月度归档：2024年04月

Hampton蛋白结晶试剂盒Tacsimate pH4&5&6&7&8&9/HR2-823/HR2-755/HR2-829/HR2-813

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Salts > Tacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9

Tacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9

Tacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9
CAT NO

HR2-823

NAME

100% Tacsimate pH 4.0

DESCRIPTION

200 mL

PRICE

$120.00

CAT NO

HR2-825

NAME

100% Tacsimate pH 5.0

DESCRIPTION

200 mL

PRICE

$120.00

CAT NO

HR2-827

NAME

100% Tacsimate pH 6.0

DESCRIPTION

200 mL

PRICE

$120.00

CAT NO

HR2-755

NAME

100% Tacsimate pH 7.0

DESCRIPTION

200 mL

PRICE

$120.00

CAT NO

HR2-829

NAME

100% Tacsimate pH 8.0

DESCRIPTION

200 mL

PRICE

$120.00

CAT NO

HR2-813

NAME

100% Tacsimate pH 9.0

DESCRIPTION

200 mL

PRICE

$120.00

支持材料

Tacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 What is Tacsimate?Tacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 Mixing Tacsimate Stocks to Screen PhTacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 HR2-823 Tacsimate 100% solution pH 4.0 SDSTacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 HR2-825 Tacsimate 100% solution pH 5.0 SDSTacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 HR2-827 Tacsimate 100% solution pH 6.0 SDSTacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 HR2-755 Tacsimate 100% solution pH 7.0 SDSTacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 HR2-829 Tacsimate 100% solution pH 8.0 SDSTacsimate pH 4, 5, 6, 7, 8, & 9 HR2-813 Tacsimate 100% solution pH 9.0 SDS

应用

  • Crystallization grade Tacsimate for formulating screens or for optimization
  • 结晶级 Tacsimate 用于配制屏幕或优化

特征

  • Sterile filtered solution
  • Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
  • 无菌过滤溶液
    在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述

To screen pH as a crystallization variable using Tacsimate one can mix together different ratios of different pH Tacsimate solutions. Refer to the pdf “Mixing Tacsimate Stocks to Screen pH” on this page. Or, one can add a buffer to the crystallizaiton reagent containing Tacsimate. Recommended final buffer concentration in the reagent well is 0.05 to 0.1 M.

Tacsimate
A pH titrated mixture of organic acids. 1.8305 M Malonic acid, 0.25 M Ammonium citrate tribasic, 0.12 M Succinic acid, 0.3 M DL-Malic acid, 0.4 M Sodium acetate trihydrate, 0.5 M Sodium formate, 0.16 M Ammonium tartrate dibasic. pH adjusted using NaOH

Measured pH of 100% Tacsimate is 4.0 at 25°C
Measured pH of 100% Tacsimate is 5.0 at 25°C
Measured pH of 100% Tacsimate is 6.0 at 25°C
Measured pH of 100% Tacsimate is 7.0 at 25°C
Measured pH of 100% Tacsimate is 8.0 at 25°C
Measured pH of 100% Tacsimate is 9.0 at 25°C

为了使用 Tacsimate 将 pH 值筛选为结晶变量，可以将不同比例的不同 pH 值的 Tacsimate 溶液混合在一起。 请参阅本页上的 pdf“混合 Tacsimate 库存以筛选 pH 值”。 或者，可以将缓冲液添加到含有 Tacsimate 的结晶试剂中。 试剂孔中推荐的最终缓冲液浓度为 0.05 至 0.1 M。

战术
pH 值滴定的有机酸混合物。 1.8305 M 丙二酸、0.25 M 柠檬酸三铵、0.12 M 琥珀酸、0.3 M DL-苹果酸、0.4 M 三水乙酸钠、0.5 M 甲酸钠、0.16 M 酒石酸氢铵。 使用 NaOH 调节 pH

在 25°C 时测得的 100% Tacsimate 的 pH 值为 4.0
在 25°C 时测得的 100% Tacsimate 的 pH 值为 5.0
在 25°C 时测得的 100% Tacsimate 的 pH 值为 6.0
在 25°C 时测得的 100% Tacsimate 的 pH 值为 7.0
在 25°C 时测得的 100% Tacsimate 的 pH 值为 8.0
在 25°C 时测得的 100% Tacsimate 的 pH 值为 9.0

Mixture of organic acids. Malonic acid, Ammonium citrate tribasic, Succinic acid, DL-Malic acid, Sodium acetate trihydrate, Sodium formate, and Ammonium tartrate dibasic

有机酸的混合物。 丙二酸、柠檬酸三铵、琥珀酸、DL-苹果酸、醋酸钠三水合物、甲酸钠和酒石酸氢铵

参考

1. Searching for silver bullets: An alternative strategy for crystallizing macromolecules. Alexander McPherson and Bob Cudney. Journal of Structural Biology 156 (2006) 387–406.

2. A novel strategy for the crystallization of proteins: X-ray diffraction validation. Steven B. Larson, John S. Day, Robert Cudney and Alexander McPherson. Acta Cryst. (2007). D63, 310–318.

3. Structure of the catalytic and ubiquitin-associated domains of the protein kinase MARK/Par-1. Eckhard Mandelkow et al. Structure 14, 173-183, February 2006.

4. A comparison of salts for the crystallization of macromolecules. Alexander McPherson. Protein Science (2001), 10:418-422.

5. Crystallization of a newly discovered histidine acid phosphatase from Francisella tularensis. Richard L. Felts, Thomas J. Reilly, Michael J. Calcutt, and John J. Tanner. Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun. 2006 January 1; 62(Pt 1): 32–35.

6. Structure of the GTPase and GDI domains of FeoB, the ferrous iron transporter of Legionella pneumophila. Petermann et al, FEBS Letters Volume 584, Issue 4, Pages 733-738 (19 February 2010).

1. 寻找灵丹妙药：结晶大分子的另一种策略。亚历山大·麦克弗森和鲍勃·库德尼。结构生物学杂志 156 (2006) 387–406。

2. 蛋白质结晶的新策略：X 射线衍射验证。 Steven B. Larson、John S. Day、Robert Cudney 和 Alexander McPherson。晶体学报。 （2007 年）。 D63，310-318。

3. 蛋白激酶 MARK/Par-1 的催化和泛素相关结构域的结构。 Eckhard Mandelkow 等人。结构 14, 173-183，2006 年 2 月。

4. 大分子结晶盐的比较。亚历山大·麦克弗森。蛋白质科学（2001），10：418-422。

5. 从土拉弗朗西斯菌中新发现的组氨酸酸性磷酸酶的结晶。 Richard L. Felts、Thomas J. Reilly、Michael J. Calcutt 和 John J. Tanner。 Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun。 2006 年 1 月 1 日； 62（第 1 篇）：32-35。

6. 嗜肺军团菌的亚铁转运体 FeoB 的 GTPase 和 GDI 结构域。 Petermann 等人，FEBS Letters 第 584 卷，第 4 期，第 733-738 页（2010 年 2 月 19 日）。

Hampton蛋白结晶试剂盒Trimethylamine N-oxide dihydrate/HR2-777

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Salts > Trimethylamine N-oxide dihydrate

Trimethylamine N-oxide dihydrate

Trimethylamine N-oxide dihydrate
CAT NO

HR2-777

NAME

1.0 M Trimethylamine N-oxide dihydrate

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$130.00

支持材料

Trimethylamine N-oxide dihydrate HR2-777 Trimethylamine N-oxide dihydrate SDS

应用

  • Crystallization grade Trimethylamine N-oxide dihydrate for formulating screens or for optimization
  • 结晶级三甲胺 N-氧化物二水合物，用于配制筛选或优化

特征

  • Sterile filtered solution
  • Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
  • 无菌过滤溶液
    在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Trimethylamine N-oxide dihydrate

Synonym: TMANO
(CH3)3NO • 2H2O
C3H9NO • 2H2O
Mr 111.14
CAS Number [62637-93-8]
EC Number 214-675-6
Beilstein Registry Number 4(4)144
Merck 14,9711
RTECS YH2850000
MDL Number MFCD00002048
Purity > 98.0%
Maximum solubility is 6.0 M at 25°C (tested by Hampton Research)

Measured pH Range: 8.0 – 9.3 at 25°C
Measured Conductivity Range: 10.9 – 67.1 µS/cm at 25°C
Measured Refractive Index Range: 1.34320 – 1.34348 at 20°C

同义词： TMANO
(CH3)3NO • 2H2O
C3H9NO • 2H2O
111.14 先生
CAS 编号 [62637-93-8]
欧盟编号 214-675-6
贝尔斯坦注册号 4(4)144
默克 14,9711
RTECS YH2850000
MDL 编号 MFCD00002048
纯度 > 98.0%
25°C 时最大溶解度为 6.0 M（由 Hampton Research 测试）

测得的 pH 范围：25°C 时 8.0 – 9.3
测得的电导率范围：25°C 时为 10.9 – 67.1 µS/cm
测得的折射率范围：20°C 时为 1.34320 – 1.34348

Trimethylamine N-oxide dihydrate

参考

1. Use of organic cosmotropic solutes to crystallize flexible proteins: Application to T7 RNA polymerase and its complex with the inhibitor T7 lysozyme. Jeruzalmi and Steitz, J. Mol. Bio. (1997) 274, 748-756.

2. Trimethylamine N-oxide as a versatile cryoprotective agent in macromolecular crystallography. Mueller-Dieckmann, C., Kauffmann, B., and Weiss, M. J. Appl. Cryst. (2011). 44, 433–436.

3. Crystallization of a functionally intact Hsc70 chaperone. J. Jiang, E. M. Lafer and R. Sousa. Acta Cryst. (2006). F62, 39-43.

4. Doolittle, R. F. (2003). Biophys. Chem. 100, 307–313.

5. Hill, M. C., Bates, I. R., White, G. F., Hallett, F. R. & Harauz, G. (2002). J.

6. Auton, M. & Bolen, D. W. (2005). Proc. Natl Acad. Sci. USA, 102, 15065–15068.

7. Bolen, D. W. (2004). Methods, 34, 312–322.

Hampton蛋白结晶试剂盒Tryptone/HR2-835

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Salts > Tryptone

Tryptone

Tryptone
CAT NO

HR2-835

NAME

10% w/v Tryptone

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$94.00

支持材料

Tryptone HR2-835 10% w/v Tryptone SDS

应用

  • Crystallization grade Tryptone for formulating screens or for optimization
  • 用于配制筛选或优化的结晶级胰蛋白胨

特征

  • Sterile filtered solution
  • Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
  • 无菌过滤溶液
    在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Tryptone

Synonyms: Peptone from casein
Microbiologically tested
CAS Number [91079-40-2]
EC Number: 293-428-4

Measured pH Range: 6.9 – 7.1 at 25°C
Measured Conductivity Range: 7.5 – 11.1 mS/cm at 25°C
Measured Refractive Index Range: 1.35040 – 1.35133 at 20°C

Tryptone is the assortment of peptides formed by the digestion of casein by the protease trypsin. Tryptone is rich in tryptophan. There are no detectable levels of carbohydrates in Tryptone. The enzymatic digest is pasteurized and spray dried prior to formulation in Type 1 laboratory water and sterile filtered (0.22 micron filter).

同义词：酪蛋白蛋白胨
微生物测试
CAS 编号 [91079-40-2]
欧盟编号：293-428-4

测得的 pH 值范围：25°C 时为 6.9 – 7.1
测得的电导率范围：25°C 时 7.5 – 11.1 mS/cm
测得的折射率范围：20°C 时为 1.35040 – 1.35133

胰蛋白胨是由蛋白酶胰蛋白酶消化酪蛋白形成的肽组合。 色氨酸富含色氨酸。 胰蛋白胨中没有可检测到的碳水化合物水平。 酶消化物经过巴氏杀菌和喷雾干燥，然后在 1 型实验室用水中进行配制并无菌过滤（0.22 微米过滤器）。

参考Tryptone

1. Progress in the Development of an Alternative Approach to Macromolecular Crystallization. S. B. Larson,J. S. Day, C. Nguyen, R. Cudney, and A. McPherson. Crystal Growth & Design 2008 Volume 8, No. 8 3038-3052.

1. 大分子结晶替代方法的开发进展。 S. B.拉尔森，J. S. Day、C. Nguyen、R. Cudney 和 A. McPherson。 晶体生长与设计 2008 年第 8 卷，第 8 期 3038-3052。

Hampton蛋白结晶试剂盒Zinc acetate dihydrate/HR2-563

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Salts > Zinc acetate dihydrate

Zinc acetate dihydrate

Zinc acetate dihydrate

CAT NO

HR2-563

NAME

1.0 M Zinc acetate dihydrate

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$102.00

支持材料

Zinc acetate dihydrate HR2-563 Zinc acetate dihydrate SDS

应用

  • Crystallization grade Zinc acetate dihydrate for formulating screens or for optimization
  • 结晶级醋酸锌二水合物，用于配制屏幕或优化

特征

  • Sterile filtered solution
  • Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
  • 无菌过滤溶液
    在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Zinc acetate dihydrate

Synonyms: Zinc acetate
Zn(CH3COO)2 • 2H2O
C4H6O4Zn • 2H2O
Mr 219.52
CAS Number [5970-45-6]
EC Number 209-170-2
Beilstein Registry Number 3732513
Merck 14,10128
RTECS ZG8750000
UN Number 3077 9/PG 3
MDL Number MFCD00066961
PubChem Substance ID 24890299
Purity ≥ 99.0%

Measured pH range: 5.7 – 5.8 at 25°C
Measured Conductivity Range: 17.3 – 17.9 mS/cm at 25°C
Measured Refractive Index Range: 1.35728 – 1.35741 at 20°C

别名：醋酸锌
Zn(CH3COO)2 • 2H2O
C4H6O4Zn • 2H2O
219.52 先生
CAS 编号 [5970-45-6]
欧盟编号 209-170-2
贝尔斯坦注册号 3732513
默克 14,10128
RTECS ZG8750000
联合国编号 3077 9/PG 3
MDL 编号 MFCD00066961
PubChem 物质 ID 24890299
纯度≥99.0%

测得的 pH 值范围：25°C 时为 5.7 – 5.8
测得的电导率范围：25°C 时 17.3 – 17.9 mS/cm
测得的折射率范围：20°C 时为 1.35728 – 1.35741

As  ≤0.00001%
Ca ≤0.001%
Cd ≤0.0005%
Cl  ≤0.0005%
Co ≤0.0005%
Cr ≤0.0005%
Cu ≤0.0005%
Fe ≤0.0005%
K   ≤0.005%
Mg ≤0.0005%
Mn ≤0.0005%
N    ≤0.002%
Na  ≤0.005%
Ni   ≤0.0005%
Pb   ≤0.0005%
SO4 ≤0.005%

参考 Zinc acetate dihydrate

1. A new crystal form of carboxypeptidase G from Pseudomonas sp. strain RS-16 which is more amenable to structure determination. Tucker, AD; Rowsell, S; Melton, RG; Pauptit, RA. Acta Crystallogr D 52, 890- 892, 1996.

1. 一种来自假单胞菌属的羧肽酶 G 的新晶型。 应变 RS-16 更适合结构测定。 塔克，广告； 罗塞尔，S； 梅尔顿，RG； 帕普蒂特，RA。 晶体学学报 D 52, 890-892, 1996。

Hampton蛋白结晶试剂盒Zinc chloride/HR2-811

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Salts > Zinc chloride

Zinc chloride

Zinc chloride
CAT NO

HR2-811

NAME

2.0 M Zinc chloride

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$77.00

Support Material(s)

Zinc chloride HR2-811 Zinc chloride SDS

应用

  • Crystallization grade Zinc chloride for formulating screens or for optimization
  • 结晶级氯化锌，用于筛选或优化

特征

  • Sterile filtered solution
  • Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
  • 无菌过滤溶液
    在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Zinc chloride

Synonyms: Zinc chloride anhydrous
ZnCl2
Cl2Zn
Mr 136.30
CAS [7646-85-7]
EC Number 231-592-0
Merck 14,10132
Beilstein Registry Number 3732513
RTECS ZH1400000
UN Number 2331 8/PG 3
MDL Number MFCD00011295
Melting Point (Starting Material) 293°C (lit.)

Measured pH Range: 3.1 – 4.1 at 25°C
Measured Conductivity Range: 90.2 – 104.3 mS/cm at 25°C
Measured Refractive Index Range: 1.37536 – 1.37646 at 20°C

别名：无水氯化锌
氯化锌
氯化锌
136.30 先生
CAS [7646-85-7]
欧盟编号 231-592-0
默克 14,10132
贝尔斯坦注册号 3732513
RTECS ZH1400000
联合国编号 2331 8/PG 3
MDL 编号 MFCD00011295
熔点（起始材料）293°C（点燃）

测得的 pH 范围：25°C 时 3.1 – 4.1
测得的电导率范围：25°C 时 90.2 – 104.3 mS/cm
测得的折射率范围：20°C 时为 1.37536 – 1.37646

Ca ≤0.001%
Cd ≤0.0005%
Cu ≤0.001%
Fe ≤0.0005%
K   ≤0.001%
Mg ≤0.001%
N   ≤0.002%
Na ≤0.001%
Pb  ≤0.001%
SO4 ≤0.002%
ZnO ≤1.2%

Zinc chloride

Hampton蛋白结晶试剂盒Zinc sulfate heptahydrate/HR2-641

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Salts > Zinc sulfate heptahydrate

Zinc sulfate heptahydrate

Zinc sulfate heptahydrate
CAT NO

HR2-641

NAME

2.0 M Zinc sulfate heptahydrate

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$92.00

支持材料

Zinc sulfate heptahydrate HR2-641 Zinc sulfate heptahydrate SDS

应用

  • Crystallization grade Zinc sulfate heptahydrate for formulating screens or for optimization
  • 结晶级七水硫酸锌，用于筛选或优化

特征

  • Sterile filtered solution
  • Formulated in Type 1+ ultrapure water: 18.2 megaohm-cm resistivity at 25°C, < 5 ppb Total Organic Carbon, bacteria free (<1 Bacteria (CFU/ml)), pyrogen free (<0.03 Endotoxin (EU/ml)), RNase-free (< 0.01 ng/mL) and DNase-free (< 4 pg/µL)
  • 无菌过滤溶液
    在 1+ 型超纯水中配制：25°C 时电阻率为 18.2 兆欧厘米，总有机碳 < 5 ppb，无细菌（<1 细菌 (CFU/ml)），无热原（<0.03 内毒素 (EU/ml)） , 无 RNase (< 0.01 ng/mL) 和无 DNase (< 4 pg/µL)

描述Zinc sulfate heptahydrate

Synonyms: None
ZnSO4 • 7H2O
Mr 287.56 (161.46 without water)
CAS Number [7446-20-0]
EC Number 231-793-3
RTECS ZH5300000
Merck 14,10159
MDL Number MFCD00149894
PubChem Substance ID 24859031
Purity ≥ 99.5%
UN Number UN 3077 9/PG 3

Measured pH range: 3.4 – 4.4 at 25°C
Measured Conductivity Range: 54.1 – 57.6 mS/cm at 25°C
Measured Refractive Index Range: 1.38196 – 1.38598 at 20°C

同义词：无
ZnSO4 • 7H2O
287.56先生（161.46无水）
CAS 编号 [7446-20-0]
欧盟编号 231-793-3
RTECS ZH5300000
默克 14,10159
MDL 编号 MFCD00149894
PubChem 物质 ID 24859031
纯度≥99.5%
联合国编号 UN 3077 9/PG 3

测得的 pH 值范围：25°C 时为 3.4 – 4.4
测得的电导率范围：25°C 时 54.1 – 57.6 mS/cm
测得的折射率范围：20°C 时为 1.38196 – 1.38598

As ≤0.00005%
Ca ≤0.001%
Cd ≤0.0002%
Cl ≤0.0005%
Cu ≤0.0005%
Fe ≤0.0005%
K  ≤0.001%
Mg ≤0.001%
Mn ≤0.0002%
N  ≤0.0005%
Na ≤0.0005%
Pb ≤0.0005%

Zinc sulfate heptahydrate

参考

1. Crystallization and preliminary X-ray diffraction studies of psoriasin. Nolsoe, S; Thirup, S; Etzerodt, M; Thogersen, HC; Nyborg, J. Acta Crystallogr D 53, 119- 121, 1997.

1. 牛皮癣的结晶和初步 X 射线衍射研究。 诺尔索，S； 蒂鲁普，S； 埃泽罗特，M； 托格森，HC； Nyborg, J. Acta Crystallogr D 53, 119-121, 1997。

Hampton蛋白结晶试剂盒Ethylene glycol/HR2-621

发表于由

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Organics (Non-Volatile) > Ethylene glycol

Ethylene glycol

Ethylene glycol
CAT NO

HR2-621

NAME

100% Ethylene glycol

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$46.00

支持材料

Ethylene glycol HR2-621 Ethylene glycol SDS

应用

  • Crystallization grade Ethylene glycol for formulating screens or for optimization
  • 结晶级乙二醇，用于配制筛网或优化

特征

  • Ethylene glycol is useful for crystallization as well as cryoprotection
  • 乙二醇可用于结晶以及冷冻保护

描述Ethylene glycol

Synonyms: 1,2-Ethanediol
C2H6O2
HOCH2CH2OH
Mr 62.07
CAS Number [107-21-1]
EC Number 203-473-3
Beilstein Registry Number 505945
RTECS KW2975000
MDL Number MFCD00002885
Purity ≥ 99%
UN Number 3082 9/PG 3
Density 1.113 g/mL at 25°C (lit.)

Measured pH range of 100% Ethylene glycol: 5.1 – 7.8 at 25°C
Measured Conductivity Range: 0.0 – 9.7 µS/cm at 25°C
Measured Refractive Index Range: 1.42866 – 1.43219 at 20°C

同义词：1,2-乙二醇
C2H6O2
HOCH2CH2OH
62.07 先生
CAS 编号 [107-21-1]
欧盟编号 203-473-3
贝尔斯坦注册号 505945
RTECS KW2975000
MDL 编号 MFCD00002885
纯度≥99%
联合国编号 3082 9/PG 3
密度 1.113 g/mL 在 25°C (lit.)

100% 乙二醇的测量 pH 值范围：25°C 时为 5.1 – 7.8
测量电导率范围：25°C 时 0.0 – 9.7 µS/cm
测得的折射率范围：20°C 时为 1.42866 – 1.43219

参考Ethylene glycol

1. The Crystallographic Structure of the Protease from Human Immunodeficiency Virus Type 2 with Two Snythetic Peptidic Transition State Analog Inhibitors. Mulichak, AM; Hui, JO; Tomasselli, AG; Heinrikson, RL; Curry, KA; Tomich, CS; Thaisrivongs, S; Sawyer, TK; Watenpaugh, KD. J Biol Chem 168, 13103-13109, 1993.

1. 人类免疫缺陷病毒 2 型蛋白酶与两种合成肽过渡态类似物抑制剂的晶体结构。 穆利查克，上午； 惠，乔； 托马塞利，AG； 海因里克森，RL； 咖喱，KA； 托米奇，CS； Thaisrivongs，S； 索耶，TK； 沃顿波，KD。 生物化学杂志 168, 13103-13109, 1993。

Hampton蛋白结晶试剂盒Glycerol/HR2-623

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Products > Optimize Reagents > Optimize – Organics (Non-Volatile) > Glycerol

Glycerol

Glycerol

 

CAT NO

HR2-623

NAME

100% Glycerol

DESCRIPTION

100 mL

PRICE

$84.00

支持材料

Glycerol HR2-623 Glycerol SDS

应用

  • Crystallization grade Glycerol for formulating screens, optimization and cryoprotection
  • 结晶级甘油，用于配制筛选、优化和冷冻保护

特征

  • Gradually increasing the Glycerol concentration to 5 to 35% in the original crystallization reagent is often times an effective cryoprotectant.
  • 将原始结晶试剂中的甘油浓度逐渐增加到 5% 到 35% 通常是一种有效的冷冻保护剂。

描述Glycerol

Synonyms: 1,2,3-Propanetriol or Glycerin
HOCH2CH(OH)CH2OH
C3H8O3
Mr 92.09
CAS Number [56-81-5]
EC Number 200-289-5
Beilstein Registry Number 635685
RTECS MA8050000
MDL Number MFCD00004722
PubChem Substance ID 24895252
Purity ≥ 99.0% (GC)
pKa 14.2

Measured pH range of 100% Glycerol: 5.0 – 7.7 at 25°C
Measured Conductivity Range: 0.0 – 0.2 µS/cm at 25°C
Measured Refractive Index Range: 1.47124 – 1.47450 at 20°C

同义词：1,2,3-丙三醇或甘油
HOCH2CH(OH)CH2OH
C3H8O3
92.09 先生
CAS 编号 [56-81-5]
欧盟编号 200-289-5
贝尔斯坦注册号 635685
RTECS MA8050000
MDL 编号 MFCD00004722
PubChem 物质 ID 24895252
纯度 ≥ 99.0% (GC)
pKa 14.2

测得的 100% 甘油的 pH 值范围：25°C 时为 5.0 – 7.7
测量电导率范围：25°C 时 0.0 – 0.2 µS/cm
测得的折射率范围：20°C 时为 1.47124 – 1.47450

Al  ≤0.0005%
Ca ≤0.0005%
Cd ≤0.0001%
Cl  ≤0.001%
Cu ≤0.0005%
Fe ≤0.0005%
K   ≤0.005%
Mg ≤0.0005%
NH3 ≤0.05%
NH4+ ≤0.05%
Na ≤0.005%
P  ≤0.0005%
Pb ≤0.001%
SO4 ≤0.002%
Zn ≤0.0005%

参考Glycerol

1. Crystallization and Preliminary X-ray Analysis of the Auto-inhibited Twitchin Kinase. Hu, S-H; Lei, JY; Wilce, MCJ; Valenzuela, MRL; Benian, GM; Parker, MW; Kemp, BE. J Mol Biol 236, 1259- 1261, 1994.

1. 自抑制 Twitchin 激酶的结晶和初步 X 射线分析。 胡，S-H； 雷，JY； 威尔斯，MCJ； 瓦伦苏埃拉，MRL； 贝尼安，总经理； 帕克，兆瓦； 坎普，BE。 分子生物学杂志 236, 1259-1261, 1994。

线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit货号：MD01 线粒体自噬检测试剂盒

发表于由
线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit货号：MD01
线粒体自噬检测试剂盒
Mitophagy Detection Kit
商品信息

特点：

 

● 只需添加小分子量荧光试剂即可轻松检测线粒体

● 可以使用荧光显微镜进行活细胞成像

● 可以与附着的溶酶体染色剂同时染色

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线粒体自噬检测
试剂盒内含
产品概述
原理
实验例
荧光特性
参考文献
常见问题Q&A

试剂盒内含

1622449707398455.png

产品概述

线粒体 (Mitochondria) 是细胞中重要的细胞器之一，可以为细胞活力提供能量 。近年有报道去极化线粒体的积累引起的阿尔茨海默病 (Alzheimer’s Disease) 与帕金森病(Parkinson’s Disease)，可能与线粒体自噬有关。线粒体自噬是一种清除机制，可以通过自噬，将氧化应激、DNA损伤因素导致功能失调的线粒体隔离包裹成自噬体(Autophagosome)，再与溶酶体 (Lysosome) 融合后降解。本试剂盒内含Mtphagy Dye (用于检测线粒体自噬) 和Lyso Dye (溶酶体染料)。Mtphagy Dye通过化学结合，固定在细胞内的线粒体上，会发出较弱的荧光。当线粒体发生自噬，损伤的线粒体会与溶酶体融合，pH会下降，变成酸性，此时Mtphagy Dye会产生较强的荧光。如想直观观察Mtphagy Dye标记的线粒体和溶酶体的结合，可联合应用试剂盒中的Lyso Dye (标记溶酶体) 进行双染。

特点：

1）只需添加小分子量荧光试剂即可轻松检测线粒体

2）可以使用荧光显微镜进行活细胞成像

3）可以与附着的溶酶体染色剂同时染色

原理

记载了本产品的检测原理和实验例的论文请看MD01论文实验例中第四篇：Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule

1606369445891830.png

实验例

1.用羰基氰化物间氯苯腙 (CCCP，一种线粒体解偶联剂) 诱导Parkin表达的HeLa细胞线粒体自噬，并通过荧光显微镜进行检测。另外，通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）一同染色，能够区分出已发生自噬的的线粒体（白色）和未发生自噬的线粒体（紫色）（照片：右侧）。

1606369473373528.png

波长：

Mtphagy Dye:561 nm (Ex)、650 LP nm (Em)

Lyso Dye:488 nm (Ex)、502-554 nm (Em)

MitoBright Deep Red:640 nm (Ex)、656-700 nm (Em)

2.荧光显微镜观察

HeLa细胞用CCCP处理，并与线粒体检测试剂（Mtphagy Dye）和线粒体染色试剂（MitoBright LT Green）共同染色，并经过一段时间（6小时）后进行检测。

 

 

<检测条件>

设备：LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM)

(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)

激发波长：

MitoBright LT Green 488 nm

Mtphagy Dye      555 nm

物镜：63x

拍摄时间：6小时

拍摄间隔：15秒

3.自噬诱导和线粒体膜电位变化关系的检测

用羰基氰化物间氯苯腙(CCCP，一种线粒体解偶联剂)诱导Parkin表达的HeLa细胞线粒体自噬，并使用线粒体自噬检测试剂盒（Mitophagy Detection Kit：MD01）和线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 MitoMP Detection Kit：MT09）观察荧光结果。

结果证实在未经CCCP处理的细胞中几乎未检测到线粒体自噬的发生，并且线粒体膜电位正常维持。 另一方面，在添加了CCCP的细胞中，证实了线粒体膜电位的降低（JC-1的红色荧光降低）和线粒体自噬的发生（Mtphagy染料的荧光增强）。

<实验条件>

■将Parkin质粒导入HeLa细胞

使用HilyMax（货号：H357）将Parkin质粒引入HeLa细胞中（Parkin质粒/HilyMax试剂：0.1 μg/0.2 μl）

过夜培养后进行检测。

■线粒体自噬检测

向表达Parkin的HeLa细胞中添加0.1 μmol/l Mtphagy工作溶液，并在37°C下孵育30分钟。然后将细胞用HBSS洗涤，加入10 μg/ml CCCP/MEM溶液，并在37℃下孵育2小时。在荧光显微镜下观察细胞。

■线粒体膜电位检测

将10 μg/ml的CCCP/MEM溶液添加至表达Parkin的HeLa细胞中，并在37℃下孵育1.5小时。加入4 μmol/l的JC-1工作液使其终浓度达到2 μmol/l，并在37℃下孵育30分钟。孵育后，将细胞用HBSS洗涤，加入成像缓冲液，并在荧光显微镜下观察细胞。

1606285859232026.png

<检测条件>

■线粒体自噬检测

Ex：561 nm，Em：570-700 nm

■线粒体膜电位检测

绿色Ex：488 nm，Em：500-550 nm

红色Ex：561 nm，Em：560-610 nm

荧光特性

1606285997828942.png

参考文献

序号 检测对象 使用仪器 文献
1) 细胞（HeLa） 流式细胞仪 J. Koniga,   C. Otta, M. Hugoa, T. Junga, A. L. Bulteaub, T. Grunea and A. Hohna, “Mitochondrial contribution to lipofuscin   formation”, Redox Biology, 2017, 11, 673.
2) 细胞（KB） 荧光显微镜 K. Kameyama, “Induction of mitophagy-mediated antitumor activity with   folate-appended methyl-β-cyclodextrin”, International Journal of   Nanomedicine, 2017, 12, 3433.
3) 细胞（SH-SY5Y, 初代皮质神经细胞） 荧光显微镜 E. F. Fang, T. B. Waltz, H.   Kassahun, Q. Lu, J. S. Kerr, M. Morevati, E. M. Fivenson, B. N. Wollman, K.   Marosi, M. A. Wilson, W. B. Iser, D. M. Eckley, Y. Zhang, E. Lehrmann, I. G.   Goldberg, M. S. Knudsen, M. P. Mattson, H. Nilsen, V. A. Bohr and K. G. Becker, “Tomatidine enhances lifespan and healthspan in C. elegans   through mitophagy induction via the SKN-1/Nrf2 pathway”, Scientific   Reports, 2017, 7, (46208), DOI: 10.1038/srep46208.
4) 细胞（HeLa、Parkin表达HeLa） 荧光显微镜 H. Iwashita, S. Torii, N.   Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, S. Shimizu and K. Okuma, “Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel   Fluorescent Small Molecule”, ACS Chem. Biol., 2017, 12,   (10), 2546.
5) 细胞（Cardiomyocytes） 流式细胞仪 Y. Feng, NB.   Madungwe, CV. da Cruz Junho and JC. Bopassa, “Activation of G protein-coupled oestrogen receptor 1 at   the onset of reperfusion protects the myocardium against ischemia/reperfusion   injury by reducing mitochondrial dysfunction and mitophagy.”, Br.   J. Pharmacol., 2017, 174, (23), 4329.
6) 细胞（HCT116） 荧光显微镜 K. M.   Elamin, K. Motoyama, T. Higashi, Y. Yamashita, A. Tokuda and H. Arima, “Dual targeting system by supramolecular complex of   folate-conjugated methyl-β-cyclodextrin with adamantane-grafted hyaluronic   acid for the treatment of colorectal cancer.”, Int. J. Biol.   Macromol., 2018, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2018.02.149.
7) 细胞（Parkin-HeLa） 流式细胞仪 N. Furuya, S. Kakuta, K. Sumiyoshi, M. Ando, R. Nonaka, A. Suzuki, S. Kazuno, S. Saiki   and N. Hattori, “NDP52 interacts with   mitochondrial RNA poly(A) polymerase to promote mitophagy.”, EMBO   Rep. ., 2018, doi: 10.15252/embr.201846363.
8) 细胞（NKT） 流式细胞仪 L. Zhu, X. Xie, L.   Zhang, H. Wang, Z. Jie, X. Zhou, J. Shi, S. Zhao, B. Zhang, X. Cheng and   S. Sun, “TBK-binding protein 1 regulates   IL-15-induced autophagy and NKT cell survival”, Nature   Communications., 2018, 9, (1), doi:10.1038/s41467-018-05097-5.
9) 细胞（HeLa） 流式细胞仪 K. Araki,   K. Kawauchi, W. Sugimoto, D. Tsuda, H. Oda, R. Yoshida and K. Ohtani, “Mitochondrial protein E2F3d, a distinctive E2F3 product,   mediates hypoxia-induced mitophagy in cancer cells”, Commun   Biol., 2019, DOI: 10.1038/s42003-018-0246-9.
10) 细胞（Bovine Sertoli） 荧光显微镜 E. Adegoke, S.   Adeniran, Y. Zeng, X. Wang, H. Wang, C. Wang, H.   Zhang, P. Zheng and G. Zhang , “Pharmacological   inhibition of TLR4/NF-κB with TLR4-IN-C34 attenuated microcystin-leucine   arginine toxicity in bovine Sertoli cells.”, J Appl   Toxicol., 2019,doi: 10.1002/jat.3771.
11) 组织（小鼠） 荧光显微镜  E. F. Fang, Y.   Hou, K. Palikaras, B. A. Adriaanse, J. S. Kerr, B.   Yang, S. Lautrup, M. M. Hasan-Olive, D. Caponio, X.   Dan, P. Rocktaschel, D. L. Croteau, M. Akbari, N. H.   Greig, T. Fladby, H. Nilsen, M. Z. Cader, M. P.   Mattson, N. Tavernarakis and V. A. Bohr, “Mitophagy   inhibits amyloid-β and tau pathology and reverses cognitive deficits in   models of Alzheimer’s   disease.”, Nat. Neurosci. ., 2019,DOI:10.1038/s41593-018-0332-9.
12) 细胞（HepG2） 荧光显微镜 Iwasawa, T.   Shinomiya, N. Ota, N. Shibata, K. Nakata, I. Shiina,   and Y. Nagahara , “Novel Ridaifen-B   Structure Analog Induces Apoptosis and Autophagy Depending on Pyrrolidine   Side Chain”, Biological and Pharmaceutical   Bulletin., 2019, 42, (3), 401-410, doi: 10.1248/bpb.b18-00643.
13) 细胞（U2OS） 荧光显微镜 T. Namba, “BAP31 regulates mitochondrial function via interaction   with Tom40 within ER-mitochondria contact sites “, Sci   Adv., 2019, 5, (6), 1386.
14) 细胞（INS-1） 荧光显微镜 A.   Inamura, S. M. Hirayama, and K. Sakurai, Loss of   Mitochondrial DNA by Gemcitabine Triggers Mitophagy and Cell   Death’, Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, 1977.
15) 细胞（HRCEpiC, HRPTEpic） 流式细胞仪 Y. Zhao and   M. Sun, Metformin rescues Parkin protein expression   and mitophagy in high glucose-challenged human renal epithelial cells by   inhibiting NF-κB via PP2A activation., Life   Sci.., 2020, DOI:10.1016/j.lfs.2020.117382.
16) 细胞（RAES） 荧光显微镜 N. Liu, J. Wu, L. Zhang, Z. Gao,   Y. Sun, M. Yu, Y. Zhao, S. Dong, F. Lu and W. Zhang , “Hydrogen Sulphide modulating mitochondrial morphology to   promote mitophagy in endothelial cells under high‐glucose and high‐palmitate   “, J. Cell. Mol. Med., 2017, 21, (12), 3190.
17) 细胞（BAECs） 荧光显微镜 N. Kajihara, D. Kukidome, K.   Sada, H. Motoshima, N. Furukawa, T. Matsumura, T. Nishikawa and E.   Araki, “Low glucose induces mitochondrial   reactive oxygen species via fatty acid oxidation in bovine aortic endothelial   cells”, J Diabetes Investig, 2017, 8, (6), 750.
18) 细胞（HT22） 荧光显微镜 M. Jin, H. Ni and  L.   Li, “Leptin Maintained Zinc Homeostasis Against   Glutamate-Induced Excitotoxicity by Preventing Mitophagy-Mediated   Mitochondrial Activation in HT22 Hippocampal Neuronal   Cells.”, Front Neurol, 2018, 9, (9), 332.
19) 细胞（BMDMs） 流式细胞仪 D. Bhatia, K. P. Chung, K.   Nakahira, E. Patino, M. C. Rice, L. K. Torres, T. Muthukumar, A. M. Choi, O.   M. Akchurin and M. E. Choi , “Mitophagy-dependent   macrophage reprogramming protects against kidney fibrosis”, JCI   Insight, 2019, 4, (23), e132826.
20) 细胞（U2OS） 荧光显微镜 J. Zheng, D. L. Croteau, V. A.    Bohr and M. Akbari, “Diminished OPA1   expression and impaired mitochondrial morphology and homeostasis in   Aprataxin-deficient cells. “, Nucleic Acids   Res., 2019, 47, (8), 4086.
21) 细胞（HT22） 荧光显微镜 D. D. Wang, M. F. Jin, D. J. Zhao   and H. Ni, “Reduction of Mitophagy-Related   Oxidative Stress and Preservation of Mitochondria Function Using Melatonin   Therapy in an HT22 Hippocampal Neuronal Cell Model of Glutamate-Induced   Excitotoxicity”, Front Endocrinol (Lausanne), 2019, 10,   550.
22) 细胞（CD4+T-cells, HeLa） 荧光显微镜 A. Bektas, S. H. Schurman, M. G.   Freire, A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, C. A. Dunn, A. K. Singh, F.   Macian, A. M. Cuervo, R. Sen and L. Ferrucci, “Age-associated   changes in human CD4+ T cells point to mitochondrial dysfunction consequent   to impaired autophagy.”, Aging (Albany NY)., 2019, 11,   (21), 9234-9263.
23) 细胞（ALM） 流式细胞仪 T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O.   Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K.   Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang,   S. K McWeeney and J. W. Tyner, “The TP53   Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in   AML Cells.”, Cancer Discov., 2019, 9, (7), 919.
24) 细胞（PK-15） 荧光显微镜 Y. Zhang, R. Sun, X. Li  and   W. Fang, “Porcine Circovirus 2 Induction of ROS Is Responsible for Mitophagy in PK-15 Cells via Activation of Drp1 Phosphorylation”, Viruses., 2020, 12, (3), 289.
25) 细胞（HCE） 荧光显微镜 Y. Huo, W. Chen, X. Zheng, J.   Zhao, Q. Zhang, Y. Hou, Y. Cai, X. Lu and X. Jin , “The protective effect of EGF-activated ROS in human   corneal epithelial cells by inducing mitochondrial autophagy via activation   TRPM2.”, J. Cell. Physiol., 2020, DOI: 10.1002/jcp.29597.
26) 细胞（心肌细胞） 荧光显微镜 Y. Sun, F. Lu, X. Yu, B. Wang, J.   Chen, F. Lu, S. Peng, X. Sun, M. Yu, H. Chen, Y. Wang, L. Zhang, N. Liu, H.   Du, D. Zhao and W. Zhang, “Exogenous H2S   Promoted USP8 Sulfhydration to Regulate Mitophagy in the Hearts of db/db   Mice.”, Aging Dis., 2020, 11, (2), 269.
27) 细胞（HCFs） 荧光显微镜 R. Tanaka, M. Umemura, M.   Narikawa, M. Hikichi, K. Osaw, T. Fujita, U. Yokoyama, T. Ishigami, K. Tamura   and Y. Ishikawa, “Reactive fibrosis precedes   doxorubicin-induced heart failure through sterile   inflammation.”, ESC Heart Fail., 2020, 7, (2), 588.
28) 细胞（VSMCs） 荧光显微镜 C. Duan, L. Kuang, X. Xiang, J.   Zhang, Y. Zhu, Y. Wu, Q. Yan, L. Liu and T. Li, “Drp1   regulates mitochondrial dysfunction and dysregulated metabolism in ischemic   injury via Clec16a-, BAX-, and GSH- pathways “, Cell Death   Dis., 2020, 11, 251.
29) 细胞（Bovine Sertoli） 荧光显微镜 E. O. Adegoke, W. Xue, N. S.   Machebe, S. O. Adeniran, W. Hao, W. Chen, Z. Han, Z. Guixue and Z.   Peng, “Sodium Selenite inhibits mitophagy,   downregulation and mislocalization of blood-testis barrier proteins of bovine   Sertoli cell exposed to microcystin-leucine arginine (MC-LR) via TLR4/NF-kB   and mitochondrial signaling pathways blockage.”, Ecotoxicol.   Environ. Saf., 2018, 116, 165.
30) 细胞（HeLa） 荧光显微镜 D. Takahashi, J. Moriyama, T.   Nakamura, E. Miki, E. Takahashi, A. Sato, T. Akaike, K. I. Nakama and H.   Arimoto, “AUTACs: Cargo-Specific Degraders   Using Selective Autophagy. “, Mol. Cell, 2019, 76,   (5), 797.
31) 细胞（primary hepatocyte） 荧光显微镜 H. Kim, J. H. Lee and J. W.   Park, “IDH2 deficiency exacerbates   acetaminophen hepatotoxicity in mice via mitochondrial dysfunction-induced   apoptosis.”, Biochim Biophys Acta Mol Basis   Dis, 2019, 1865, (9), 2333.
32) 细胞（C3H10T1/2s） 荧光显微镜 M. S.    Rahman and Y. S.  Kim, “PINK1-PRKN   mitophagy suppression by Mangiferin promotes a brown-fat-phenotype via   PKA-p38 MAPK signalling in murine   C3H10T1/2”, Metabolism, 2020, 101, 154228.
33) 细胞（NHEKs） 荧光显微镜 S. Ikeoka   and A. Kiso  , “The Involvement of   Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal   Keratinocytes “, J. Soc. Cosmet. Chem.   Jpn., 2020,  54(3), 252.

常见问题Q&A

 

Q1: 本试剂盒和现存传统方法相比有何优势？
A1: 与PH敏感并基于Keima荧光蛋白检测方法相比，本试剂为小分子荧光试剂，因此无需表达荧光蛋白。

另外，可以通过与用于普通活细胞成像的荧光试剂用相同的操作方法对其进行染色和共同观察。
Q2: 使用DMSO配置后的储存液稳定性如何？
A2：Mtphagy Dye、Lyso Dye均在制备后需保存在-20℃情况下可以稳定保存1个月。建议按照实验用量，

提前分装保存。
Q3: 工作液稳定性如何
A3: 无法保存，建议现配现用。
Q4: 培养基中有酚红会影响检测吗？
A4：观察的时候，如果使用共聚焦激光显微镜的话，几乎不会受到酚红的影响，但是使用落射型荧光显微

镜的话，会观察到酚红色的背景。（参照以下观察数据）因此使用落射型荧光显微镜时，请在Working

solution进行染色时使用不含酚红的培养基或HBSS。

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Q5: 荧光显微镜推荐的滤镜是什么？
A5:根据各种试剂推荐以下波长。Mtphagy Dye：激发（500～560 nm）、发射（670～730 nm）

Lyso Dye：激发（350～450 nm）、发射（500～560 nm）
Q6:与其他深红色染料共同染色时的注意事项。
A6：Mtphagy Dye比一般的红色系荧光染料相比波长更长，所以和Deep Red的荧光染料一起染色的时候

需要特别注意。即Mtphagy Dye在500–560 nm处激发，可在670-730 nm处检测到荧光，这时与

MitoBright  Deep Red的荧光检测波长重叠。因此，有必要在不激发深红色染料的波长下激发Mtphagy

染料，同时在不激发Mtphagy染料的波长下激发深红色染料。

[泄漏的情况]

① 制备仅添加了MitoBright Deep Red（没有添加Mtphagy Dye）的细胞。

② 通过观察MitoBright Deep Red的激发/发射波长，确认是否观察到荧光（右下图）。

③ 用Mtphagy Dye的激发/发射波长观察，确认是否观察到荧光（左下图）。

和③中，观察到来自MitoBright Deep Red的荧光（左下图）。

*如果如上所述确认荧光泄漏，请参阅以下内容。

○调整激发/发射波长

如以上确认如图所示，MitoBright Deep Red也在Ex 561 nm处激发，因此可以将Mtphagy Dye的激发

波长更改为接近激光器或滤光片的500 nm，以使MitoBright深红色不被激发。

调整荧光强度和荧光检测灵敏度

如果MitoBright Deep Red的荧光泄漏到Mtphagy染料的观察波长中，请将观察过程中的激发强度或

灵敏度降低到未观察到荧光的水平。

然后，再确认改变后的观察条件下可以检测Mtphagy Dye的荧光。

[如何检查泄漏]

使用Mtphagy Dye，Lyso dye（溶酶体染色剂），MitoBrightLT Deep Red（线粒体染色剂）

进行三重染色时进行确认

1.在3个培养皿或孔中制备细胞。

（Mtphagy Dye、Lyso Dye、MitoBright Deep Red分别在在不同的皿或孔中进行染色）

2.向每个孔中添加Mtphagy Dye和MitoBright Deep Red。 （在无血清培养基中）

3.在37°C下孵育30分钟。

4.进行自噬诱导条件下（如饥饿培养等）进行培养。

5.向上述2.中未使用的细胞添加Lyso Dye。（在无血清培养基中）

6.在37°C下孵育30分钟。

7.观察每种试剂的激发波长和荧光波长以及荧光强度。

8.检查所用试剂以外的观察波长处的荧光是否没有泄漏。

[观察条件]

Lyso Dye：Ex：350-450 nm，Em：500-560 nm

Mtphagy Dye：Ex ： 500-560 nm，Em ：670-730 nm

MitoBright Deep Red：Ex ：640 nm，Em ：656-700 nm

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线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit货号：MD01 线粒体自噬检测试剂盒

发表于由
线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit货号：MD01
线粒体自噬检测试剂盒
Mitophagy Detection Kit
商品信息

特点：

 

● 只需添加小分子量荧光试剂即可轻松检测线粒体

● 可以使用荧光显微镜进行活细胞成像

● 可以与附着的溶酶体染色剂同时染色

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线粒体自噬检测
试剂盒内含
产品概述
原理
实验例
荧光特性
参考文献
常见问题Q&A

试剂盒内含

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产品概述

线粒体 (Mitochondria) 是细胞中重要的细胞器之一，可以为细胞活力提供能量 。近年有报道去极化线粒体的积累引起的阿尔茨海默病 (Alzheimer’s Disease) 与帕金森病(Parkinson’s Disease)，可能与线粒体自噬有关。线粒体自噬是一种清除机制，可以通过自噬，将氧化应激、DNA损伤因素导致功能失调的线粒体隔离包裹成自噬体(Autophagosome)，再与溶酶体 (Lysosome) 融合后降解。本试剂盒内含Mtphagy Dye (用于检测线粒体自噬) 和Lyso Dye (溶酶体染料)。Mtphagy Dye通过化学结合，固定在细胞内的线粒体上，会发出较弱的荧光。当线粒体发生自噬，损伤的线粒体会与溶酶体融合，pH会下降，变成酸性，此时Mtphagy Dye会产生较强的荧光。如想直观观察Mtphagy Dye标记的线粒体和溶酶体的结合，可联合应用试剂盒中的Lyso Dye (标记溶酶体) 进行双染。

特点：

1）只需添加小分子量荧光试剂即可轻松检测线粒体

2）可以使用荧光显微镜进行活细胞成像

3）可以与附着的溶酶体染色剂同时染色

原理

记载了本产品的检测原理和实验例的论文请看MD01论文实验例中第四篇：Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule

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实验例

1.用羰基氰化物间氯苯腙 (CCCP，一种线粒体解偶联剂) 诱导Parkin表达的HeLa细胞线粒体自噬，并通过荧光显微镜进行检测。另外，通过与线粒体染色试剂（MitoBright Deep Red:MT08）一同染色，能够区分出已发生自噬的的线粒体（白色）和未发生自噬的线粒体（紫色）（照片：右侧）。

1606369473373528.png

波长：

Mtphagy Dye:561 nm (Ex)、650 LP nm (Em)

Lyso Dye:488 nm (Ex)、502-554 nm (Em)

MitoBright Deep Red:640 nm (Ex)、656-700 nm (Em)

2.荧光显微镜观察

HeLa细胞用CCCP处理，并与线粒体检测试剂（Mtphagy Dye）和线粒体染色试剂（MitoBright LT Green）共同染色，并经过一段时间（6小时）后进行检测。

 

<检测条件>

设备：LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM)

(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)

激发波长：

MitoBright LT Green 488 nm

Mtphagy Dye      555 nm

物镜：63x

拍摄时间：6小时

拍摄间隔：15秒

3.自噬诱导和线粒体膜电位变化关系的检测

用羰基氰化物间氯苯腙(CCCP，一种线粒体解偶联剂)诱导Parkin表达的HeLa细胞线粒体自噬，并使用线粒体自噬检测试剂盒（Mitophagy Detection Kit：MD01）和线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1 MitoMP Detection Kit：MT09）观察荧光结果。

结果证实在未经CCCP处理的细胞中几乎未检测到线粒体自噬的发生，并且线粒体膜电位正常维持。 另一方面，在添加了CCCP的细胞中，证实了线粒体膜电位的降低（JC-1的红色荧光降低）和线粒体自噬的发生（Mtphagy染料的荧光增强）。

<实验条件>

■将Parkin质粒导入HeLa细胞

使用HilyMax（货号：H357）将Parkin质粒引入HeLa细胞中（Parkin质粒/HilyMax试剂：0.1 μg/0.2 μl）

过夜培养后进行检测。

■线粒体自噬检测

向表达Parkin的HeLa细胞中添加0.1 μmol/l Mtphagy工作溶液，并在37°C下孵育30分钟。然后将细胞用HBSS洗涤，加入10 μg/ml CCCP/MEM溶液，并在37℃下孵育2小时。在荧光显微镜下观察细胞。

■线粒体膜电位检测

将10 μg/ml的CCCP/MEM溶液添加至表达Parkin的HeLa细胞中，并在37℃下孵育1.5小时。加入4 μmol/l的JC-1工作液使其终浓度达到2 μmol/l，并在37℃下孵育30分钟。孵育后，将细胞用HBSS洗涤，加入成像缓冲液，并在荧光显微镜下观察细胞。

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<检测条件>

■线粒体自噬检测

Ex：561 nm，Em：570-700 nm

■线粒体膜电位检测

绿色Ex：488 nm，Em：500-550 nm

红色Ex：561 nm，Em：560-610 nm

荧光特性

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参考文献

序号 检测对象 使用仪器 文献
1) 细胞（HeLa） 流式细胞仪 J. Koniga,   C. Otta, M. Hugoa, T. Junga, A. L. Bulteaub, T. Grunea and A. Hohna, “Mitochondrial contribution to lipofuscin   formation”, Redox Biology, 2017, 11, 673.
2) 细胞（KB） 荧光显微镜 K. Kameyama, “Induction of mitophagy-mediated antitumor activity with   folate-appended methyl-β-cyclodextrin”, International Journal of   Nanomedicine, 2017, 12, 3433.
3) 细胞（SH-SY5Y, 初代皮质神经细胞） 荧光显微镜 E. F. Fang, T. B. Waltz, H.   Kassahun, Q. Lu, J. S. Kerr, M. Morevati, E. M. Fivenson, B. N. Wollman, K.   Marosi, M. A. Wilson, W. B. Iser, D. M. Eckley, Y. Zhang, E. Lehrmann, I. G.   Goldberg, M. S. Knudsen, M. P. Mattson, H. Nilsen, V. A. Bohr and K. G. Becker, “Tomatidine enhances lifespan and healthspan in C. elegans   through mitophagy induction via the SKN-1/Nrf2 pathway”, Scientific   Reports, 2017, 7, (46208), DOI: 10.1038/srep46208.
4) 细胞（HeLa、Parkin表达HeLa） 荧光显微镜 H. Iwashita, S. Torii, N.   Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, S. Shimizu and K. Okuma, “Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel   Fluorescent Small Molecule”, ACS Chem. Biol., 2017, 12,   (10), 2546.
5) 细胞（Cardiomyocytes） 流式细胞仪 Y. Feng, NB.   Madungwe, CV. da Cruz Junho and JC. Bopassa, “Activation of G protein-coupled oestrogen receptor 1 at   the onset of reperfusion protects the myocardium against ischemia/reperfusion   injury by reducing mitochondrial dysfunction and mitophagy.”, Br.   J. Pharmacol., 2017, 174, (23), 4329.
6) 细胞（HCT116） 荧光显微镜 K. M.   Elamin, K. Motoyama, T. Higashi, Y. Yamashita, A. Tokuda and H. Arima, “Dual targeting system by supramolecular complex of   folate-conjugated methyl-β-cyclodextrin with adamantane-grafted hyaluronic   acid for the treatment of colorectal cancer.”, Int. J. Biol.   Macromol., 2018, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2018.02.149.
7) 细胞（Parkin-HeLa） 流式细胞仪 N. Furuya, S. Kakuta, K. Sumiyoshi, M. Ando, R. Nonaka, A. Suzuki, S. Kazuno, S. Saiki   and N. Hattori, “NDP52 interacts with   mitochondrial RNA poly(A) polymerase to promote mitophagy.”, EMBO   Rep. ., 2018, doi: 10.15252/embr.201846363.
8) 细胞（NKT） 流式细胞仪 L. Zhu, X. Xie, L.   Zhang, H. Wang, Z. Jie, X. Zhou, J. Shi, S. Zhao, B. Zhang, X. Cheng and   S. Sun, “TBK-binding protein 1 regulates   IL-15-induced autophagy and NKT cell survival”, Nature   Communications., 2018, 9, (1), doi:10.1038/s41467-018-05097-5.
9) 细胞（HeLa） 流式细胞仪 K. Araki,   K. Kawauchi, W. Sugimoto, D. Tsuda, H. Oda, R. Yoshida and K. Ohtani, “Mitochondrial protein E2F3d, a distinctive E2F3 product,   mediates hypoxia-induced mitophagy in cancer cells”, Commun   Biol., 2019, DOI: 10.1038/s42003-018-0246-9.
10) 细胞（Bovine Sertoli） 荧光显微镜 E. Adegoke, S.   Adeniran, Y. Zeng, X. Wang, H. Wang, C. Wang, H.   Zhang, P. Zheng and G. Zhang , “Pharmacological   inhibition of TLR4/NF-κB with TLR4-IN-C34 attenuated microcystin-leucine   arginine toxicity in bovine Sertoli cells.”, J Appl   Toxicol., 2019,doi: 10.1002/jat.3771.
11) 组织（小鼠） 荧光显微镜  E. F. Fang, Y.   Hou, K. Palikaras, B. A. Adriaanse, J. S. Kerr, B.   Yang, S. Lautrup, M. M. Hasan-Olive, D. Caponio, X.   Dan, P. Rocktaschel, D. L. Croteau, M. Akbari, N. H.   Greig, T. Fladby, H. Nilsen, M. Z. Cader, M. P.   Mattson, N. Tavernarakis and V. A. Bohr, “Mitophagy   inhibits amyloid-β and tau pathology and reverses cognitive deficits in   models of Alzheimer’s   disease.”, Nat. Neurosci. ., 2019,DOI:10.1038/s41593-018-0332-9.
12) 细胞（HepG2） 荧光显微镜 Iwasawa, T.   Shinomiya, N. Ota, N. Shibata, K. Nakata, I. Shiina,   and Y. Nagahara , “Novel Ridaifen-B   Structure Analog Induces Apoptosis and Autophagy Depending on Pyrrolidine   Side Chain”, Biological and Pharmaceutical   Bulletin., 2019, 42, (3), 401-410, doi: 10.1248/bpb.b18-00643.
13) 细胞（U2OS） 荧光显微镜 T. Namba, “BAP31 regulates mitochondrial function via interaction   with Tom40 within ER-mitochondria contact sites “, Sci   Adv., 2019, 5, (6), 1386.
14) 细胞（INS-1） 荧光显微镜 A.   Inamura, S. M. Hirayama, and K. Sakurai, Loss of   Mitochondrial DNA by Gemcitabine Triggers Mitophagy and Cell   Death’, Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, 1977.
15) 细胞（HRCEpiC, HRPTEpic） 流式细胞仪 Y. Zhao and   M. Sun, Metformin rescues Parkin protein expression   and mitophagy in high glucose-challenged human renal epithelial cells by   inhibiting NF-κB via PP2A activation., Life   Sci.., 2020, DOI:10.1016/j.lfs.2020.117382.
16) 细胞（RAES） 荧光显微镜 N. Liu, J. Wu, L. Zhang, Z. Gao,   Y. Sun, M. Yu, Y. Zhao, S. Dong, F. Lu and W. Zhang , “Hydrogen Sulphide modulating mitochondrial morphology to   promote mitophagy in endothelial cells under high‐glucose and high‐palmitate   “, J. Cell. Mol. Med., 2017, 21, (12), 3190.
17) 细胞（BAECs） 荧光显微镜 N. Kajihara, D. Kukidome, K.   Sada, H. Motoshima, N. Furukawa, T. Matsumura, T. Nishikawa and E.   Araki, “Low glucose induces mitochondrial   reactive oxygen species via fatty acid oxidation in bovine aortic endothelial   cells”, J Diabetes Investig, 2017, 8, (6), 750.
18) 细胞（HT22） 荧光显微镜 M. Jin, H. Ni and  L.   Li, “Leptin Maintained Zinc Homeostasis Against   Glutamate-Induced Excitotoxicity by Preventing Mitophagy-Mediated   Mitochondrial Activation in HT22 Hippocampal Neuronal   Cells.”, Front Neurol, 2018, 9, (9), 332.
19) 细胞（BMDMs） 流式细胞仪 D. Bhatia, K. P. Chung, K.   Nakahira, E. Patino, M. C. Rice, L. K. Torres, T. Muthukumar, A. M. Choi, O.   M. Akchurin and M. E. Choi , “Mitophagy-dependent   macrophage reprogramming protects against kidney fibrosis”, JCI   Insight, 2019, 4, (23), e132826.
20) 细胞（U2OS） 荧光显微镜 J. Zheng, D. L. Croteau, V. A.    Bohr and M. Akbari, “Diminished OPA1   expression and impaired mitochondrial morphology and homeostasis in   Aprataxin-deficient cells. “, Nucleic Acids   Res., 2019, 47, (8), 4086.
21) 细胞（HT22） 荧光显微镜 D. D. Wang, M. F. Jin, D. J. Zhao   and H. Ni, “Reduction of Mitophagy-Related   Oxidative Stress and Preservation of Mitochondria Function Using Melatonin   Therapy in an HT22 Hippocampal Neuronal Cell Model of Glutamate-Induced   Excitotoxicity”, Front Endocrinol (Lausanne), 2019, 10,   550.
22) 细胞（CD4+T-cells, HeLa） 荧光显微镜 A. Bektas, S. H. Schurman, M. G.   Freire, A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, C. A. Dunn, A. K. Singh, F.   Macian, A. M. Cuervo, R. Sen and L. Ferrucci, “Age-associated   changes in human CD4+ T cells point to mitochondrial dysfunction consequent   to impaired autophagy.”, Aging (Albany NY)., 2019, 11,   (21), 9234-9263.
23) 细胞（ALM） 流式细胞仪 T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O.   Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K.   Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang,   S. K McWeeney and J. W. Tyner, “The TP53   Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in   AML Cells.”, Cancer Discov., 2019, 9, (7), 919.
24) 细胞（PK-15） 荧光显微镜 Y. Zhang, R. Sun, X. Li  and   W. Fang, “Porcine Circovirus 2 Induction of ROS Is Responsible for Mitophagy in PK-15 Cells via Activation of Drp1 Phosphorylation”, Viruses., 2020, 12, (3), 289.
25) 细胞（HCE） 荧光显微镜 Y. Huo, W. Chen, X. Zheng, J.   Zhao, Q. Zhang, Y. Hou, Y. Cai, X. Lu and X. Jin , “The protective effect of EGF-activated ROS in human   corneal epithelial cells by inducing mitochondrial autophagy via activation   TRPM2.”, J. Cell. Physiol., 2020, DOI: 10.1002/jcp.29597.
26) 细胞（心肌细胞） 荧光显微镜 Y. Sun, F. Lu, X. Yu, B. Wang, J.   Chen, F. Lu, S. Peng, X. Sun, M. Yu, H. Chen, Y. Wang, L. Zhang, N. Liu, H.   Du, D. Zhao and W. Zhang, “Exogenous H2S   Promoted USP8 Sulfhydration to Regulate Mitophagy in the Hearts of db/db   Mice.”, Aging Dis., 2020, 11, (2), 269.
27) 细胞（HCFs） 荧光显微镜 R. Tanaka, M. Umemura, M.   Narikawa, M. Hikichi, K. Osaw, T. Fujita, U. Yokoyama, T. Ishigami, K. Tamura   and Y. Ishikawa, “Reactive fibrosis precedes   doxorubicin-induced heart failure through sterile   inflammation.”, ESC Heart Fail., 2020, 7, (2), 588.
28) 细胞（VSMCs） 荧光显微镜 C. Duan, L. Kuang, X. Xiang, J.   Zhang, Y. Zhu, Y. Wu, Q. Yan, L. Liu and T. Li, “Drp1   regulates mitochondrial dysfunction and dysregulated metabolism in ischemic   injury via Clec16a-, BAX-, and GSH- pathways “, Cell Death   Dis., 2020, 11, 251.
29) 细胞（Bovine Sertoli） 荧光显微镜 E. O. Adegoke, W. Xue, N. S.   Machebe, S. O. Adeniran, W. Hao, W. Chen, Z. Han, Z. Guixue and Z.   Peng, “Sodium Selenite inhibits mitophagy,   downregulation and mislocalization of blood-testis barrier proteins of bovine   Sertoli cell exposed to microcystin-leucine arginine (MC-LR) via TLR4/NF-kB   and mitochondrial signaling pathways blockage.”, Ecotoxicol.   Environ. Saf., 2018, 116, 165.
30) 细胞（HeLa） 荧光显微镜 D. Takahashi, J. Moriyama, T.   Nakamura, E. Miki, E. Takahashi, A. Sato, T. Akaike, K. I. Nakama and H.   Arimoto, “AUTACs: Cargo-Specific Degraders   Using Selective Autophagy. “, Mol. Cell, 2019, 76,   (5), 797.
31) 细胞（primary hepatocyte） 荧光显微镜 H. Kim, J. H. Lee and J. W.   Park, “IDH2 deficiency exacerbates   acetaminophen hepatotoxicity in mice via mitochondrial dysfunction-induced   apoptosis.”, Biochim Biophys Acta Mol Basis   Dis, 2019, 1865, (9), 2333.
32) 细胞（C3H10T1/2s） 荧光显微镜 M. S.    Rahman and Y. S.  Kim, “PINK1-PRKN   mitophagy suppression by Mangiferin promotes a brown-fat-phenotype via   PKA-p38 MAPK signalling in murine   C3H10T1/2”, Metabolism, 2020, 101, 154228.
33) 细胞（NHEKs） 荧光显微镜 S. Ikeoka   and A. Kiso  , “The Involvement of   Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal   Keratinocytes “, J. Soc. Cosmet. Chem.   Jpn., 2020,  54(3), 252.

常见问题Q&A

 

Q1: 本试剂盒和现存传统方法相比有何优势？
A1: 与PH敏感并基于Keima荧光蛋白检测方法相比，本试剂为小分子荧光试剂，因此无需表达荧光蛋白。

另外，可以通过与用于普通活细胞成像的荧光试剂用相同的操作方法对其进行染色和共同观察。
Q2: 使用DMSO配置后的储存液稳定性如何？
A2：Mtphagy Dye、Lyso Dye均在制备后需保存在-20℃情况下可以稳定保存1个月。建议按照实验用量，

提前分装保存。
Q3: 工作液稳定性如何
A3: 无法保存，建议现配现用。
Q4: 培养基中有酚红会影响检测吗？
A4：观察的时候，如果使用共聚焦激光显微镜的话，几乎不会受到酚红的影响，但是使用落射型荧光显微

镜的话，会观察到酚红色的背景。（参照以下观察数据）因此使用落射型荧光显微镜时，请在Working

solution进行染色时使用不含酚红的培养基或HBSS。

1622449759948400.png
Q5: 荧光显微镜推荐的滤镜是什么？
A5:根据各种试剂推荐以下波长。Mtphagy Dye：激发（500～560 nm）、发射（670～730 nm）

Lyso Dye：激发（350～450 nm）、发射（500～560 nm）
Q6:与其他深红色染料共同染色时的注意事项。
A6：Mtphagy Dye比一般的红色系荧光染料相比波长更长，所以和Deep Red的荧光染料一起染色的时候

需要特别注意。即Mtphagy Dye在500–560 nm处激发，可在670-730 nm处检测到荧光，这时与

MitoBright  Deep Red的荧光检测波长重叠。因此，有必要在不激发深红色染料的波长下激发Mtphagy

染料，同时在不激发Mtphagy染料的波长下激发深红色染料。

[泄漏的情况]

① 制备仅添加了MitoBright Deep Red（没有添加Mtphagy Dye）的细胞。

② 通过观察MitoBright Deep Red的激发/发射波长，确认是否观察到荧光（右下图）。

③ 用Mtphagy Dye的激发/发射波长观察，确认是否观察到荧光（左下图）。

和③中，观察到来自MitoBright Deep Red的荧光（左下图）。

*如果如上所述确认荧光泄漏，请参阅以下内容。

○调整激发/发射波长

如以上确认如图所示，MitoBright Deep Red也在Ex 561 nm处激发，因此可以将Mtphagy Dye的激发

波长更改为接近激光器或滤光片的500 nm，以使MitoBright深红色不被激发。

调整荧光强度和荧光检测灵敏度

如果MitoBright Deep Red的荧光泄漏到Mtphagy染料的观察波长中，请将观察过程中的激发强度或

灵敏度降低到未观察到荧光的水平。

然后，再确认改变后的观察条件下可以检测Mtphagy Dye的荧光。

[如何检查泄漏]

使用Mtphagy Dye，Lyso dye（溶酶体染色剂），MitoBrightLT Deep Red（线粒体染色剂）

进行三重染色时进行确认

1.在3个培养皿或孔中制备细胞。

（Mtphagy Dye、Lyso Dye、MitoBright Deep Red分别在在不同的皿或孔中进行染色）

2.向每个孔中添加Mtphagy Dye和MitoBright Deep Red。 （在无血清培养基中）

3.在37°C下孵育30分钟。

4.进行自噬诱导条件下（如饥饿培养等）进行培养。

5.向上述2.中未使用的细胞添加Lyso Dye。（在无血清培养基中）

6.在37°C下孵育30分钟。

7.观察每种试剂的激发波长和荧光波长以及荧光强度。

8.检查所用试剂以外的观察波长处的荧光是否没有泄漏。

[观察条件]

Lyso Dye：Ex：350-450 nm，Em：500-560 nm

Mtphagy Dye：Ex ： 500-560 nm，Em ：670-730 nm

MitoBright Deep Red：Ex ：640 nm，Em ：656-700 nm

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