氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号:G263

氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II货号:G263
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒
GSSG/GSH Quantification Kit II
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

● 细胞、组织样品均可检测

● 操作更加简单

● 试剂盒稳定性高

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氧化应激与自由基检测方案
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概述

谷胱甘肽 (γ-L-谷氨酰-L-半胱氨酰-甘氨酸) 是体内的一种三肽化合物,它参与抗氧化和药物代谢的过程,还是谷胱甘肽过氧化物酶、谷胱甘肽S-转移酶、巯基转移酶等的底物。谷胱甘肽通常以还原型状态(GSH) 存在,但是GSH在氧化应激的作用下会转化为氧化型状态 (GSSG)。因此GSH/GSSG的比值被认为是氧化应激研究的一个重要指标。

优势

1)可以进行氧化型谷胱甘肽(GSSG)、还原型谷胱甘肽(GSH)的分类定量。

2)操作简单,且可以同时检测多个样品。

操作步骤

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详见说明书

注意事项

试剂开封后各溶液的保存方法及保存时间

Substrate Working Solution:溶解后在-20℃可保存2个月

GSH Standard Solution:溶解后在-20℃可保存2个月

GSSG Standard Solution:溶解后在-20℃可保存2个月

Enzyme Working Solution:稀释后在4℃可保存2个月

Coenzyme Working Solution:用超纯水溶解后在-20℃可保存2个月

Masking Solution:用乙醇溶解后在4℃可保存2个月

其他材料

酶标仪(405或415 nm)、20 µl和200 µl移液器,多通道移液器、 96孔板、 5-磺基水杨酸 (SSA) 溶液 (点击购买)、 乙醇

常见问题Q&A

Q1:如何计算GSH浓度?
A1:根据标准曲线得到总谷胱甘肽(GSH+GSSG)的浓度,使用以下公式计算GSH浓度。
GSH浓度=总谷胱甘肽浓度-GSSG浓度×2
GSSG(氧化型谷胱甘肽)相当于两分子的GSH(还原型谷胱甘肽)。
因此,通过将GSSG浓度加倍从而得到GSH浓度。
Q2:是否可以通过添加Masking Reagent来掩盖源自GSSG的GSH?
A2:加入酶/辅酶之后,由GSSG产生的GSH先与DTNB反应,而还原为GSSG。GSSG生成的GSH不会被屏蔽。
Q3:本试剂盒与谷胱甘肽定量试剂盒(货号:T419)有什么区别?
A3:本试剂盒可以分别检测GSSG和GSH,而总谷胱甘肽定量试剂盒(T419)则无法实现。作为氧化应激指标的GSH和GSSG的比例更加受引研究人员关注。
Q4:显色效果弱怎么办?
A4:考虑以下原因:

原因1)本试剂盒的测量范围是0.5 μmol/l及以上,测量样品中所含的谷胱甘肽的量可能小于该值。

对策)本试剂盒无法测量不符合测量范围的样品,请考虑其他方法检测。例如HPLC方法。

也可以通过降低预处理的稀释率或增加样品量来增加检测样品的浓度。

注意:为了加强显色效果而延长显色时间,则无法获得标准曲线。

原因2)可能含有抑制荧光的物质。例如:与SH基团反应的化合物(马来酰亚胺)会干扰测量结果。

对策)由于无法通过预处理等去除这些化合物,因此请在不含有此类物质的情况下再检测。

原因3)反应中的pH值低,有可能抑制显色。

对策)1、测量时,请确保SSA浓度为1%或更低。当SSA浓度为1%或更高时,会抑制显色效果。

2、如果含有其他酸性物质,则在测量前用三乙醇胺等将其中和至pH 7,或将它们稀释至约1%或更低的酸浓度下进行反应。

Q5:该试剂盒可以检测多少样品?
A5:本试剂盒可以进行100次检测(使用1块96孔板)
当n=3时,可以检测9个样品。(样品未染色)
如果仅测量谷胱甘肽的总量,可以检测25个样品。
样品的布局例:通道1~6是GSSG浓度测定,通道7~12是总谷胱甘肽浓度测定。

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Q6:样品中有大量谷胱甘肽,如何稀释样品?
A6:用0.5%5-磺基水杨酸(SSA)水溶液稀释。
测量时样品中的SSA浓度应为0.5至1%。
如果SSA浓度高,则反应过程中的pH值会呈酸性,这可能会影响吸光度。
Q7:通过测量GSSG与GSH的比例可以得到什么?
A7:谷胱甘肽通常在体内以还原形式(GSH)存在,
因为它通过刺激(例如氧化应激)转化为氧化形式(GSSG)
GSH与GSSG之比是氧化应激的指标。

参考文献

1) ER Stress Cooperates with Hypernutrition to Trigger TNF-Dependent Spontaneous HCC Development,Cancer Cell,2014,26, 331–343

2) Rhythmic oscillations of the microRNA miR-96-5p play a neuroprotective role by indirectly regulating glutathione levels,Nature Communications,2014,5,3823

3) Phospholipid methylation controls Atg32-mediated mitophagy and Atg8 recycling,The EMBO Journal,2015,34(21),2703–2719

4) Administering xCT inhibitors based on circadian clock improves antitumor effects,Cancer Research,2017,77(23),6603-6613

5) Cold stress-induced ferroptosis involves the ASK1-p38 pathway,EMBO reports,2017,18(11),2067-2078

6) Chloroplast DNA Replication Is Regulated by the Redox State Independently of Chloroplast Division in Chlamydomonas reinhardtii,Plant Physiology,2013,161,2102–2112

7) Oxidative stress inhibits healthy adipose expansion through suppression of SREBF1-mediated lipogenic pathway,Diabetes,2018,67(6),1113-1127
8)Endogenous reactive oxygen species cause astrocyte defects and neuronal dysfunctions in the hippocampus: a new model for aging brain,Aging Cell,2017,16,39–51

9) Ubiquinol-10 Supplementation Activates Mitochondria Functions to Decelerate Senescence in Senescence-Accelerated Mice,Antioxidants & Redox Signaling,2014,20(16),2606-2620

10) Skeletal muscle-specific eukaryotic translation initiation factor 2α phosphorylation controls amino acid metabolism and fibroblast growth factor 21-mediated non-cell-autonomous energy metabolism,

The FASEB Journal,2016,30(2),798-812

11) Riluzole exerts distinct antitumor effects from a metabotropic glutamate receptor 1-specific inhibitor on breast cancer cells,Oncotarget,2017,8(27),44639-44653

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