谢反应。 |
| Q4：Glucose Uptake Probe-Green被活细胞摄入后，可以进行细胞固定的操作吗? |
| A：由于荧光探针会从细胞内漏出，染色后无法进行细胞固定。 |
| Q5：用荧光酶标仪检测时候，对孔板有什么特别要求吗? |
| A：需要使用荧光检测用的细胞培养板。 |
| Q6：Probe working solution可以长期保存吗? |
| A：Probe working solution无法长期保存，请现配现用。Probe stock solution冷冻可以保存一个月。 |
| Q7：无法观察到荧光信号变化的时候，应该怎么办? |
| A：预实验的时候可以先从稀释浓度(x250~x1,000)、染色时间(5 min~1 h)范围内进行摸索。 |
| Q8：荧光背景高的时候，应该怎么办? |
| A：可能是由于有未被细胞摄入的残留荧光染料。请用WI Solution再多进行一次清洗操作。 |
| Q9：Glucose Uptake Probe-Green对细胞有毒性吗? |
| A：使用同仁化学研究所的Cell Counting Kit-8(货号:CK04)对A549细胞的Glucose Uptake Probe-Green细胞毒性进行了检验，没有发现细胞毒性的产生。 |
| Q10：用WI solution清洗之后，荧光染料可以在细胞内停留多长时间? |
| A：一般在室温下可以保持在细胞内1 h左右，不同的细胞种类，时间可能会有一定差别。 |
| Q11：可以对葡萄糖进行定量检测吗? |
| A：本产品不能用于葡萄糖的定量检测。如果需要定量检测培养基中的葡萄糖的消耗量或者细胞内的葡萄糖量，可以使用同仁化学研究所的Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)。 |
| Q12：可以对被细胞摄入的染料进行定量吗? |
| A：不可以对细胞摄入的染料进行定量。本试剂盒是葡萄糖摄取能力强弱或增减的检测试剂盒。 |
| Q13：如果无法通过葡萄糖的竞争性抑制细胞探针的摄取，该如何解决？ |
A：竞争性抑制是否发生取决于每个细胞中的葡萄糖转运蛋白的表达水平和类型。（例如：HepG2细胞）
在这种情况下，使用2-脱氧葡萄糖(2-DG)进行预处理可能会在葡萄糖竞争抑制方面产生差异。 请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green(产品代码:UP02)的使用示例。 2-DG预处理对探针摄取的抑制和葡萄糖竞争性抑制(HepG2细胞) 1.将细胞接种在培养皿或微孔板中，并在5% CO₂培养箱(37°C)中培养过夜。 2.除去培养基[DMEM (10% FBS，高葡萄糖)]后，加入50 mmol/l 2-DG/培养基，并 在5% CO₂培养箱(37℃)中培养细胞2小时。 3.清洗细胞两次。 4.加入预热的DMEM(无葡萄糖，无血清)并将细胞在5%CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 5.除去上清液后，加入预热的探针溶液并在5% CO₂中孵育 在培养箱(37°C)中培养15 min。 6.除去上清液后，用冷却的WI溶液(1x)洗涤细胞两次。 7.除去上清液后，加入冷却后的WI溶液(1x)，并在室温下培养 5分钟。 8.除去上清液后，加入冷却的WI溶液(1x)。 9.荧光显微镜下观察细胞。
|
| Q14: 以下为不同细胞添加抑制剂后，葡萄糖摄取能力检测实验。 |
 |
规格性状
| Glucose Uptake Probe-Green ×1
WI Solution (50X) 5 ml ×1 供参考的可测次数 每个试剂盒大约可检测12枚35 mm dish或1枚96孔板 |
参考文献
| 编号 | 文献 | 年 | IF |
| 1 | Enhanced aerobic denitrification performance with Bacillus licheniformis via secreting lipopeptide biosurfactant lichenysin, Chemical Engineering Journal,2022,434:134686 | 2022 | 13.3 |
| 2 | Genetically engineered probiotics as catalytic glucose depriver for tumor starvation therapy | 2023 | 10.8 |
| 3 | Remodeling on adipocytic physiology of organophosphorus esters in mature adipocytes | 2022 | 9.9 |
| 4 | Simple Fluorescence Assay for Cystine Uptake via the xCT in Cells Using Selenocystine and a Fluorescent Probe, ACS Sensors,2021, 6(6):2125-2128 | 2021 | 7.7 |
| 5 | N-Caffeoyltryptophan enhances adipogenic differentiation in preadipocytes and improves glucose tolerance in mice | 2023 | 3.7 |
特点：
● 使用荧光显微镜、荧光酶标仪或流式细胞仪即可快速检测
● 简便操作即可检测氨基酸摄取能力
※注意：您选择的孔板类型会对实验结果产生重大影响。并非所有孔板都与本检测方法兼容。
您可以下拉参考网站“常见问题Q&A”，查看推荐的孔板及其对检测结果的影响。
产品解说
规格性状
产品概述
氨基酸是合成蛋白质和核酸的重要来源，对于增殖活性异常活跃的癌细胞来说尤其重要。不仅如此，癌细胞由于其自身糖酵解途径的亢进，造成乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)供应的减少，更加剧了对TCA循环来源之一的氨基酸的需求。基于此方面的研究发现，癌细胞中氨基酸转运体LAT1(L-type amino acid transporter 1)的表达明显增高，说明氨基酸的大量摄取是癌细胞的普遍特征之一。这一发现也有望成为癌症药物研发的新靶点。
在癌症免疫治疗领域，治疗效果不仅与癌细胞的代谢变化有关，免疫细胞的代谢调控也至关重要。例如，随着免疫细胞的衰老，代谢平衡的改变会导致免疫细胞对癌细胞的杀伤能力减弱。因此，通过调控免疫细胞的代谢来改善免疫治疗效果的研究也十分盛行。
氨基酸类似物(BPA)通过氨基酸转运体吸收到细胞后，探针穿透细胞膜并与氨基酸类似物结合，发出荧光(λex=360 nm，λem=460 nm)。本试剂盒可使用荧光显微镜、荧光酶标仪和流式细胞仪检测，通过可视化和数值化的检测评价细胞摄取氨基酸的能力，以及氨基酸转运体抑制剂的筛选。
本试剂盒是在日本大阪府立大学切畑光统(Kirihata Mitsunori)教授提供情报和指导下开发的产品。
运用领域
抑制氨基酸的吸收是癌症药物开发和筛选的靶点之一。此外，通过比较正常细胞和癌细胞的氨基酸吸收能力，还可以了解癌细胞的恶性程度及其细胞特征。
操作步骤
实验例
使用本试剂盒检测BCH(氨基酸转运体抑制剂)对HeLa细胞摄取氨基酸能力的阻碍作用。
＜检测条件＞
细胞：HeLa cells
培养基：MEM （5.5 mmol/l Glucose）
培养条件：1 mmol/l BCH/HBSS (Hanks’ Balanced Salt Solution), 37℃, 30 min
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=340-380 nm, Em: 435-485 nm)
检测仪器：荧光酶标仪 (Ex=360 nm, Em: 460 nm)
<检测条件>
检测仪器：流式细胞仪 (Ex=405 nm, Em: 425-475 nm)
与传统方法比较
与传统的同位素示踪法和代谢组学检测法相比，操作时间大幅减少。
关联产品
| 产品名 | 包装 | 价格 | 货号 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Blue | 1 set | 3,980 | UP01 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Green | 1 set | 3,980 | UP02 |
| Glucose Uptake Assay Kit-Red | 1 set | 3,980 | UP03 |
常见问题Q&A
| Q：推荐什么类型的微孔板？ |
| A：我们推荐以下几种微孔板
微孔板的类型对检测结果有何影响，请参考【Q&A:微孔板的类型会影响结果吗？】获取更多信息。 |
| Q：微孔板的类型会影响结果吗？ |
| A：是的。并非所有微孔板都与该测定兼容，有些微孔板可能无法进行某些测量（参见参考数据）。
建议使用以下板检测
<参考：微孔板之间的比较> 使用Ibidi板和其他制造商的微孔板，我们研究了HeLa细胞在氨基酸转运蛋白抑制剂BCH（2-氨基双环[2.2.1]庚烷-2-羧酸）存在下摄取氨基酸的能力。然而，我们无法确认BCH对吸收的抑制，因为与推荐的Ibidi板相比，在其他制造商的微孔板中观察到更高的背景。 荧光显微镜观察
荧光酶标仪检测结果
|
| Q：BPA是通过哪种转运蛋白进入细胞内的？ |
| A：有文献报道BPA是通过LAT1, LAT2, ATB0,+转运进入细胞的(Wongthai P et al., “Boronophenylalanine, a boron delivery agent for boron neutron capture therapy, is transported by ATB0,+, LAT1 and LAT2”, Cancer Sci., 2015, Mar;106(3):279-86)。此外，同仁化学也通过实验验证了BCH等LAT1的抑制剂、leucine等LAT1的底物对BPA摄取的抑制作用。 |
| Q：已经有检测实例的细胞系有哪些？ |
| A：贴壁细胞有HeLa, A549, HepG2, MCF-7, C2C12, MEF, U251；悬浮细胞有MOLT4。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，是否会被分解或代谢掉？ |
| A：BPA的构造非常稳定，实验操作范围的过程中不会被分解。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，能否进行固定化操作？ |
| A：由于探针会从细胞内向细胞外泄漏，所以无法进行染色后的固定化操作。 |
| Q：BPA被细胞摄入后，是否会在特定部位积累？ |
| A：被细胞摄取的BPA均匀的分布在细胞内。 |
| Q：BPA uptake solution，Working solution能否长时间保存？ |
| A： BPA uptake solution，Working solution无法长期保存，请现配现用。 |
| Q：如果荧光信号没有变化，我该怎么办？ |
| A：主要可能的原因有以下两点： ①细胞本身对BPA solution的摄入能力较低。此时建议尝试提高BPA solution
的浓度。(5~50倍稀释) ②Working solution发生变质，请重新配置Working solution，保证现配现用。 |
| Q：如果荧光背景较高， 我该怎么办？ |
| A： 检测环境中可能含有未被细胞摄入的BPA。此时建议用HBSS清洗后再检测。 |
| Q：BPA是否可以定量检测？ |
| A：无法进行定量检测，本染料是评价细胞摄取氨基酸能力高低或增减的试剂。 |
产品文献
1、T. Watanabe, Y. Sanada, Y. Hattori, and M. Suzuki, “Correlation between the expression of LAT1 in cancer cells and the potential efficacy of boron neutron capture therapy”, 2022, J. Radiat. Res., doi:10.1093/jrr/rrac077.
2、Wencan Zhang，Xu Cao，Xiancai Zhong，Hongmin Wu，Yun Shi，Mingye Feng，Yi-Chang Wang， David Ann，Yousang Gwack，Yate-Ching Yuan，Weirong Shang ，and Zuoming Sun，”SRC2 controls CD4+ T cell activation via stimulating c-Myc-mediated up-regulation of amino acid transporter Slc7a5″，2023，PNAS【11.1】，doi：10.1073/pnas.2221352120.
关联产品
代谢
品名货号用途
| Glycolysis/JC-1 MitoMP Assay Kit | G272 | 糖酵解(乳酸生成量)和线粒体膜电位(JC-1)同时检测 |
| 糖酵解/氧化磷酸化检测试剂盒—Glycolysis/OXPHOS Assay Kit | G270 | 方便快捷的检测糖酵解能、细胞代谢途径转移、细胞对糖酵解途径和氧化磷酸化途径的依赖程度 |
| Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Blue | UP01 | 葡萄糖摄取能力检测（蓝色荧光） |
| Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Green | UP02 | 葡萄糖摄取能力检测（绿色荧光） |
| Glucose(葡萄糖)摄取能力检测试剂盒-Red | UP03 | 葡萄糖摄取能力检测（红色荧光） |
| Glucose Assay Kit-WST试剂盒 | G264 | 葡萄糖含量检测 |
| Lactate Assay Kit-WST试剂盒 | L256 | 乳酸检测试剂盒 |
| α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric | K261 | 对细胞内的α-KG进行定量检测 |
| 脂肪酸摄取测定试剂盒——Fatty Acid Uptake Assay Kit | UP07 | 脂肪酸摄取检测 |
| Lipi-Blue试剂 | LD01 | 脂滴检测（蓝色） |
| Lipi-Green试剂 | LD02 | 脂滴检测（绿色） |
| Lipi-Red试剂 | LD03 | 脂滴检测（红色） |
| Lipi-Deep Red试剂 | LD04 | 脂滴检测（深红色） |
| Lipid Droplet Assay Kit-Blue试剂 | LD05 | 脂滴荧光检测（蓝色） |
| Lipid Droplet Assay Kit-Deep Red试剂 | LD06 | 脂滴荧光检测（深红色） |
| ADP/ATP比率检测试剂盒—ADP/ATP Ratio Assay Kit-Luminescence | A552 | 检测细胞中ADP与ATP的比率 |
| Oxygen Consumption Rate(OCR) Plate Assay Kit-氧消耗量检测试剂盒 | E297 | 氧消耗量检测 |
| Cell Counting Kit-Luminescence试剂盒 | CK18 | ATP活性检测 |
| Glutamine Assay Kit-WST试剂盒 | G268 | 谷氨酰胺的定量检测 |
| Glutamate Assay Kit-WST试剂盒 | G269 | 谷氨酸的定量检测 |
| NAD/NADH Assay Kit-WST试剂盒 | N509 | NAD/NADH检测试剂盒 |
| NADP/NADPH Assay Kit-WST试剂盒 | N510 | NADP/NADPH检测 |
| 氨基酸摄取能力检测试剂盒——Amino Acid Uptake Assay Kit | UP04 | 检测细胞摄取氨基酸的能力 |
| 胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit | UP05 | 胱氨酸摄取能力检测 |
各项代谢指标完全解读
糖酵解氧化磷酸化代谢关联指标
脂质代谢关联指标
氨基酸代谢关联指标
线粒体相关指标
衰老相关指标
当试图了解细胞状态时，分析各种细胞内代谢途径【例如糖酵解系统、三羧酸（TCA）循环、电子运输链等】非常重要。代谢产物和能量来源，【例如葡萄糖、乳酸和NAD（P）+/NAD（P）H】都是用于分析细胞内代谢的指标。
细胞代谢与疾病
近年来，针对癌症、糖尿病等疾病模型的细胞内代谢研究受到了广泛关注。下面是不同疾病的 代谢指标变化的详细介绍。
癌症
癌细胞在无限增殖的同时保持着活跃的细胞代谢，不断吸收大量的营养物质进行蛋白质、核酸、能量（如ATP）的合成。即使在不利的环境下(低氧气、低营养)，癌细胞仍然可以通过改变代谢途径而存活下来。近年来，针对癌细胞的代谢途径的研究也越来越多。
糖代谢有两种途径：线粒体氧化磷酸化和糖酵解(Glycolysis)。正常哺乳动物细胞在有氧条件下，糖酵解被抑制。而癌细胞即使在氧气充足的情况下，糖酵解仍然十分活跃(瓦格博效应，Warburg effect)。因此，癌细胞大量的摄取糖分并在亢进的糖酵解作用下大量产生乳酸。由于糖酵解途径在生成ATP时并不需要氧气，所以即使在低氧环境下，癌细胞仍然可以增殖。另一方面，癌细胞的线粒体利用氨基酸和脂肪产生NADH，NADH除了用于产生ATP以外，还主要用于抵御氧化还原作用。癌细胞的线粒体有着异常的机能，这会引起线粒体膜电位的上升（过极化）以及过剩的活性氧的产生。因此需要产生大量的谷胱甘肽来维持胞内的氧化还原平衡。而谷氨酰胺 (Glutamine)和胱氨酸(Cystine)是谷胱甘肽合成的必要来源，癌细胞不断的过量摄入这些氨基酸。另外，由于需要 NADPH来维持还原型谷胱甘肽，癌细胞会不断利用从糖酵解、戊糖磷酸途径(pentose phosphate pathway)以及线粒体产生的NADH来维持高浓度的NADPH。
*请注意，上述内容是概括性的癌细胞代谢特征的描述。随着癌细胞种类的不同和环境的变化会有一定差别。
参考文献
下面是一些癌细胞代谢的综述性文献，供初次接触这一领域的研究人员参考。
1) 糖酵解：M. G. Vander Heiden, L. C. Cantley, and C. B. Thompson, “Understanding the Warburg Effect: The Metabolic Requirements of Cell Proliferation”, Science, 2009, 324, 1029.
2) 氨基酸代谢、ROS：P. Koppula, Y. Zhang, and B. Gan, “Amino Acid Transporter SLC7A11/xCT at the Crossroads of Regulating Redox Homeostasis and Nutrient Dependency of Cancer”, Cancer Commun., 2018, 38, 12.
3) 氨基酸代谢：E. L. Lieu, T. Nguyen, S. Rhyne, and J. Kim, “Amino Acids in Cancer”, Exp. Mol. Med., 2020, 52, 15.
4) 线粒体、ROS、NADPH：F. Ciccarese and V. Ciminale, “Escaping Death: Mitochondrial Redox Homeostasis in Cancer Cells”, Front. Oncol. 2017, 7, 117.
5) NADH：A. Chiarugi, C. Dolle, R. Felici, and M. Ziegler, “The NAD Metabolome-A Key Determinant of Cancer Cell Biology”, Nat. Rev. Cancer, 2012, 12, 741.
⚫ 葡萄糖(Glucose)代谢障碍与抗癌作用
⚫ 氨基酸代谢障碍和抗癌作用
⚫ 1个试剂盒，匀浆和非匀浆自由选择
⚫ 癌细胞免疫与代谢
抑制葡萄糖代谢和抗癌作用
癌细胞主要使用糖酵解系统产生ATP，因此针对糖酵解系统的抗癌药物的开发已经进行了很长时间。目前还没有开发出有效的抗癌药物，但糖酵解仍然是癌细胞的主要药物靶点。因此，糖酵解是了解癌细胞代谢的最重要途径。
葡萄糖转运蛋白（GLUT）是药物发现中糖酵解靶蛋白的一个例子。由于癌细胞通过葡萄糖转运蛋白摄取大量的糖，因此可以通过直接抑制葡萄糖转运蛋白来抑制糖酵解。另外，抑制葡萄糖饥饿的活性、糖酵解系统的酶 (己激酶：HK、乳酸脱氢酶：LDH等) ，和抑制糖酵解系统的最终产物乳酸向细胞外的流出也是有效的手段。
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| 葡萄糖检测试剂盒 | Glucose Assay Kit-WST | G264 |
| 乳酸检测试剂盒 | Lactate Assay Kit-WST | L256 |
| NAD/NADH 检测试剂盒 | NAD/NADH Assay Kit-WST | N509 |
| NADP/NADPH 检测试剂盒 | NADP/NADPH Assay Kit-WST | N510 |
| JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 | JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 |
抑制氨基酸代谢与癌症治疗
在增殖活跃的癌细胞中，氨基酸是蛋白质和核酸合成所必需的营养素。由于癌细胞中来自糖酵解系统的乙酰CoA的供给降低，因此积极利用氨基酸
作为TCA循环的营养源。研究表明，癌细胞通过氨基酸转运蛋白的表达量增加，吸收大量氨基酸。特别是谷氨酰胺是谷胱甘肽的原料和TCA循环中必需的α-酮戊二酸的来源，并且针对谷氨酰胺的摄取和代谢（谷氨酰胺分解）的药物开发备受关注。此外，我们发现与许多必需氨基酸摄取有关的氨基酸转运蛋白LAT(L-type amino acid transporter)在许多癌细胞中过度表达，并有望作为新的药物发现目标。
与其他氨基酸不同，氧化还原控制所需的半胱氨酸主要由胱氨酸转运蛋白xCT吸收到细胞中。癌细胞会产生大量的活性氧，从而增加抗氧化剂谷胱甘肽的产生，维持氧化还原平衡。因此，通过抑制谷胱甘肽产生的途径，可以改变细胞内氧化还原平衡，并诱导细胞死亡，如铁吞作用。此外，谷胱甘肽还有助于耐药性，因此涉及谷胱甘肽产生的途径是药物发展的主要目标。特别是最近，长期用作抗炎药的磺胺沙拉嗪和癌症的分子靶向治疗药物索拉非尼布抑制了xCT，通过xCT抑制的铁吞作用引起了人们的关注。
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
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| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| NAD/NADH 检测试剂盒 | NAD/NADH Assay Kit-WST | N509 |
| JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 | JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 |
| 谷氨酰胺检测试剂盒 | Glutamine Assay Kit-WST | G268 |
| 谷氨酸检测试剂盒 | Glutamate Assay Kit-WST | G269 |
| GSSG/GSH检测试剂盒 | GSSG/GSH Quantification Kit | G263 |
| 脂质过氧化物检测试剂 | Liperfluo | L248 |
| 线粒体过氧化物检测试剂 | MitoPeDPP | M466 |
| 自噬检测试剂 | DAPGreen – Autophagy Detection | D676 |
抑制脂肪酸代谢和抗癌作用
细胞增殖活跃的癌细胞当然需要大量的脂质。因此，细胞内的脂肪酸合成和细胞外的脂肪酸摄取是很活跃的。因此，许多癌细胞增加了脂质滴的积累。针对癌细胞的治疗目标主要是与脂肪酸的产生相关的途径，并开发了许多抑制剂。
另一方面，癌细胞利用脂肪酸的β氧化来有效地产生能量，以补充糖酵解系统低效能量的产生。因此，以脂肪酸的β氧化为目标的药剂开发也在进行中。
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
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| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| 脂滴检测试剂盒 | Lipid Droplet Assay Kit
– Blue/Deep Red |
LD05/LD06 |
| 脂滴荧光染料 | Lipi-Blue/Green/Red/Deep Red | LD01/LD02/LD03/LD04 |
| NADP/NADPH 检测试剂盒 | NADP/NADPH Assay Kit-WST | N510 |
| GSSG/GSH检测试剂盒 | GSSG/GSH Quantification Kit | G263 |
癌症免疫治疗与细胞代谢
T细胞在消除癌细胞的免疫系统中起着核心的作用。近年来发现，T细胞的分化和活化等调节机制也与细胞内的代谢有关，因此癌症免疫相关的代谢研究也越发活跃起来。癌细胞需要吸收大量营养才能维持增殖活性，而活化的T细胞同样需要大量营养(尤其是葡萄糖)才能消除癌细胞。所以，活化的T细胞与癌细胞存在局部的“葡萄糖竞争”。众所周知，癌细胞可以通过表达活性化T细胞表面的免疫检查点PD-1来抑制T细胞的活性。而且，最近的研究发现，在这个相互作用中，T细胞的葡萄糖摄取也会受到抑制。癌细胞通过抑制免疫细胞的代谢来获得免疫逃逸，因此癌症免疫方面的研究并不局限于癌细胞，对免疫细胞的代谢研究也十分重要。
参考文献
1) Z. Yin, L. Bai, W. Li, T. Zheng, H. Tian, and J. Cui, “Targeting T cell metabolism in the tumor microenvironment: an anti-cancer therapeutic stratety”, J. Exp. Clin. Cancer Res. 2019, 38, 403.
2) L. Almeida, M. Lochner, L. Berod, and T. Sparwasser, “Metabolic pathways in T cell activation and linear differentiation”, Semin. Immunol. 2016, 28(5), 514.
3) A. Kumar and K. Chamoto, “Immune metabolism in PD-1 blockage-based cancer immunotherapy”, Int. Immunol., 2020 Jul 5;dxaa046.
4) D. G. Franchina, F. He, and D. Brenner, “Survival of the fittest: Cancer challenges T cell metabolism”, Cancer Lett., 2018, 412, 216.
5) N. Patsoukis, K. Bardhan, P. Chatterjee, D. Sari, B. Liu, L. N. Bell, E. D. Karoly, G. J. Freeman, V. Petkova, P. Seth, L. Li, and V. A. Boussiotis, “PD-1 alters T-cell metabolic reprogramming by inhibiting glycolysis and promoting lipolysis and fatty acid oxidation”, Nat. Commun., 2015, 6, 6692.
各抑制剂引起的细胞内代谢变化.文献
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| 产品用途 | 产品名称 |
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| 葡萄糖检测试剂盒 | Glucose Assay Kit-WST | G264 |
| 乳酸检测试剂盒 | Lactate Assay Kit-WST | L256 |
| 谷氨酰胺检测试剂盒 | Glutamine Assay Kit-WST | G268 |
| 谷氨酸检测试剂盒 | Glutamate Assay Kit-WST | G269 |
糖尿病
抑制葡萄糖代谢和抗癌作用
在高血糖状态下，细胞内葡萄糖浓度升高，多元醇途径代谢增强。这会过 度消耗NADPH，减少还原型谷胱甘肽(GSH)。 其结果是，氧化应激增加，促进细胞损伤。
参考文献
M. Brownlee, “The pathobiology of diabetic complications: a unifying mechanism”, DIABETES, 2005, 54, 1615.
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| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| NAD/NADH检测试剂盒 | NAD/NADH Assay Kit-WST | N509 |
| NADP/NADPH 检测试剂盒 | NADP/NADPH Assay Kit-WST | N510 |
| 谷胱甘肽检测试剂盒 | GSSG/GSH Quantification Kit | G263 |
衰老
⚫ 衰老相关疾病与乳酸、NAD+的关系
⚫ DNA损伤引发的细胞衰老
⚫ 谷氨酰胺代谢与细胞衰老
衰老相关疾病与乳酸、NAD +的关系
近年来，NAD+与衰老之间的关系 引起了人们的关注。单个小鼠的 衰老模型中，在肝脏等中观察到 的NAD+量减少1)，并且据报道， 抑制NAD +合成酶会导致衰老细胞 功能下降2）。此外，NAD+量的减 少导致线粒体功能下降3)，而线粒 体功能的降低表明NAD+量减少， 从而导致衰老细胞的功能下降4)。
DNA损伤引发的细胞衰老
在衰老的细胞中，由于线粒体功能下 降，主要由厌氧的糖酵解通路产生ATP， 因此乳酸的产生量增加7）。 DNA损伤是细胞衰老导致线粒体功能 障碍的原因之一。 DNA损伤的积累会激活 DNA修复机制并增加NAD+消耗。 NAD+量的减少会降低SIRT1活性，这 是维持线粒体功能的重要因素，导致线粒 体功能的降低（电子转移的抑制→ATP产 生/ NAD+量的减少）3),8)。
谷氨酰胺代谢和细胞衰老
抑制肿瘤的menin通过靶向依赖mTORC1的代谢激活来预防效应CD8T细胞功能障碍9)。
Menin是一种肿瘤抑制因子，在预防衰老和疲劳等T细胞功能障碍中起着重要作用。当Menin缺乏时， mTORC1被激活，并通过糖酵解系统和谷氨酰胺降解增强氧化磷酸化，导致CD8T细胞功能障碍。此外， 谷氨酰胺代谢中间产物α酮戊二酸有助于维持mTORC1激活和促进细胞衰老(SA-β-gal活性增强)。谷氨酰 胺-α-酮戊二酸通路在诱导CD8T细胞功能障碍中发挥重要作用，并发现Menin有抑制T细胞衰老的可能性。
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| 产品用途 | 产品名称 |
货号 |
| 细胞衰老检测试剂盒 (荧光显微镜 / 流式细胞仪用) | Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal | SG03 |
| 细胞衰老检测试剂盒 (荧光酶标仪用) | Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal | SG05 |
| JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 | JC-1 MitoMP Detection Kit | MT09 |
特点：
● 特异性的在细胞中线粒体内聚集
● 可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物
● 可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测
产品概述
MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。
聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。由于氧化的MitoPeDPP
(Ox-MitoPeDPP) 的激发和发射波长分别是452 nm和470 nm，可以减小样品的光损伤和自发荧光，因此利用
荧光显微镜MitoPeDPP可以检测活细胞中的脂质过氧化物。
特点
1.特异性的在细胞中线粒体内聚集
2.可以检测线粒体膜内的脂质过氧化物
3.可以在488 nm和535 nm的荧光波长下进行检测
* 本产品由福冈大学化学系的Dr. Shioji开发
*由于MitoPeDPP量极少不宜看到，可以通过观察MitoPeDPP DMSO溶液的颜色是否为黄色来判断。
检测原理
MitoPeDPP可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。
实验例
1.MitoPeDPP和线粒体染色试剂MitoBright共同染色的实施例
在HeLa细胞中添加t-BHP（氢过氧化叔丁基），检测脂质过氧化物
波长（wavelength/band pass）
MitoPeDPP：470/40（Ex），525/50（Em）
MitoBright DeepRed：600/50（Ex），685/50（Em）
结果证实在HeLa细胞内的线粒体中，MitoPeDPP受t-BHP氧化后会发出荧光。另外通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）的共染色，确认了MitoPeDPP的荧光是定位在线粒体中。
2.检测添加Rotenone产生的脂质过氧化物
向HeLa细胞[μ-slide，8孔（由Ibidi制造）]中添加MitoPeDPP之后，添加Rotenone溶液并使用荧光显微镜观察。实验结果证实，添加Rotenone后，检测到细胞中产生了脂质过氧化物。
Rotenone的刺激时间：0 min(左)，90 min(中)，180 min(右)
上部）荧光图，下部）明场图
3.神经细胞使用MitoPeDPP的实验例
A.荧光显微镜检测
向NIE-115细胞（小鼠神经芽细胞瘤）添加异黄素，诱导Ca2+流入细胞内，并通过MitoPeDPP的荧光染色来观察线粒体膜内的脂溶性过氧化物的产生。实验结果证实添加了异霉素的实验组相比对照组来说荧光更强。
B. 平均荧光强度数据比较
为了量化对照组细胞和添加了离子霉素的细胞的荧光强度，对两组数据进行基于平均荧光强度的比较。
结果证实，加入离子霉素后30分钟的细胞对比对照组的细胞，观察到的荧光强度显着增加。
数据提供（Free Radical Research, in press)
参照芝浦工业大学系统理工学院 福井浩二副教授、中村沙希[参考文献3]
4.MitoPeDPP反应的选择性
在不含细胞的反应体系中，MitoPeDPP可以与各种过氧化物如H2O2，t-BHP和ONOO- 反应，但是在细胞中，积
累在线粒体中的MitoPeDPP可以被t-BHP氧化而释放出较强荧光 (图3A)，却和其它ROS或RNS反应很弱 (图3B)。
A) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min，然后用100 μmol / l的t-BHP处理。
B) 在HepG2细胞中加入MitoPeDPP培养15 min后，加入ROS、RNS诱导剂。
分别加入100 μmol / l (H2O2，NO和ONOO-诱导剂)和10 μmol / l PMA（O2-.诱导剂） 。
左边为明场图，右边为荧光图
* t-BHP：tert-Butylhydroperoxide; PMA, Phorbol myristate acetate;
SIN-1, 3-(Morpholinyl)sydnonimine, hydrochloride;
NOC 7, 1-Hydroxy-2-oxo-3-(N-methyl-3-aminopropyl)-3-methyl-1-triazene
波长/带通滤波器：470/40 (Ex), 525 /50 (Em)
参考文献
1) K. Shioji K, Y. Oyama, K. Okuma and H. Nakagawa, “Synthesis and properties of fluorescence probe for detection of peroxides in mitochondria.”, Bioorg Med Chem Lett., 2010, 20, (13), 3911.
2) S. Oka, J. Leon, K. Sakumi, T. Ide, D. Kang, F. M. LaFerla and Y. Nakabeppu, “Human mitochondrial transcriptional factor A breaks the mitochondria-mediated vicious cycle in Alzheimer’s disease”, Scientific Reports ., 2016, DOI: 10.1038/srep37889 , .
3) S. Nakamura, A. Nakanishi, M. Takazawa, S. Okihiro, S. Urano and K. Fukui, “Ionomycin-induced calcium influx induces neurite degeneration in mouse neuroblastoma cells: Analysis of a time-lapse live cell imaging system”, Free Radical Research., 2016, 50, (11), 1214.
4) M. Akimoto, R. Maruyama, Y. Kawabata, Y. Tajima and K. Takenaga, “Antidiabetic adiponectin receptor agonist AdipoRon suppresses tumour growth of pancreatic cancer by inducing RIPK1/ERKdependent necroptosis”, Cell Death Dis., 2018, 9, 804.
5) M. Álvarez-Córdoba, A. Fernández Khoury, M. Villanueva-Paz, C. Gómez-Navarro, I. Villalón-García, J. M. Suárez-Rivero, S. Povea-Cabello, M. Mata, D. Cotán, M. Talaverón-Rey, A. J. Pérez-Pulido, J. J. Salas, E. M. Pérez-Villegas, A. Díaz-Quintana, J. A. Armengol, J. A. Sánchez-Alcázar , “Pantothenate Rescues Iron Accumulation in Pantothenate Kinase-Associated Neurodegeneration Depending on the Type of Mutation.”, Mol. Neurobiol. ., 2019, 56, (5), 3638.
关联产品
分子式：
C51H41N2O8P
分子量：
840.85
特点：
● 特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化
● 比BODIPY C11更适合于胞内定位
● 铁死亡常见指标之一
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
凑单关联产品TOP5
NO.1. Lipid Peroxidation Probe -BDP 脂质过氧化探针BDP
NO.2. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.3. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.4. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
规格性状
性状：深红色结晶粉末或固体。
纯度（HPLC）：90.0%以上
核磁共振谱：符合一致性
<使用次数>每50µg可用5-50次
产品概述
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
特点：
1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物
2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响
3）高度脂质过氧化物特异性
研究领域
在铁死亡研究中：
作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo
| 细胞种类
(铁死亡诱导剂） |
论文信息 |
| 人支气管上皮细胞（RSL3） | Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium. |
| 小鼠成纤维细胞(RSL3) | Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis. |
| HeLa细胞
(添Erastin或Brefeldin A) |
Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells. |
原理
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
荧光特性
激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm
操作步骤
1.在培养皿或孔板中接种细胞。
2.去除上清液，用无血清培养基洗涤细胞1次。
3.加入适量的Liperfluo工作溶液，37℃孵育30 m in。
*根据实验条件等不同因素，Liperfluo的最佳浓度也不同。需要提前摸索条件。
4.去除上清液并用无血清培养基洗涤细胞2次。
5.在荧光显微镜下观察细胞或使用流式细胞仪分析细胞。
实验例
用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞
1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种H eLa细胞 (3.0×10 4 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基)，
在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。
3) 将200 l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo 溶液加入8孔板中，
在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养30 m in。
4) 去除溶液，用200 l H BSS清洗2次。
5) 均匀地加入200 l用H BSS稀释的500 m ol/l的 t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，
在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。
6) 用共聚焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。
用流式细胞仪检测HeLa细胞
1) 将H eLa细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清M EM 培养基) 接种至6孔板 (Therm o公司) 中，
在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清M EM 培养基清洗细胞1次。
3) 将2 m l用无血清M EM 培养基稀释的1 m ol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5% 的
C O 2 培养箱中培养30 m in。
4) 去除溶液，用2 m l H BSS清洗2次。
5) 均匀地加入2 m l用H BSS稀释的500 m ol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，
在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中培养60 m in。
6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的M EM 培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为H BSS。
7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。
用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像
1) 在 -slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×10 5 个/孔、含10% 胎牛血清D M EM 培养基)，
在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，加入200 l用无血清D M EM 培养基稀释的50 m ol/l的Erastin溶液，
在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中过夜培养。
3) 去除培养基，用200 l H BSS清洗2次。
4) 去除H BSS，加入200 l用H BSS稀释的5 m ol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5% 的C O 2 培养箱中
培养30 m in。
5) 去除溶液，用200 l H BSS清洗2次。
6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm ，发射波长：500-550 nm )。
常见问题Q&A
| Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针， 哪种方法比较好？ |
| A1: 都可以。
先加Liperfluo再加药 用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞 （1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。 （3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。 （4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。 （5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。 （6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。 先加药再加Liperfluo （1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)， 在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液， 在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。 （4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液， 在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。 （5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。 （6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。 |
| Q2. Liperfluo如果按照文献进行，先加探针，后加药，荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验，希望延长荧光时间，是否有好的方法？或者是否可以加荧光防淬灭剂？ |
| A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。
其他的改善方法： (1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。 (2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。 |
| Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？ |
| A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。 |
| Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？ |
| A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。 此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。
(溶解后请务必用铝箔等遮光)。 荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。 因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。 1.增强激发光的强度。 2.延长曝光时间。 |
| Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞 |
| A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。
有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。 |
参考文献
以下文献根据影响因子由高到低排序：
| 细胞种类 | 期刊名 | 出版年 | 影响因子 | 论文题目(含原文链接) |
| 小鼠胚胎成纤维细胞 | Nature | 2023 | 69.5 | Phase separation of FSP1 promotes ferroptosis |
| H9C2（大鼠心肌细胞） | Nature | 2022 | 69.504 | A non-canonical vitamin K cycle is a potent ferroptosis suppressor |
| B16细胞(小鼠黑色素瘤细胞); HT-1080(人纤维肉瘤细胞) | Nature | 2019 | 69.504 | CD8+ T cells regulate tumour ferroptosis during cancer immunotherapy |
| MEF(小鼠胚胎成纤维细胞) | Nature Chemical Biology | 2016 | 12.587 | Oxidized arachidonic and adrenic PEs navigate cells to ferroptosis |
| RAW 264.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞) | Nature Chemical Biology | 2020 | 12.587 | Redox lipid reprogramming commands susceptibility of macrophages and microglia to ferroptotic death |
| Brain slices from LN229TAZ(4SA)(人脑胶质瘤切片) | Nature Communications | 2020 | 12.121 | Neutrophil-induced ferroptosis promotes tumor necrosis in glioblastoma progression |
| HBE(人支气管上皮样细胞) | The Journal of Clinical Investigation | 2018 | 11.864 | Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium |
| HL-60(人骨髓细胞白血病细胞) | Cell Death and Differentiation | 2020 | 10.717 | Oxygenated phosphatidylethanolamine navigates phagocytosis of ferroptotic cells by interacting with TLR2 |
| NCI-ADR/Res (NAR) 人卵巢腺癌细胞 | Biomaterials | 2019 | 10.317 | Triggered ferroptotic polymer micelles for reversing multidrug resistance to chemotherapy |
| 4T1细胞(小鼠乳癌细胞) | ACS Applied Materials & Interfaces | 2019 | 8.758 | Boosting the Ferroptotic Antitumor Efficacy via Site-Specific Amplification of Tailored Lipid Peroxidation |
| BV2 Microglial(小鼠小胶质细胞) | Particle and Fibre Toxicology | 2020 | 7.546 | Induction of ferroptosis in response to graphene quantum dots through mitochondrial oxidative stress in microglia |
| BMDM(小鼠骨髓来源的巨噬细胞) | Particle and Fibre Toxicology | 2017 | 7.546 | SiO2 and TiO2 nanoparticles synergistically trigger macrophage inflammatory responses |
| HT-22（细胞） | Antioxidants | 2023 | 7.0 | Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy |
| 3T3-L1 adipocytes(小鼠脂肪细胞) | Cell Death and Disease | 2018 | 6.304 | Osteocalcin triggers Fas/FasL-mediated necroptosis in adipocytes via activation of p300 |
| OEC-M1(人口腔上皮细胞) | Biomaterials Science | 2018 | 6.183 | Assessment of zero-valent iron-based nanotherapeutics for ferroptosis induction and resensitization strategy in cancer cells |
| Hacat(人永生化角质形成细胞) | Free Radical Biology and Medicine | 2017 | 6.17 | Blue light-induced oxidative stress in live skin |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | Free Radical Biology and Medicine | 2015 | 6.17 | New aspects of 24(S)-hydroxycholesterol in modulating neuronal cell death |
| HEI-OC1(耳蜗毛细胞);鼠新生耳蜗毛细胞 | Oxidative Medicine and Cellular Longevity | 2020 | 5.076 | Liproxstatin-1 Protects Hair Cell-Like HEI-OC1 Cells and Cochlear Hair Cells against Neomycin Ototoxicity |
| Murine T cells(鼠T细胞) | The Journal of Immunology | 2019 | 4.886 | Murine T Cell Maturation Entails Protection from MBL2, but Complement Proteins Do Not Drive Clearance of Cells That Fail Maturation in the Absence of NKAP |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | Molecular Neurobiology | 2020 | 4.5 | Activation of p62-Keap1-Nrf2 Pathway Protects 6-Hydroxydopamine-Induced Ferroptosis in Dopaminergic Cells |
| HEI-OC1(耳蜗毛细胞) | Journal of Cellular and Molecular Medicine | 2020 | 4.486 | Inhibition of ferroptosis protects House Ear Institute-Organ of Corti 1 cells and cochlear hair cells from cisplatin-induced ototoxicity |
| PMVECs(肺微血管内皮细胞) | Lung Cellular and Molecular Physiology | 2019 | 4.406 | Genetic inactivation of the phospholipase A2 activity of peroxiredoxin 6 in mice protects against LPS-induced acute lung injury |
| HepG2(人肝癌细胞) | Journal of Agricultural and Food Chemistry | 2019 | 4.192 | Novel Fluorescence-Based Method To Characterize the Antioxidative Effects of Food Metabolites on Lipid Droplets in Cultured Hepatocytes |
| HeLa(人宫颈癌细胞) | Communications Biology | 2018 | 4.165 | Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells |
| THP-1(人髓系白血病单核细胞);(1×105 cells/mL) | Scientific Reports | 2016 | 3.998 | Molecular hydrogen regulates gene expression by modifying the free radical chain reactiondependent generation of oxidized phospholipid mediators |
| 4T1细胞(小鼠乳癌细胞); HT1080(人纤维肉瘤细胞) | Nanotechnology | 2016 | 3.551 | WO3/Pt nanoparticles promote light-induced lipid peroxidation and lysosomal instability within tumor cells |
| SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞) | RSC Advances | 2012 | 3.119 | A novel fluorescent probe with high sensitivity and selective detection of lipid hydroperoxides in cells |
| Burkitt’s Lymphoma(Burkitt淋巴瘤细胞) | Biochemical and Biophysical Research Communications | 2019 | 2.985 | Artesunate activates the ATF4-CHOP-CHAC1 pathway and affects ferroptosis in Burkitt’s Lymphoma |
| THP-1(人髓系白血病单核细胞) | Canadian Journal of Physiology and Pharmacology | 2019 | 1.946 | Molecular hydrogen suppresses free radical-induced cell death by mitigating fatty acid peroxidation and mitochondrial dysfunction |
| Horse breed stallions(种马精子) | Animal Reproduction Science | 2019 | 1.66 | Effects of media and promoters on different lipid peroxidation assays in stallion sperm |
| Human hair(人头发) | Cosmetics | 2018 | 0.732 | Mechanism of Cuticle Hole Development in Human Hair Due to UV-Radiation Exposure |
关联产品
铁死亡
品名货号用途
| Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11试剂 | L267 | 脂质过氧化检测 |
| Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测 | L248 | 细胞脂质过氧化物检测 |
| MDA检测试剂盒 | M496 | 检测细胞或组织中的MDA浓度 |
| MitoPeDPP试剂 | M466 | 线粒体内脂质过氧化物检测 |
铁死亡的发生
在细胞中有大量的脂质组成细胞膜，细胞膜上的脂质会以大量磷脂的形式存在，细胞内的脂质会分为单不饱和脂肪酸和多不饱和脂肪酸，在氧分子和铁离子的存在下，多不饱和脂肪酸的增加容易被氧化而产生脂质过氧化物，有更多的不饱和脂肪酸的情况下，会更容易扩散，引起细胞膜损伤，也就是我们说的铁死亡。但是正常的细胞是可以调控这种细胞膜损伤，也就是我们常说的GPX4通路等等抗氧化系统，所以细胞才能在氧化物质存在的情况下，仍然可以存活。
以上为铁死亡的简要发生原理，我们也整理了较为详尽的铁死亡通路图，点击下方链接可直接下载
如何检测铁死亡发生
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更多铁死亡指标，请点击查看本页上方表格内各指标详情↑
铁死亡的机制及其在疾病中的作用
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实验例：Erastin诱导铁死亡发生
Erastin是一种已知的铁死亡诱导剂。通过抑制胱氨酸转运蛋白（xCT），erastin抑制胱氨碱的摄取。胱氨酸是谷胱甘肽的原料。因此，Erastin最终会降低GSH的含量。GSH的降低会导致脂质过氧化物的积累和铁死亡的诱导。
以下实验实例显示了在Erastin刺激下各指标结果的变化情况，各项指标均使用Dojindo试剂进行测量。
使用Erastin处理的A549细胞，我们测量了细胞内Fe2+、ROS、脂质过氧化物、谷胱甘肽、谷氨酸释放到细胞外含量和胱氨酸摄取。结果，观察到Erastin对xCT的抑制，导致谷氨酸的释放和胱氨酸的摄取也减少。此外，Erastin处理后，细胞内谷胱甘肽降低，细胞内Fe2+、ROS和脂质过氧化物增加。
更多实验资讯
| 代谢检测指南 |
线粒体检测指南 |
衰老试剂选择指南 | 细胞增殖/毒性检测 |
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细胞周期
| 品名 | 货号 | 用途 |
|---|---|---|
| 细胞周期检测试剂盒-PI/RNase Staining | C543 | 细胞周期（PI通道流式检测） |
| Cell Cycle Assay Solution Blue试剂 | C549 | 细胞周期（ Pacific Blue 通道流式检测） |
| Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂 | C548 | 细胞周期（APC-Cy7通道流式检测） |
特点：
● 荧光法高敏检测胞内二价铁
● 适合于多种检测仪器
● 铁死亡常见指标之一
活动进行中
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凑单关联产品TOP5
NO.1. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
规格性状
性状：可溶于乙腈，甲醇和二甲基亚砜。
纯度（HPLC）：92.0%以上
荧光光谱：符合一致性
产品概述
铁是生物体内最丰富的过渡金属元素，它参与各种生理过程活动。 近年来，活细胞中的游离铁受到广泛关注， 游离铁最常以其稳定的氧化还原态存在，即亚铁离子 (Fe2+) 和铁离子 (Fe3+)。对研究者来说，在研究细胞内的还原环境，金属转运蛋白和Fe2+的水溶性时，了解Fe2+的行为比了解Fe3+的行为更为重要。FerroOrange作为一种新型的荧光探针，可对活细胞内的Fe2+进行荧光成像。
原理
FerroOrange检测胞内Fe2+
图为将2 μl的1 mmol/l FerroOrange和2 μl的10 mmol/l的各种金属离子添加到1 ml的50 mmol/l HEPES缓冲液（pH 7.4）中，并在室温下反应1小时后测量的荧光强度。
荧光特性
Ex：543 nm Em：580 nm
铁离子试剂的选择
| FerroOrange | Mito-FerroGreen | |
| 存在部位 | 细胞内 | 线粒体 |
| 荧光特性 | λex : 543 nm、λem : 580 nm | λex : 505 nm、λem : 535 nm |
| 检测仪器 | 荧光显微镜、荧光酶标仪（Cy3） | 荧光显微镜（FITC、GFP） |
| 测定对象 | 活细胞 | 活细胞 |
| 检测次数 | 24μg可染色17次35mm dish （终浓度为1μmol/l） |
50μg可染色5次35mm dish （终浓度为5μmol/l） |
与其他染料共染
FerroOrange与各种细胞内的染色试剂共染
用各种染色试剂染色HeLa细胞，清洗细胞。然后将FerroOrange添加到细胞中，并用荧光显微镜观察。
与ER染色试剂共染
＜检测条件＞
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
ER Tracker Green（ER染色试剂）: Ex: 488 nm、Em: 510-555 nm
标尺: 10 μm
与线粒体染色试剂共染
＜检测条件＞
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
MitoBright Deep Red（线粒体染色试剂）: Ex: 640 nm、Em: 650-700 nm
标尺: 10 μm
与高尔基体染色试剂的共染
＜检测条件＞
FerroOrange: Ex: 561 nm、Em: 570-620 nm
BODIPY FL（高尔基体染色试剂）: Ex: 488 nm、Em: 510-555 nm
标尺: 10 μm
操作步骤
1.细胞接种于荧光培养皿中，在37℃，5% CO2培养箱中孵育过夜。
2.弃去上清液，并用HBSS或无血清培养基洗涤细胞3次。
3.更换含有药物的培养基，在37℃，5% CO2培养箱中孵育。
* 请根据药物特性优化孵育时间。
4.加入浓度为1 μmol/l的FerroOrange工作液，在37℃，5% CO2培养箱中孵育。
* 加入FerroOrange染色剂后请立即观察，不要洗涤。
5.在荧光显微镜下观察细胞。
高灵敏度检测胞内铁离子
使用HeLa细胞，通过FerroOrange确认细胞内Fe2+的变化
与对照组的细胞相比，用硫酸亚铁 (II) 铵处理的HeLa细胞的FerroOrange荧光强度增加。 相反，在用Bpy处理的细胞中，其荧光强度降低。
因此，证明FerroOrange与细胞内Fe2+反应。
A: 对照组
B: 铁剂·硫酸亚铁(II) 铵（终浓度100umol/l）处理
C: 铁螯合剂·2,2′-Bipyridyl (Bpy)（终浓度100umol/l）处理
检测条件 Ex/Em = 561 nm/570-620 nm 比例尺：20 μm
使用流式细胞仪检测
通过流式细胞仪进行定量分析
——FerroOrange的荧光强度可能受细胞密度和细胞种类的影响
——培养基的更换和清洗可能使染料从细胞内泄露
——进行流式定量分析时，需优化实验步骤
<Usage Example>
1. HeLa cells (1 x105 cells/well) in MEM (10% fetal bovine serum, 1% penicillin-streptomycin) were seeded on a 6 well plate and were cultured at 37oC in a 5% CO2 incubator overnight.
2. The cells were washed with serum-free medium (2 mL) three times. Then, serum-free medium (1 mL) was added to the cells.
3. 10 mmol/L Ammonium iron (II) sulfate (10 μL) was added to wells (The final concentration: 100 μmol/L).
4. To mix Ammonium iron(II) sulfate and serum-free medium, the entire medium was pipetted up from wells and then immediately pipetted back one time.
5. The cells were incubated for 20 min in a 37oC incubator equilibrated with 95% air and 5% CO2, and the cells were washed with HBSS (1 mL) three times.
6. After trypsinization (250 µL), stop the reaction with serum medium (1 mL), 1.25 ml of the cell suspension was transferred to a microcentrifuge tube.
7. The cells suspension was centrifuged at 1,500 rpm for 3 minutes.
8. The supernatant was discarded and HBSS (1 mL) was added to the microcentrifuge tube and suspended by pipetting.
9. The cells suspension was centrifuged at 1,500 rpm for 3 minutes and the supernatant was discarded.
10. 1 μmol/L FerroOrange in MEM (serum-free medium) (300 μL) was added to the cells.
11. The cells were incubated for 15 -30 min in a 37oC incubator equilibrated with 95% air and 5% CO2.
12. The stained cells were passed through a cell strainer and analyze samples using a flow cytometer.
<注意点>
1.清洗对于结果分析的影响
2.染料体积对于结果分析的影响
常见问题Q&A
| Q1:FerroOrange由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？ |
| A1:由于FerroOrange是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。 |
| Q2: FerroOrange只会检测游离铁吗？还是某些如铁硫蛋白里的结合铁，都可以检测吗？ |
| A2：FerroOrange只检测游离的二价铁 |
| Q3: 有哪些帮助实验成功的技巧？ |
| A3:（1）染色后不要清洗工作液，因为这样可能会让细胞内的FerroOrange泄露出来。
（2）为了获得更加可靠的实验数据，我们建议准备Bpy（2,2`联吡啶，抑铁剂）或硫酸亚铁铵（增铁剂）处理的细胞作为对照组，以便于FerroOrange的数据进行比较。 |
| Q4: FerroOrange能否用于固定处理之后的样本? |
| A4:不能用于石蜡切片。
试剂能尝试于温和条件下固定处理之后的样本，如多聚甲醛（PFA，终浓度3%）在4°C中培养10 min。与未固定的样本相比，固定20 min以上或室温固定后的样本的荧光强度会明显降低。请注意本探针可能很难于固定样本中使用，必须先进行染色，然后做尝试。 |
| Q5:本探针适合于什么检测方式？ |
| A5:见表格
我们建议使用绿色激光（Ex:532 nm）激发FerroOrange |
| Q6:染色时需要注意什么？ |
| A6：注意如下，
1.FerroOrange染色后的对培养基的更换。 染色后无需清洗工作液，通常血清中含有铁离子，请注意使用不含血清的培养基，所以染色后即使细胞外有残留的FerroOrange，但是因为细胞外没有血清中铁离子的影响，也不会产生背景荧光的问题。 2.细胞难以染色(灵敏度低)时的办法。 根据细胞种类的不同，染色程度也有差异。 使FerroOrange working solution浓度高于推荐的1 µmol/l进行染色。建议在1-5 µmol/l范围内染色。 |
| Q7:使用荧光酶标仪的操作步骤 |
| A7：请参考下面的实验例子进行测量。
<测定样品>。 样品A：无添加剂(仅HeLa细胞)。 样品B：添加了铁螯合试剂2,2`-bipyridyl(Bpy)的HeLa细胞。 样品C：添加铁(硫酸铵铁)的HeLa细胞。 <测量操作>。 1.在96孔黑板(透明底)上接种100 µl HeLa细胞悬液，使其达到10,000 cells/well，在37℃ 5%CO2 培养箱中过夜培养。 2.样品C的细胞用MEM(不含FBS)100 µl洗涤3次。 3.向样品C中添加100 μl硫酸铵铁(II)/MEM(不含FBS) (最终浓度: 100 µmol/l)，在37℃ 5%CO2培养箱中静置30分钟。 4.用100 µl HBSS洗涤所有孔的细胞3次。 5.向样品A和C中添加100 μl的1 µmol/l FerroOrange working solution ，向样品B中添加100 μl含有FerroOrange(最终浓度:1 µmol/l)和Bpy(最终浓度:100 µmol/l)的HBSS溶液，在37℃ 5%CO2培养箱中培养30分钟。 6.用多功能读板器检测各样品的荧光强度(Ex:543 nm,Em:580 nm)。 |
| Q8：推荐的滤光片 |
| A8: 激发滤光片:530-565 nm
发射滤光片:570-620 nm |
| Q9: FerroOrange染色后是否有必要洗掉工作液？ |
| A9:我们建议染色后不要清洗，因为这样可能会导致细胞中的FerroOrange泄露出来。
以下有关于不同细胞密度和细胞种类确认的情况， <不同细胞密度>
<不同细胞种类>
|
参考文献
1.K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, “MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.”, Biochem. Biophys Res Commun., 2019,DOI: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117
2.Y. Wang and M. Tang, “PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance”, Environ. Pollut., 2019, 264,DOI: 10.1016/j.envpol.2019.07.105
3.S Guo, X Yao, Q Jiang, K Wang, Y Zhang, H. Peng, J. Tang and W. Yang , “Dihydroartemisinin-Loaded Magnetic Nanoparticles for Enhanced Chemodynamic Therapy”, Front Pharmacol,2020,11,226.DOI: 10.3389/fphar.2020.00226
4.R. A. Weber, F. S. Yen, S.P.V. Nicholson, H. Alwaaseem, E.C. Bayraktar,M. Alam, R. C. Timson, K. La, M. Abu-Remaileh, H. Molina and K. Birsoy, “Maintaining Iron Homeostasis Is the Key Role of Lysosomal Acidity for Cell Proliferation”, Mol. Cell, 2020, 77, 1-11.DOI: 10.1016/j.molcel.2020.01.003
5.X. Li, T. Wang, X. Huang, Y. Li, T. Sun, S. Zang, K. Guan, Y. Xiong, J. Liu and H. Yuan , “Targeting ferroptosis alleviates methionine‐choline deficient (MCD)‐diet induced NASH by suppressing liver lipotoxicity”, Liver Int., 2020,DOI: 10.1111/liv.14428
6.T. Hirayama, M. Niwa, S. Hirosawa and H. Nagasawa, “High-Throughput Screening for the Discovery of Iron Homeostasis Modulators Using an Extremely Sensitive Fluorescent Probe”, ACS Sens., 2020,DOI: 10.1021/acssensors.0c01445
论文6中记载的 “RhoNox-4”的化合物就是“FerroOrange”。
关联产品
分子式：
C51H41N2O8P
分子量：
840.85
特点：
● 特异性检测铁死亡相关的脂质过氧化
● 比BODIPY C11更适合于胞内定位
● 铁死亡常见指标之一
活动进行中
订购满5000元，200元礼品等你拿
凑单关联产品TOP5
NO.1. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II 氧化型/还原型谷胱甘肽
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. Mito-FerroGreen 线粒体内亚铁离子检测
NO.5. ROS Assay Kit 活性氧检测
规格性状
性状：深红色结晶粉末或固体。
纯度（HPLC）：90.0%以上
核磁共振谱：符合一致性
<使用次数>每50µg可用5-50次
产品概述
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
特点：
1）能够成像和检测细胞中的脂质过氧化物
2）长波长激发，可以减少光损伤和自发荧光对细胞的影响
3）高度脂质过氧化物特异性
研究领域
在铁死亡研究中：
作为细胞死亡形式之一，在铁死亡研究中使用到Liperfluo
| 细胞种类
（铁死亡诱导剂） |
论文信息 |
| 人支气管上皮细胞（RSL3） | Pseudomonas aeruginosa utilizes host polyunsaturated phosphatidylethanolamines to trigger theft-ferroptosis in bronchial epithelium. |
| 小鼠成纤维细胞(RSL3) | Oxidized arachidonic and adrenic PE s navigate cells to ferroptosis. |
| HeLa细胞(添Erastin或Brefeldin A) | Golgi stress mediates redox imbalance and ferroptosis in human cells. |
原理
Liperfluo是Spy-LHP的类似物，可用于检测脂质过氧化物 (LPO)，Liperfluo会被脂质过氧化物特异性氧化而在乙醇等有机溶剂中发出很强的荧光。由于氧化型Liperfluo的激发和发射波长分别为524 nm和535 nm (均为长波长)，因此可以减轻光对测定样品的损伤和降低样品的自发荧光。由于Liperfluo在二异喹啉环的一个末端连接有四乙二醇基团，因此提高了它在水溶液中的分子分散性。虽然它的氧化型在水溶液中几乎没有荧光，但是在细胞膜等脂溶性高的部位会产生较强的荧光。因此Liperfluo适用于活细胞中脂质过氧化物的荧光成像或流式分析。
荧光特性
激发波长Ex：488 nm，发射波长Em：500-550 nm
操作步骤
1.在dish等容器中接种细胞并培养。
2.去除培养基后，用无血清培养基清洗一次。
3.加入合适浓度的Liperfluo工作液，在37℃培养30 min。
※请根据细胞种类，诱导药物等实验条件，摸索最佳的Liperfluo工作液浓度。
4.去除上清液后，用无血清培养基清洗2次。
5.用荧光显微镜或流式细胞仪进行检测。
实验例
用激光共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞
1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种HeLa细胞 (3.0×104个/孔、含血清MEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。
3) 将200 μl用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
4) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
5) 均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的 t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。
6) 用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
用流式细胞仪检测HeLa细胞
1) 将HeLa细胞 (1.0×105个/孔、含血清MEM培养基) 接种至6孔板(Thermo公司) 中，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞1次。
3) 将2 ml用无血清MEM培养基稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入6孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
4) 去除溶液，用2 ml HBSS清洗2次。
5) 均匀地加入2 ml用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP (tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。
6) 用胰酶消化细胞后，用含有血清的MEM培养基重悬细胞，移至管中并将培养基更换为HBSS。
7) 用流式细胞仪检测 (激发波长：488 nm，发射波长：515-545 nm)。
用Erastin诱导铁死亡细胞的荧光成像
1) 在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
2) 去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。
3) 去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。
4) 去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。
5) 去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。
6) 用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。
常见问题Q&A
| Q1.文献实验方法：先加Liperfluo，后加药；说明书实验方法：先加药，后加探针， 哪种方法比较好？ |
| A1: 都可以。
先加Liperfluo再加药 用共聚焦荧光显微镜观察HeLa细胞 （1）在μ-slide 8孔板中（ibidi公司）接种HeLa细胞（3.0×104个/孔、含血清MEM培养基），在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （2）去除培养基，用无血清MEM培养基清洗细胞一次。 （3）将200 μl无血清MEM培养基稀释后的1 μmol/l的Liperfluo溶液加入8孔板中，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。 （4）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。 （5）均匀地加入200 μl用HBSS稀释的500 μmol/l的t-BHP(tert-Buthyl Hydroperoxide) 溶液，在37℃ 5%的CO2培养箱中培养60 min。 （6）用共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。 先加药再加Liperfluo （1）在 μ-slide 8孔板中 (ibidi公司) 接种A549细胞 (1.0×105个/孔、含血清DMEM培养基)， 在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （2）去除培养基，加入200 μl用无血清DMEM培养基稀释的50 μmol/l的Erastin溶液， 在37℃ 5%的CO2培养箱中过夜培养。 （3）去除培养基，用200 μl HBSS清洗2次。 （4）去除HBSS，加入200 μl用HBSS稀释的1 μmol/l的Liperfluo溶液， 在37℃ 5%的CO2培养箱中培养30 min。 （5）去除溶液，用200 μl HBSS清洗2次。 （6）用激光共焦荧光显微镜观察 (激发波长：488 nm，发射波长：500-550 nm)。 |
| Q2. Liperfluo如果按照文献进行，先加探针，后加药，荧光淬灭时间为2小时可能无法满足实验，希望延长荧光时间，是否有好的方法？或者是否可以加荧光防淬灭剂？ |
| A2: 关于荧光抗淬灭剂：由于抗淬灭剂的作用原理，有可能无法在实验中使用。
其他的改善方法： (1)如果褪色的原因是由光源照射造成的褪色。可以尝试减小光源强度进行观测。 (2)清洗操作后长时间放置可能会造成探针向细胞外漏出。可考虑不清洗直接观察。 |
| Q3.Liperfluo由于是活细胞荧光探针，如果铁死亡发生，导致细胞膜破裂后，荧光是否存在？ |
| A3:由于Liperfluo是活细胞探针，对死细胞无法发挥出探针的正常性能。 |
| Q4：培养基中酚红或血清对实验有没有影响？此外，在背景高或荧光弱的情况下有没有改善意见？ |
| A4:可用于酚红或含血清培养基。但是，如果背景高，请用PBS替换。 此外，当背景较高时，Liperfluo可能会被光自然氧化，培养时也请尽量遮光。
(溶解后请务必用铝箔等遮光)。 荧光强度弱的情况下，即使反应时间延长，背景也会变高，所以不推荐。 因此，建议调整设备 (荧光观察)的条件。 1.增强激发光的强度。 2.延长曝光时间。 |
| Q5：悬浮和贴壁细胞都可以使用Liperfluo染色吗？是否可以染色固定细胞 |
| A5:悬浮和贴壁细胞，都可以使用。
有实验经验的：HL-60细胞(悬浮细胞)，CHO细胞·SH-SY5Y细胞(贴壁细胞)等，固定的细胞不能染色。 |
参考文献
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Y |
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