线粒体

线粒体

线粒体(mitochondrion) 是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器,是细胞中制造能量的结构,是细胞进行有氧呼吸的主要场所,线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系,但其基因组大小有限,是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外,线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程,并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。最近越老越多的研究发现线粒体在细胞中的作用远远不止”细胞能量站”。它们参与了各种细胞功能调控,与很多人类疾病存在着莫大的联系。包括细胞信号传导、代谢、自噬、衰老和肿瘤发生都与线粒体的质量和活性相关
线粒体损伤
线粒体自噬
线粒体氧化应激
线粒体染色
品名 货号 用途
线粒体膜电位检测试剂盒 MT13 线粒体膜电位检测
线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit MT09 线粒体膜电位检测
Cellstain- MitoRed试剂 R237 线粒体ATP检测-红色
Cellstain- Rh123试剂(罗丹明123) R233 线粒体ATP检测-绿色
品名 货号 用途
Mtphagy Dye试剂 MT02 线粒体自噬
线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit MD01 线粒体自噬检测
品名 货号 用途
mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection MT14 线粒体超氧化物检测
铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen M489 线粒体内二价铁离子检测
Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂 MT05 线粒体内单线态氧检测
MitoPeDPP试剂 M466 线粒体内脂质过氧化物检测
品名 货号 用途
MitoBright IM Red for Immunostaining试剂 MT15 免疫荧光用线粒体荧光染料Red
MitoBright LT Green试剂 MT10 线粒体长效荧光染色(绿色)
MitoBright LT Red试剂 MT11 线粒体长效荧光染色(红色)
MitoBright LT Deep Red试剂 MT12 线粒体长效荧光染色(深红色)

线粒体功能研究

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线粒体简要通路图海报下载

同仁化学 线粒体简要通路图.pdf

线粒体相关检测试剂

线粒体自噬检测

线粒体自噬
试剂 Mtphagy Dye Keima-Red
原理 线粒体自噬染料是一种PH敏感的荧光探针,该染料聚集在线粒体中,并由溶酶体的酸性条件而发出荧光 这是一种基于PH感应比值的荧光蛋白。该蛋白在溶酶体中具有比较高的荧光比值(如550 nm/440 nm)。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 >30 min
Ex/Em 530/700 440,550/620
产品货号 MD01 , MT02

线粒体膜电位检测

Membrane potential

线粒体膜电位

试剂 JC-1 TMRM,   TMRE
原理 JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针,依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集,染料伴随聚集过程,荧光从绿色   (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化,红/绿荧光强度比值降低。 该试剂是细胞渗透性荧光染料,由于膜电位在完整的线粒体中积累。探针扩散发生在膜电位降低的受损线粒体中。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 10- 60 min 30- 60 min
Ex/Em Monomer:514/529 550/575
J-aggregation: 585/590
产品货号 MT09

线粒体金属离子检测

Iron ion (Fe2+)

亚铁离子

Calcium ion (Ca2+)

钙离子

试剂 Mito-FerroGreen Rhod 2-AM
原理 该试剂是一种细胞通透性探针,其积累在线粒体中,并与线粒体中的亚铁离子发生特异性反应,发出绿色荧光。 该试剂是一种细胞通透性探针,该探针积聚在线粒体中,并与线粒体中的钙离子发生特异性反应,发出红色荧光。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 30 min 30-60 min
Ex/Em 505/535 553/576
产品货号 M489 R002

线粒体荧光染色

Mitochondria staining

线粒体染色

试剂 MitoBright LT series MitoTracker series
原理 细胞渗透性荧光染料,基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 细胞渗透性荧光染料,基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 >10 min 15 -45 min
Ex/Em 493/508,547/563, 643/663 490/516~644/665
产品货号 MT10MT11MT12
Mitochondria staining

线粒体染色

试剂 DsRed MitoRed Rh123
原理 一种红色荧光蛋白染料,通过转染试剂与完整的线粒体结合。 细胞渗透性荧光染料,基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 细胞渗透性荧光染料,基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 Expression in 8 -12 hrs. >15 min >15 min
Ex/Em 558/583 560/580 507/529
产品货号 R237 R233

线粒体氧化应激

Lipophilic peroxide

脂质过氧化物

Singlet oxygen

单线态氧

Superoxide

超氧化物

试剂 MitoPeDPP Si-DMA MitoSOX
原理 MitoPeDPP是一种新型荧光染料,由于其具有三苯基膦结构,因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。 该试剂是一种细胞渗透性荧光探针,积聚在线粒体中,与线粒体中产生的单线态氧发生反应,发出红色荧光。 该试剂是一种细胞渗透荧光探针,积聚在线粒体中,与线粒体中产生的超氧化物反应,发出红色荧光。
固定细胞染色
活细胞染色 Yes Yes Yes
活细胞染色后固定
染色时间 > 15 min > 45 min > 10 min
Ex/Em 452/ 470 644/ 670 510/ 590
产品货号 M466 MT05

引用论文

① H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, N. Saitoh, S. Hino and M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”Cell Reports, 2017, 18(9), 2148.
② L. Garcia-Prat, M. Martinez-Vicente and P. Munoz-Canoves, “Autophagy: a decisive process for stemness”Oncotarget, 2016, 7(11), 12286.
③ M. Bitar, S. Abdel-Halim and F. Al-Mulla, “Caveolin-1/PTRF upregulation constitutes a mechanism for mediating p53-induced cellular senescence: implications for evidence-based therapy of delayed wound healing in diabetes”Am J Physiol Endocrinol Metab., 2013, 305(8), E951.
④ C. Wiley, M. Velarde, P. Lecot, A. Gerencser, E. Verdin, J. Campisi, et. al., “Mitochondrial Dysfunction Induces Senescence with a Distinct Secretory Phenotype”Cell Metab., 2016, 23(2), 303.
⑤ E. Liao, Y. Hsu, Q. Chuah, Y. Lee, J. Hu, T. Huang, P-M Yang & S-J Chiu, “Radiation induces senescence and a bystander effect through metabolic alterations.”Cell Death Dis., 2014, 5, e1255.
⑥ K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, A. Murayama, J. Yanagisawa and K. Kimura, “Perturbation of Ribosome Biogenesis Drives Cells into Senescence through 5S RNP-Mediated p53 Activation”Cell Rep. 2015, 10(8), 1310.
⑦ M. J. Son, Y. Kwon, T. Son and Y. S. Cho, “Restoration of Mitochondrial NAD+ Levels Delays Stem Cell Senescence and Facilitates Reprogramming of Aged Somatic Cells”Stem Cells. 2016, 34(12), 2840.

Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号:C548

Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号:C548
细胞周期检测试剂盒-深红色
Cell Cycle Assay Solution Deep Red
商品信息
储存条件:0-5 ℃
运输条件:常温

特点:

·检测时间短

·固定和不固定都可以

·悬浮细胞和贴壁细胞都可以

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选择规格:
50 tests
价格:
¥1280.00期货(会员请登录查看专享价!)
细胞周期
产品概述
产品特性
实验案例
常见问题Q&A
参考文献

产品概述

  细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义

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产品特性

产品特点:检测时间短

碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。

1607485106948667.png

实验案例

对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期

用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。

1607484701403788.png

示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化

阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09)

1607484736305104.png

常见问题Q&A

Q1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗?
A1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以使用。
Q2:胰酶会影响检测吗?
A2:如果实验中有胰酶残留,会影响检测;

如果回收细胞时使用胰酶,请确保按照方案进行清洁操作,去除残留胰酶。

Q3:需要固定细胞吗?
A3:固定和不固定细胞都可以。
Q4:如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存?
A4:都可以,本公司实际对比案例:

分别在保存固定细胞前后做了染色实验,检测结果没有差异

・将固定细胞冷藏(4℃)后保存1周,根据使用说明书对细胞进行染色。

・根据使用说明书对固定细胞进行染色,将细胞冷藏(4℃)后保存1周。

*冷冻保存细胞的话有可能会沉淀不溶物,所以不推荐冷冻保存。

Q5:用Cell Cycle Assiay  Soluton染色后,为了除去过量的试剂可以清洗细胞吗?
A5:不推荐染色后清洗细胞。

由于洗涤时的离心操作,有可能影响细胞周期解析的实验结果。

Q6:做流式检测时,应该注意哪些方面呢?
A6:流式检测时,需要在合适的条件下进行测检测。

以下列举了一些失败的案例。

1、检测通道选择不合适

例如一般的细胞周期检测都会使用PI(PE)通道,但是我们试剂盒选择PI通道并不能得到最适结果,请参照一下波段选择最适通道:

2、检测时电压过高(或过低)。

当流式检测时电压过高(或过低)时,都无法得到最适结果。

请通过直方图将G0/G1期、S期、G2/M期调整为清晰的测量电压。

3、细胞数量选择不合适

例如流式检测是圈门选择不恰当,会导致结果不好。

分析时请对选择所有细胞。

参考文献

1)細胞(HCAECs)

N. Sasaki, Y. Itakura and M. Toyoda, “Rapamycin promotes endothelial-mesenchymal transition during stress-induced premature senescence through the activation of autophagy”, Cell Commun. Signal, 2020, 18(1), 43

2)細胞(ARPE-19)

T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, “Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

2)細胞(MIA PaCa-2)

N. Sasaki, F. Gomi, F. Hasegawa, K. Hirano, M. Fujiwara, M. Toyoda and T. Ishiwata, “Characterization of the metastatic potential of the floating cell component of MIA PaCa-2, a human pancreatic cancer cell line”, Biochem. biophys. res. commun, 2020, 522(4), 881-888

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Cell Cycle Assay Solution Blue试剂货号:C549

Cell Cycle Assay Solution Blue试剂货号:C549
细胞周期检测试剂盒-蓝色
Cell Cycle Assay Solution Blue
商品信息
储存条件:0-5 ℃
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特点:

·检测时间短

·固定和不固定都可以用

·悬浮细胞核贴壁细胞都可以用

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细胞周期
产品概述
产品特性
实验案例
常见问题Q&A

产品概述

细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义

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产品特性

产品特点:检测时间短

碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。

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实验案例

对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期

用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。

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示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化

阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09)

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常见问题Q&A

Q1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗?
A1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以使用。
Q2:胰酶会影响检测吗?
A2:如果实验中有胰酶残留,会影响检测;

如果回收细胞时使用胰酶,请确保按照方案进行清洁操作,去除残留胰酶。

Q3:需要固定细胞吗?
A3:固定和不固定细胞都可以。
Q4:如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存?
A4:都可以,本公司实际对比案例:

分别在保存固定细胞前后做了染色实验,检测结果没有差异

・将固定细胞冷藏(4℃)后保存1周,根据使用说明书对细胞进行染色。

・根据使用说明书对固定细胞进行染色,将细胞冷藏(4℃)后保存1周。

*冷冻保存细胞的话有可能会沉淀不溶物,所以不推荐冷冻保存。

Q5:用Cell Cycle Assiay  Soluton染色后,为了除去过量的试剂可以清洗细胞吗?
A5:不推荐染色后清洗细胞。

由于洗涤时的离心操作,有可能影响细胞周期解析的实验结果。

Q6:做流式检测时,应该注意哪些方面呢?
A6:流式检测时,需要在合适的条件下进行测检测。

以下列举了一些失败的案例。

1、检测通道选择不合适

例如一般的细胞周期检测都会使用PI(PE)通道,但是我们试剂盒选择PI通道并不能得到最适结果,请参照一下波段选择最适通道:

2、检测时电压过高(或过低)。

当流式检测时电压过高(或过低)时,都无法得到最适结果。

请通过直方图将G0/G1期、S期、G2/M期调整为清晰的测量电压。

3、细胞数量选择不合适

例如流式检测是圈门选择不恰当,会导致结果不好。

分析时请对选择所有细胞。

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商品信息
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特点:

·日本原装进口试剂盒

·固定和不固定都可使用

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细胞周期
活动进行中
试剂盒内含
产品概述
所需的设备和材料
溶液制备
基本操作
常见问题Q&A

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

NO.2.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

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NO.5.    Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit    细胞凋亡检测

试剂盒内含

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产品概述

  DNA含量分析在流式细胞检测中,占有相当大的比例。通过这种方法,研究者可以进行抗癌药物的毒性评估,并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中,DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定,可计算各细胞周期的百分率,也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。

Cell Cycle Assay Kit-PI/RNase Staining试剂盒,可快速完成细胞周期的分析,操作简便。本产品使用碘化丙啶 (PI) 作为DNA荧光染料,通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1,G2和S期细胞的比例。

所需的设备和材料

– 流式细胞仪(碘化丙啶PI:λex=535 nm,λem=617 nm)

– 37℃培养箱

– PBS缓冲液

– 1.5 ml微量管

– 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器

溶液制备

本产品在固定细胞及不细胞固定的情况下皆可使用。

配置Working solution (1 sample)

取500 μl Assay Buffer 后,分别加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。

*工作液易遇光分解,请在使用前立即配置并用铝箔纸包裹避光保存。

配置好的工作液1天内用完。

基本操作

非固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中,在1,000×g离心3 min b)

3. 去除上清液后加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000×g离心3 min。

4. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

5. 在4℃避光培养30 min。

6. 涡旋振荡使细胞分散,在37℃避光培养30 min。

7. 涡旋振荡使细胞分散,用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块 c)

8. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。

c) 样品处理后,剩余部分无法继续保存并使用。

固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中,在1,000×g 离心3 min。

3. 去除上清,并在细胞团中加入1 ml的-20℃保存的70%乙醇。

4. 涡旋振荡使细胞分散,在4℃下静置2 h b)

5. 在1,000×g 离心3 min后,去除乙醇 c)

6. 加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000×g 离心3 min。

7. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

8. 涡旋振荡使细胞分散,在37℃避光培养30 min。

9. 涡旋振荡使细胞分散,在4℃避光培养30 min。

10. 涡旋振荡使细胞分散,用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块 d)

11. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类,需适当调整固定时间。

c) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。

d) 样品处理后可以在4℃以下保存并继续使用,但是保存时间长短与细胞种类有关。

常见问题Q&A

Q1、C543用于分散细胞团聚的筛网的品牌、型号信息?
A1:FALCON 5mL Polystyrene Round-Bottom Tube with Cell-Strainer Cap 型号:352235
Q2:实验需要在37度、4度环境中分别培养30min,这个先后顺序对实验结果有影响吗?
A2:从做出的实验结果来看,没有影响。可以自由选择。
Q3:流式管作用是什么?
A3:检测时必须将细胞悬液放入流式管中,流式管的最上方有滤膜,这层滤膜的作用是把细胞打散,使其不团聚,也方便流式仪器吸取细胞的时候更容易)

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细胞周期
品名 货号 用途
细胞周期检测试剂盒-PI/RNase Staining C543 细胞周期(PI通道流式检测)
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Nucleolus Bright Red试剂货号:N512

Nucleolus Bright Red试剂货号:N512
核仁荧光染色试剂-红色
Nucleolus Bright Red
商品信息
储存条件:冷暗处保存
运输条件:室温

特点:

● 高特异性核仁定位

● 可通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

● 两种颜色可供选择

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60 nmol
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衰老检测方案
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产品概述
原理
核仁染色试剂的比较
产品特点
衰老细胞的评价例
产品实验例
核仁数分析
荧光特性
常见问题Q&A

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NO.1.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

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NO.5.    Lactate Assay Kit-WST    乳酸检测

产品概述

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料,只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应,不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所,荧光尤为强烈。

成像时,通过与核染色试剂DAPI[产品货号:D523]共染色,可以更清楚地确认核仁。有关详细信息,请参阅使用说明书中的实验例。

原理

核仁是不带膜的核内结构体,也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA),并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行,因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一,近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系,因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

1622192902845747.png

核仁染色试剂的比较

最大激发波长 最大发射波长 MeOH固定后染色 PFA固定后染色 活细胞染色
Nucleolus Bright Green 513 nm   538 nm △※
Nucleolus Bright Red 537 nm 605 nm △※

※希望通过活细胞进行评价时,请咨询公司技术支持。

产品特点

特点1:清晰地观察核仁

用4% PFA或MeOH固定HeLa细胞后,用PBS洗净后用1% Triton X-100进行破膜处理,加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养,然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

1622192822119035.png

<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4%PFA室温下浸泡5 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2:核仁定位

用4%PFA固定WI-38细胞后,用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色,并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ,培养后,用落射式荧光显微镜 (Keyence,BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

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<检测条件>

Nucleolus Bright Green:Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red:Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI:Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体:Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3:与核仁相关的领域的报告示例

相关领域 概要 文献
评论(衰老)    关于各种参与细胞功能的核仁,
包括与癌症和早老症的已知关系、
特别是关于衰老的核仁功能。
V. Tiku, A.   Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol.,   2018, 28(8), 662.
细胞衰老    由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、
核仁数量的减少和核仁总面积的加。
H. Tanaka,   S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M.   Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent   Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.
细胞衰老     由于rRNA加工因子的枯竭导致
核仁肥大化,
同时SA-βGal和p16表达增加。
K.   Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R.   Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome   biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53   activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.
自噬    通过抑制RNA聚合酶的转录,
确认自噬的诱导和核仁的形状变化。
N. Katagiri,   T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The   nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by   inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI:   10.1038/srep08903.

衰老细胞的评价例

将不同传代数的WI-38细胞用4% PFA固定后,用PBS洗净并用1% Triton X-100进行破膜处理,然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI),培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁,而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

blob.png

<染色条件>

细胞在4% PFA室温下浸泡5 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

产品实验例

实验例:通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后,分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁,并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像,在488nm处拍摄核仁体像,通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁,并计算出其数量。

1613715296471660.png

横河电机CQ1拍摄条件

使用板:96孔板

物镜:40倍

激发波长:

405nm(DAPI):蓝色

488nm(Nucleolus Bright Green):绿色

视野:16视野

<解析图像>

蓝框线:核

红框线:核仁

核仁数分析

在传代数较多的细胞中,得到了1个细胞核中只有1个核仁的比例增加,而2个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1,以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。

blob.png

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

荧光特性

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常见问题Q&A

Q1:可以染色活细胞吗?
A1:本试剂建议用于固定细胞染色,不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色,请联系我们的技术支持。

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Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal试剂盒
细胞衰老培养板检测试剂盒(SPiDER-βGal)
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -绿色
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -红色

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511

Nucleolus Bright Green试剂货号:N511
核仁荧光染色试剂-绿色
Nucleolus Bright Green
商品信息
储存条件:避光,在冷暗处保存
运输条件:室温

特点:

● 高特异性核仁定位

● 可通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

● 两种颜色可供选择

选择数量:

选择规格:
60 nmol
价格:
¥3010.00现货(会员请登录查看专享价!)
衰老
产品概述
原理
核仁染色试剂的比较
产品特点
衰老细胞的评价例
产品实验例
核仁数分析
荧光特性
常见问题Q&A

产品概述

Nucleolus Bright是一种选择性与RNA结合并产生荧光的小分子荧光染料,只需在固定细胞中加入试剂即可成像。虽然Nucleolus Bright也会和在核仁以外存在的RNA反应,不过核仁作为细胞内RNA最多存在rRNA的产生场所,荧光尤为强烈。

成像时,通过与核染色试剂DAPI[产品货号:D523]共染色,可以更清楚地确认核仁。有关详细信息,请参阅使用说明书中的实验例。

原理

核仁是不带膜的核内结构体,也是核糖体生物合成的起点。核仁中存在许多核糖体RNA(rRNA),并且是 rRNA基因转录以及合成加工的场所。由于蛋白质合成的早期阶段在核仁中进行,因此核仁的变化被认为与多种细胞活动有关。核仁的形态变化已被公认为判断癌症的指标之一,近年来也有一系列的报道论述了核仁应激与DNA损伤、自噬、病毒感染和细胞衰老的关系,因此核仁在这些方面的研究也受到越来越多的关注。

1622192461330857.png

核仁染色试剂的比较

最大激发波长 最大发射波长 MeOH固定后染色 PFA固定后染色 活细胞染色
Nucleolus Bright Green 513 nm 538 nm △※
Nucleolus Bright Red 537 nm 605 nm △※

※希望通过活细胞进行评价时,请咨询公司技术支持。

产品特点

特点1:清晰地观察核仁

用4% PFA或MeOH固定HeLa细胞后,用PBS洗净后用1% Triton X-100进行破膜处理,加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

试剂 (DAPI) 并培养,然后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实DAPI染色的细胞核内 (蓝色)有数个核仁存在。

1622192625285429.png

<染色条件>

・PFA 固定

细胞在4%PFA室温下浸泡5 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

・MeOH 固定

细胞在冷的MeOH中浸泡1 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特点2:核仁定位

用4%PFA固定WI-38细胞后,用抗Fibrillarin一抗和荧光标记的二抗免疫染色,并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色试剂

(DAPI) ,培养后,用落射式荧光显微镜 (Keyence,BZ-X710) 观察。

结果证实Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red与核仁标记物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

1608620937494572.png

<检测条件>

Nucleolus Bright Green:Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red:Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI:Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗体:Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特点:3:与核仁相关的领域的报告示例

相关领域 概要 文献
评论(衰老)    关于各种参与细胞功能的核仁,
包括与癌症和早老症的已知关系、
特别是关于衰老的核仁功能。
V. Tiku, A.   Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol.,   2018, 28(8), 662.
细胞衰老    由于与抑制衰老有关的蛋白质缺损、
核仁数量的减少和核仁总面积的加。
H. Tanaka,   S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M.   Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent   Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.
细胞衰老     由于rRNA加工因子的枯竭导致
核仁肥大化,
同时SA-βGal和p16表达增加。
K.   Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R.   Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome   biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53   activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.
自噬    通过抑制RNA聚合酶的转录,
确认自噬的诱导和核仁的形状变化。
N. Katagiri,   T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The   nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by   inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI:   10.1038/srep08903.

衰老细胞的评价例

将不同传代数的WI-38细胞用4% PFA固定后,用PBS洗净并用1% Triton X-100进行破膜处理,然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色试剂 (DAPI),培养后用共聚焦荧光显微镜观察。

结果证实第3代细胞 (P3) 中的一个细胞核内存在多个核仁,而第18代细胞 (P18) 中核仁变大并成为一体。

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<染色条件>

细胞在4% PFA室温下浸泡5 min,再用Triton X-100在室温下浸泡20 min,加入各种荧光探针后培养5 min。

<检测条件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

产品实验例

实验例:通过共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

使用共聚焦定量细胞成像仪 (横河电机株式会社 CQ1)对衰老细胞的定量分析。

将传代数不同的WI-38细胞固定后,分别用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁,并用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析

通过图像对核仁进行分析

用共聚焦定量细胞成像仪在405nm处拍摄细胞核图像,在488nm处拍摄核仁体像,通过分析软件Cell Pathfinder识别各个细胞核内的核仁,并计算出其数量。

1613714955722638.png

横河电机CQ1拍摄条件

使用板:96孔板

物镜:40倍

激发波长:

405nm(DAPI):蓝色

488nm(Nucleolus Bright Green):绿色

视野:16视野

<解析图像>

蓝框线:核

红框线:核仁

核仁数分析

在传代数较多的细胞中,得到了一个细胞核中只有一个核仁的比例增加,而两个及以上核仁的比例减少的结果。该结果与下述论文中衰老的WI-38细胞中核仁数的减少(论文中的Table3)*1,以及通过SETD8敲低诱导衰老的细胞核仁的变化(论文中的Figure4D)*2得到了相同的结果。

blob.png

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

荧光特性

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常见问题Q&A

Q1:可以染色活细胞吗?
A1:本试剂建议用于固定细胞染色,不建议用活细胞染色。如果您想用活细胞染色,请联系我们的技术支持。

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细胞衰老培养板检测试剂盒(SPiDER-βGal)
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -绿色
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -红色

DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red货号:G267

DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red货号:G267
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -深红色
Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal共染,检测衰老细胞DNA损伤
商品信息
储存条件:0-5°C,注意防止吸潮
运输条件:常温
下载说明书
选择数量:

选择规格:
1 set
价格:
¥3490.00期货(会员请登录查看专享价!)
无需另外准备试剂
操作简便
3色可选
试剂盒内含
性质
DNA损伤检测原理
试剂盒特点
细胞衰老实验例
常见问题Q&A

试剂盒内含

1618901963767871.png

性质

该试剂盒,可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂,即使是第一次使用的人操作起来也很方便,并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。

DNA损伤检测原理

DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂,H2AX(一种组蛋白H2X的亚种),当出现DNA双链断裂时,会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX(γH2AX),作为DNA损伤的标志物,有望被用来作为评估化学物质,活性氧,紫外线,辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来,γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。

该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。

1622600324206885.png

试剂盒特点

<试剂盒内已包含所有需要试剂>

所有试剂均已包含在试剂盒内,您可以马上检测并获得数据。

1622600349672214.png

*对于多次染色和组织染色,请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。

<操作简便>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

1622600371404418.png

<3色可选>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

1618904546840071.png

产品名称 荧光 激发发射波长
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green 绿色 λex : 494 nm、λem : 518 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red 红色 λex : 550 nm、λem : 566 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red 深红色 λex : 646 nm、λem : 668 nm

细胞衰老实验例

在评估细胞衰老时,应使用多种衰老指标进行分析。

<细胞衰老实验例>

概要 检测指标 论文
在自噬不足的卫生细胞中检测到细胞衰老,相反,通过添加自噬诱导剂后,细胞衰老被抑制。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 Laura Garcia-Prat, et. al., Nature2016529, 37.
在2型糖尿病模型中,证实了衰老指标活性增加,DNA损伤水平增加。 γH2AX、SA-β-gal、p21 Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab2013305(8), E951.
在缺乏特定蛋白质(BRE)的小鼠成纤维细胞中,观察到细胞衰老明显增强。 γH2AX、SA-β–gal W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506.
在棕榈酸处理的HepG2细胞中,染色质结构突变复合物之一SMARCD1减少,所有衰老指标的活性均得到增强。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 20173, 11.
在参与DNA修复的Ercc1基因缺陷小鼠中,证实了仅通过自发DNA损伤即会导致ROS水平升高和衰老诱导。 γH2AX、SA-β-gal、p16 R. R. Andria, et. Al., Redox Biology,  201817, 259.

<结合其他指标的细胞实验例>

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<染色条件>

将不同代数的WI-38细胞固定后,用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。

使用0.1%Triton-X / PBS进行膜渗透处理后,用该试剂盒对γH2AX进行染色。

<检测条件>

H2AX(深红色):Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm

SA-β-gal:Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm

DAPI:Ex.340-380 nm /  Em.435-485 nm

常见问题Q&A

Q:抗γH2AX抗体工作液和二抗工作液是否可以保存?
A:无法保存,请当天使用。
Q:可以使用试剂盒内含的封闭液以外,其他的试剂进行稀释抗体吗?
A:我们建议使用试剂盒内含的封闭液进行稀释。用其他溶液稀释可能会增加背景。
Q:多重染色的注意点
A:由于该试剂盒使用源自小鼠的一抗,因此在共染色其他抗原时,请选择小鼠来源的一抗以外的一抗。
Q:组织染色的注意点
请注意,不能用于小鼠组织的组织染色。

当需要对小鼠组织进行染色时,抗小鼠抗体(荧光标记的二抗)会对小鼠组织中IgG的非特异性吸附,从而增加背景。

<试剂盒中包含的抗体信息>

来源 交叉性
一抗 小鼠 人、小鼠
荧光标记的二抗 山羊 小鼠IgG

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(2S,3R,4S,5R,6R)-2-{[3′-(Diethylamino)-5′-(fluoromethyl)-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-6′-yl]oxy}-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
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细胞衰老培养板检测试剂盒(SPiDER-βGal)
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green
DNA损伤检测试剂盒- – γH2AX -绿色
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DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red货号:G266

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Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal共染,检测衰老细胞DNA损伤
商品信息
储存条件:0-5°C,注意防止吸潮
运输条件:常温
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选择规格:
1 set
价格:
¥3490.00现货(会员请登录查看专享价!)
无需另外准备试剂
操作简便
3色可选
试剂盒内含
性质
DNA损伤检测原理
试剂盒特点
试剂盒实验例
常见问题Q&A

试剂盒内含

1618901963767871.png

性质

该试剂盒,可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂,即使是第一次使用的人操作起来也很方便,并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。

DNA损伤检测原理

DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂,H2AX(一种组蛋白H2X的亚种),当出现DNA双链断裂时,会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX(γH2AX),作为DNA损伤的标志物,有望被用来作为评估化学物质,活性氧,紫外线,辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来,γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。

该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。

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试剂盒特点

<试剂盒内已包含所有需要试剂>

所有试剂均已包含在试剂盒内,您可以马上检测并获得数据。

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*对于多次染色和组织染色,请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。

<操作简便>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

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<3色可选>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

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产品名称 荧光 激发发射波长
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green 绿色 λex : 494 nm、λem : 518 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red 红色 λex : 550 nm、λem : 566 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red 深红色 λex : 646 nm、λem : 668 nm

试剂盒实验例

在评估细胞衰老时,应使用多种衰老指标进行分析。

<细胞衰老实验例>

概要 检测指标 论文
在自噬不足的卫生细胞中检测到细胞衰老,相反,通过添加自噬诱导剂后,细胞衰老被抑制。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 Laura Garcia-Prat, et. al., Nature2016529, 37.
在2型糖尿病模型中,证实了衰老指标活性增加,DNA损伤水平增加。 γH2AX、SA-β-gal、p21 Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab2013305(8), E951.
在缺乏特定蛋白质(BRE)的小鼠成纤维细胞中,观察到细胞衰老明显增强。 γH2AX、SA-β–gal W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506.
在棕榈酸处理的HepG2细胞中,染色质结构突变复合物之一SMARCD1减少,所有衰老指标的活性均得到增强。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 20173, 11.
在参与DNA修复的Ercc1基因缺陷小鼠中,证实了仅通过自发DNA损伤即会导致ROS水平升高和衰老诱导。 γH2AX、SA-β-gal、p16 R. R. Andria, et. Al., Redox Biology,  201817, 259.

<结合其他指标的细胞实验例>

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<染色条件>

将不同代数的WI-38细胞固定后,用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。

使用0.1%Triton-X / PBS进行膜渗透处理后,用该试剂盒对γH2AX进行染色。

<检测条件>

H2AX(深红色):Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm

SA-β-gal:Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm

DAPI:Ex.340-380 nm /  Em.435-485 nm

常见问题Q&A

Q:抗γH2AX抗体工作液和二抗工作液是否可以保存?
A:无法保存,请当天使用。
Q:可以使用试剂盒内含的封闭液以外,其他的试剂进行稀释抗体吗?
A:我们建议使用试剂盒内含的封闭液进行稀释。用其他溶液稀释可能会增加背景。
Q:多重染色的注意点
A:由于该试剂盒使用源自小鼠的一抗,因此在共染色其他抗原时,请选择小鼠来源的一抗以外的一抗。
Q:组织染色的注意点
请注意,不能用于小鼠组织的组织染色。

当需要对小鼠组织进行染色时,抗小鼠抗体(荧光标记的二抗)会对小鼠组织中IgG的非特异性吸附,从而增加背景。

<试剂盒中包含的抗体信息>

来源 交叉性
一抗 小鼠 人、小鼠
荧光标记的二抗 山羊 小鼠IgG

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核仁荧光染色试剂-红色

DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green货号:G265

DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green货号:G265
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Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal共染,检测衰老细胞DNA损伤
商品信息
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1 set
价格:
¥3490.00期货(会员请登录查看专享价!)
无需另外准备试剂
操作简便
3色可选
试剂盒内含
性质
DNA损伤检测原理
试剂盒特点
细胞衰老实验例
常见问题Q&A

试剂盒内含

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性质

该试剂盒,可通过二抗的方法轻松检测出作为DNA损伤的指标γH2AX。 本试剂盒内包含了实验所需的所有试剂,即使是第一次使用的人操作起来也很方便,并且我们还将介绍使用γH2AX作为指标的文献及实验例以供参考。

DNA损伤检测原理

DNA损伤中经常会出现DNA双链断裂,H2AX(一种组蛋白H2X的亚种),当出现DNA双链断裂时,会迅速而大量地被磷酸化。 这种磷酸化的H2AX(γH2AX),作为DNA损伤的标志物,有望被用来作为评估化学物质,活性氧,紫外线,辐射等的遗传毒性和致癌性。 近年来,γH2AX的检测也被用来作为评价细胞衰老的一种指标。

该产品使用单克隆抗体实验室生产的抗γH2AX抗体。

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试剂盒特点

<试剂盒内已包含所有需要试剂>

所有试剂均已包含在试剂盒内,您可以马上检测并获得数据。

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*对于多次染色和组织染色,请先查看常见问题中的“多次染色的注意事项”和“组织染色的注意事项”。

<操作简便>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

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<3色可选>

细胞固定和膜渗透处理后,只需添加试剂盒中包含的试剂并进行洗涤即可进行染色。

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产品名称 荧光 激发发射波长
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Green 绿色 λex : 494 nm、λem : 518 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red 红色 λex : 550 nm、λem : 566 nm
 DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Deep Red 深红色 λex : 646 nm、λem : 668 nm

细胞衰老实验例

在评估细胞衰老时,应使用多种衰老指标进行分析。

<细胞衰老实验例>

概要 检测指标 论文
在自噬不足的卫生细胞中检测到细胞衰老,相反,通过添加自噬诱导剂后,细胞衰老被抑制。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 Laura Garcia-Prat, et. al., Nature2016529, 37.
在2型糖尿病模型中,证实了衰老指标活性增加,DNA损伤水平增加。 γH2AX、SA-β-gal、p21 Milad S. Bitar, et. al., Am J Physiol Endocrinol Metab2013305(8), E951.
在缺乏特定蛋白质(BRE)的小鼠成纤维细胞中,观察到细胞衰老明显增强。 γH2AX、SA-β–gal W. Shi, M. K. Tang, Y. Yao, C. Tang, Y. L. Chui and K. K. Lee Sci Rep. , 2016, 6, 23506.
在棕榈酸处理的HepG2细胞中,染色质结构突变复合物之一SMARCD1减少,所有衰老指标的活性均得到增强。 γH2AX、SA-β-gal、p16、p21 I. Chisato, et. al., NPJ Aging Mech Dis., 20173, 11.
在参与DNA修复的Ercc1基因缺陷小鼠中,证实了仅通过自发DNA损伤即会导致ROS水平升高和衰老诱导。 γH2AX、SA-β-gal、p16 R. R. Andria, et. Al., Redox Biology,  201817, 259.

<结合其他指标的细胞实验例>

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<染色条件>

将不同代数的WI-38细胞固定后,用细胞衰老检测试剂盒-SPiDER-βGal对其进行染色。

使用0.1%Triton-X / PBS进行膜渗透处理后,用该试剂盒对γH2AX进行染色。

<检测条件>

H2AX(深红色):Ex.590-650 nm / Em.663-738 nm

SA-β-gal:Ex.533-557 nm / Em.570-640 nm

DAPI:Ex.340-380 nm /  Em.435-485 nm

常见问题Q&A

Q:抗γH2AX抗体工作液和二抗工作液是否可以保存?
A:无法保存,请当天使用。
Q:可以使用试剂盒内含的封闭液以外,其他的试剂进行稀释抗体吗?
A:我们建议使用试剂盒内含的封闭液进行稀释。用其他溶液稀释可能会增加背景。
Q:多重染色的注意点
A:由于该试剂盒使用源自小鼠的一抗,因此在共染色其他抗原时,请选择小鼠来源的一抗以外的一抗。
Q:组织染色的注意点
请注意,不能用于小鼠组织的组织染色。

当需要对小鼠组织进行染色时,抗小鼠抗体(荧光标记的二抗)会对小鼠组织中IgG的非特异性吸附,从而增加背景。

<试剂盒中包含的抗体信息>

来源 交叉性
一抗 小鼠 人、小鼠
荧光标记的二抗 山羊 小鼠IgG

关联产品

细胞衰老检测试剂盒—Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
细胞衰老检测试剂盒SPiDERβGal
SPiDER-βGal试剂
(2S,3R,4S,5R,6R)-2-{[3′-(Diethylamino)-5′-(fluoromethyl)-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-6′-yl]oxy}-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
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细胞衰老培养板检测试剂盒(SPiDER-βGal)
DNA Damage Detection Kit – γH2AX - Red
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Nucleolus Bright Red试剂
核仁荧光染色试剂-红色