标签归档：膜电位

Mtphagy Dye试剂货号：MT02

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Mtphagy Dye试剂货号：MT02
Mtphagy Dye
Mtphagy Dye
商品信息
储存条件：0-5度保存，避光防潮，充氮气
运输条件：室温

特点：

 

● 只需添加小分子量荧光试剂即可轻松检测线粒体

● 可以使用荧光显微镜进行活细胞成像

● 可以与附着的溶酶体染色剂同时染色

选择规格：
5μg*3
期货
 

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线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13

发表于由
线粒体膜电位检测试剂盒货号：MT13
线粒体膜电位检测试剂盒
MT-1 MitoMP Detection Kit
商品信息
运输条件：室温

特点：

● 固定后仍可检测

● 荧光滞留性强

● 灵敏度高

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产品文献
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选择规格：
1set
现货
 
线粒体检测方案
产品解说
产品概述
产品特点
与各种试剂的比较
实验例
常见问题Q&A
参考文献

产品解说

 

产品概述

线粒体利用氧气合成ATP，从而产生细胞所需的能量，是重要的细胞器之一。线粒体活性低下和机能障碍与癌症、老化、阿尔茨海默病、帕金森病等神经变性疾病密切相关。因此，线粒体膜电位（MMP）作为线粒体相关疾病的一个有希望的靶点已被广泛研究。

产品特点

解决传统试剂的三个问题

观察线粒体膜电位时，使用JC-1、TMRE、TMRM，但由于PFA不可固定、容易淬灭，数据的再现性等问题。MT-1 MitoMP Detection Kit是克服了这些问题的线粒体膜电位的检测试剂。

并且，通过本试剂盒中包含的Imaging Buffer，可以在抑制了荧光背景和对细胞的损伤的状态下进行观察。

①固定后也可检测

由于微小的细胞状态的变化，也会造成线粒体膜电位发生变化，所以取得数据的重现性需要特别注意。通用的线粒体膜电位检测试剂（JC-1、TMRE）如果对细胞进行固定处理的话会失去荧光，所以需要使用活细胞进行迅速的测定。MT-1即使进行染色后进行PFA固定操作，也能保持荧光，因此可以进行高重复性的实验。

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②可监控

没有进行药物刺激的细胞通过各种试剂染色，确认了荧光强度的变化。结果，JC-1和TMRE在染色后约10分钟左右荧光强度下降，MT-1仍保持了一定的荧光强度

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③高灵敏度

线粒体膜电位的细微变化在JC-1中有难以检测的情况，在这种情况下，使用四甲基罗丹明乙酯（TMRE）监测MMP。MT-1可提供与TMRE同等的检测灵敏度。

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与各种试剂的比较

Features Sensitivity Fixation Monitoring Fluorescence change (upon loss of mitochondrial membrane potential) Detection
(ex/em)
JC-1
(JC-1 MitoMP Detection Kit)		 Recomended for starting-up ✓ Color change from red to green Green: 450-490 nm / 500-550 nm
Red: 530-560 nm / 570-640 nm 

 
MT-1
(MT-1 MitoMP Detection Kit)		 Recommended for more detailed analysis ✓
(High)		 ✓ ✓ Decrease in fluorescence intensity 530-560 nm / 570-640 nm
TMRE Widely used ✓
(High)		 Decrease in fluorescence intensity 530-560 nm / 570-640 nm

实验例

1.通过去极化的实验例

通过线粒体去极化剂的cyanide-p-trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP)处理HeLa细胞，用该试剂观察膜电位的变化。

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结果，确认了FCCP处理的细胞线粒体膜电位下降的情况。

2.凋亡诱导细胞线粒体膜电位的变化

预先在MT-1中染色的HL60细胞中添加Etoposide，诱导凋亡后，与Annexin V、FITC Conjugate一同染色，并通过流式细胞仪检测。

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结果发现Annexin V-FITC产生的荧光强度变化（绿色荧光强度的增加）确认了凋亡的发生，以及从MT-1产生的荧光强度变化（红色荧光强度的降低）发现了线粒体膜电位的变化。

3.同时评估线粒体超氧化物和膜电位

用 HBSS 冲洗 HeLa 细胞后，用 MT-1 线粒体氧化酶检测试剂盒和线粒体超氧化物检测染料（(mtSOX Deep Red： MT14）共同染色，同时观察线粒体 ROS 和膜电位的产生情况。因此，线粒体膜电位的降低和线粒体 ROS 的产生是同时观察到的。

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＜成像条件＞（共聚焦显微镜）

MT-1: Ex=561, Em=560-600 nm
mtSOX: Ex=633 nm, Em=640-700 nm

Scale bar: 10 μm

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＜检测条件＞（酶标仪）Tecan，Infinite M200 Pro

MT-1: Ex=540-550 nm, Em=590-610 nm (Gain=200)
mtSOX: Ex=545-555 nm, Em = 665-685 nm

常见问题Q&A

Q1:使用荧光显微镜检测时需要注意什么？
A1:请尽量减少激发光照射时间并提高检测灵敏度。

细胞长期暴露于激发光内可能导致细胞损伤和荧光染料降解，请优化检测时间。
Q2：MT-1检测后可以固定吗？
A2：应使用4%多聚甲醛（PFA）固定，且不能与（Triton X-100、NP-40等）一起使用，因为这可能导致染泄漏。
Q3：固定后可以对细胞染色吗？
A3：由于MT-1在线粒体中的积累取决于线粒体膜电位，因此固定后不适用于染色。
Q4：是否需要做阳性对照？
A4：作为阳性对照，可在技术手册中找到使用FCCP（羰基氰化物-对三氟甲氧基苯腙）的实验例。
 

Q5：优化染色条件时，应使用何种浓度的MT-1染料
 

A5：MT-1染料的浓度建议稀释1000倍。但在优化染色条件时，请参考以下内容。

<荧光强度弱>

请优化以下浓度：稀释500-1000倍。

<观察到非特异性吸附>

请优化以下浓度：稀释1000至2000倍。
Q6:我可以使用缓冲液来制备MT-1工作溶液吗？
A6:可以使用Hanks的HEPES和HBSS。也可以使用MEM、RPMI和含10%FBS的MEM制备。
Q7：添加MT-1工作液后，可以不清洗直接上机检测吗？
A7：染色后，无需清洗即可观察样品。但我们不建议在不清洗的情况下长期观察它们，因为它们可能具有细胞毒性。

我们建议去除上清液并用培养基替换。
Q8：MT-1染色后，是否可以用PBS代替HBSS来清洗？
A8：我们建议使用HBSS来减少细胞损伤。如果您没有HBSS，我们建议使用培养基来代替清洗。

参考文献

No. Sample Instrument Reference
1 STHdh Cells Microscope N. Okada, T. Yako, S. Nakamura, M. Shimazawa, H. Hara, “Reduced mitochondrial complex II activity enhances cell death via intracellular reactive oxygen species in STHdhQ111 striatal neurons Q1 with mutant huntingtin”, J. Pharmacol. Sci., 2021, doi:10.1016/j.jphs.2021.09.001.
2 Panc-1 Cells Microscope N. Okuni, Y. Honma, T. Urano, K. Tamura, “Romidepsin and tamoxifen cooperatively induce senescence of pancreatic cancer cells through downregulation of FOXM1 expression and induction of reactive oxygen species/lipid peroxidation”, Mol. Biol. Rep., 2022, doi:10.1007/s11033-022-07192-9.
3 BM Cells Microscope Y. Aoyagi, Y. Hayashi, Y. Harada, K. Choi, N. Matsumura, D. Sadato, Y. Maemoto, A. Ito, S. Yanagi, D. Starczynowski, H. Harada, “Mitochondrial Fragmentation Triggers Ineffective Hematopoiesis in Myelodysplastic Syndromes”, Cancer Discovery, 2022, doi:10.1158/2159-8290.CD-21-0032.
4 Flies indirect flight muscle Cells Microscope N. Nozawa, M. Noguchi, K. Shinno, M. Tajima, S. Aizawa, T. Saito, A. Asada, T. Ishii, M. Ishizuka, K. Iijima and K. Ando, “5-Aminolevulinic acid and sodium ferrous citrate ameliorate muscle aging and extend healthspan in Drosophila”, FEBS Open Bio, 2022, doi:10.1002/2211-5463.13338.
5 HBME Cells Microscope Y. Sakai, M. Taguchi, Y. Morikawa, H. Miyazono, K. Suenami, Y. Ochiai, E. Yanase, T. Takayama, A. Ikari, T. Matsunaga, “Apoptotic mechanism in human brain microvascular endothelial cells triggered by 40-iodo-α-pyrrolidinononanophenone: Contribution of decrease in antioxidant properties”, Toxicol. Lett., 2022, doi:10.1016/j.toxlet.2021.11.018.
6 MIN6-M9 Cells Microscope R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, “Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER”, 2022, iScience,  doi:10.1016/j.isci.2022.104603.
7 SH-SY5Y Cells Flow Cytometer M. Hashimoto, M. Fujimoto, K. Konno, M. L. Lee, Y. Yamada, K. Yamashita, C. Toda, M. Tomura, M. Watanabe, O. Inanami and H. Kitamura, “Ubiquitin-Specific Protease 2 in the Ventromedial Hypothalamus Modifies Blood Glucose Levels by Controlling Sympathetic Nervous Activation”, J. Neurosci., 2022, doi:10.1523/JNEUROSCI.2504-21.2022.
8 Fibroblasts, ciBAs Microscope Y. Takeda and P. Dai, “Chronic Fatty Acid Depletion Induces Uncoupling Protein 1 (UCP1) Expression to Coordinate Mitochondrial Inducible Proton Leak in a Human-Brown-Adipocyte Model”, 2022, doi:10.3390/cells11132038.
9 Sperm cells from C. osakensis queens Microscope A. Gotoh, M. Takeshima and K Mizutani, “Near-anoxia induces immobilization and sustains viability of sperm stored in ant queens”, Sci. Rep., 2023, doi:10.1038/s41598-023-29705-7.
10 Nucleus Pulposus Cells Microscope K. Suyama, D. Sakai, S. Hayashi, N. Qu, H. Terayama, D. Kiyoshima, K. Nagahori and M. Watanabe, “Bag-1 Protects Nucleus Pulposus Cells from Oxidative Stress by Interacting with HSP70”, Biomedicines, 2023, doi:10.3390/biomedicines11030863.
11 HL60 Cells, KG1a Cells Flow Cytometer K. Kamachi, H. Ureshino, T. Watanabe, N. Y. Sakai, Y. F. Kurahashi, K. Kawasoe, T. Hoshiko, Y. Yamamoto, Y. Kurahashi, and S. Kimura , “Combination of a New Oral Demethylating Agent, OR2100, and Venetoclax for Treatment of Acute Myeloid Leukemia”, Cancer Res Commun., 2023, doi:10.1158/2767-9764.CRC-22-0259.
12 RAW264 Cells Microscope H. Gu, Y. Zhu, J. Yang, R. Jiang, Y. Deng, A. Li, Y. Fang, Q. Wu, H. Tu, H. Chang, J. Wen and X. Jiang, “Liver-Inspired Polyetherketoneketone Scaffolds Simulate Regenerative Signals and Mobilize Anti-Inflammatory Reserves to Reprogram Macrophage Metabolism for Boosted Osteoporotic Osseointegration”, Adv sci, 2023, doi:10.1002/advs.202302136.

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线粒体

发表于由

线粒体

线粒体(mitochondrion) 是一种存在于大多数细胞中的由两层膜包被的细胞器，是细胞中制造能量的结构，是细胞进行有氧呼吸的主要场所，线粒体拥有自身的遗传物质和遗传体系，但其基因组大小有限，是一种半自主细胞器。除了为细胞供能外，线粒体还参与诸如细胞分化、细胞信息传递和细胞凋亡等过程，并拥有调控细胞生长和细胞周期的能力。最近越老越多的研究发现线粒体在细胞中的作用远远不止”细胞能量站”。它们参与了各种细胞功能调控，与很多人类疾病存在着莫大的联系。包括细胞信号传导、代谢、自噬、衰老和肿瘤发生都与线粒体的质量和活性相关
线粒体损伤
线粒体自噬
线粒体氧化应激
线粒体染色
品名 货号 用途
线粒体膜电位检测试剂盒 MT13 线粒体膜电位检测
线粒体膜电位检测试剂盒—JC-1 MitoMP Detection Kit MT09 线粒体膜电位检测
Cellstain- MitoRed试剂 R237 线粒体ATP检测-红色
Cellstain- Rh123试剂(罗丹明123） R233 线粒体ATP检测-绿色
品名 货号 用途
Mtphagy Dye试剂 MT02 线粒体自噬
线粒体自噬—Mitophagy Detection Kit MD01 线粒体自噬检测
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mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection MT14 线粒体超氧化物检测
铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen M489 线粒体内二价铁离子检测
Si-DMA for Mitochondrial Singlet Oxygen Imaging试剂 MT05 线粒体内单线态氧检测
MitoPeDPP试剂 M466 线粒体内脂质过氧化物检测
品名 货号 用途
MitoBright IM Red for Immunostaining试剂 MT15 免疫荧光用线粒体荧光染料Red
MitoBright LT Green试剂 MT10 线粒体长效荧光染色（绿色）
MitoBright LT Red试剂 MT11 线粒体长效荧光染色（红色）
MitoBright LT Deep Red试剂 MT12 线粒体长效荧光染色（深红色）

线粒体功能研究

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线粒体简要通路图海报下载

同仁化学 线粒体简要通路图.pdf

线粒体相关检测试剂

线粒体自噬检测

线粒体自噬
试剂 Mtphagy Dye Keima-Red
原理 线粒体自噬染料是一种PH敏感的荧光探针，该染料聚集在线粒体中，并由溶酶体的酸性条件而发出荧光 这是一种基于PH感应比值的荧光蛋白。该蛋白在溶酶体中具有比较高的荧光比值（如550 nm/440 nm）。
固定细胞染色 – –
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定 – –
染色时间 >30 min –
Ex/Em 530/700 440,550/620
产品货号 MD01 , MT02 –

线粒体膜电位检测

Membrane potential

线粒体膜电位
试剂 JC-1 TMRM,   TMRE
原理 JC-1是一种被广泛使用的小分子线粒体膜电位探针，依赖于线粒体膜电位在线粒体中聚集，染料伴随聚集过程，荧光从绿色   (530 nm) 变为红色 (590 nm)。当线粒体发生去极化，红/绿荧光强度比值降低。 该试剂是细胞渗透性荧光染料，由于膜电位在完整的线粒体中积累。探针扩散发生在膜电位降低的受损线粒体中。
固定细胞染色 – –
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定 – –
染色时间 10- 60 min 30- 60 min
Ex/Em Monomer:514/529 550/575
J-aggregation: 585/590
产品货号 MT09 –

线粒体金属离子检测

Iron ion (Fe2+)

亚铁离子

 Calcium ion (Ca2+)

钙离子
试剂 Mito-FerroGreen Rhod 2-AM
原理 该试剂是一种细胞通透性探针，其积累在线粒体中，并与线粒体中的亚铁离子发生特异性反应，发出绿色荧光。 该试剂是一种细胞通透性探针，该探针积聚在线粒体中，并与线粒体中的钙离子发生特异性反应，发出红色荧光。
固定细胞染色 – –
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定 – –
染色时间 30 min 30-60 min
Ex/Em 505/535 553/576
产品货号 M489 R002

线粒体荧光染色

Mitochondria staining

线粒体染色
试剂 MitoBright LT series MitoTracker series
原理 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。
固定细胞染色 – –
活细胞染色 Yes Yes
活细胞染色后固定 – –
染色时间 >10 min 15 -45 min
Ex/Em 493/508,547/563, 643/663 490/516~644/665
产品货号 MT10、MT11、MT12 –
Mitochondria staining

线粒体染色
试剂 DsRed MitoRed Rh123
原理 一种红色荧光蛋白染料，通过转染试剂与完整的线粒体结合。 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。 细胞渗透性荧光染料，基于线粒体膜电位而在完整的线粒体中积累。
固定细胞染色 – – –
活细胞染色 Yes Yes Yes
活细胞染色后固定 – – –
染色时间 Expression in 8 -12 hrs. >15 min >15 min
Ex/Em 558/583 560/580 507/529
产品货号 – R237 R233

线粒体氧化应激

Lipophilic peroxide

脂质过氧化物

 Singlet oxygen

单线态氧

 Superoxide

超氧化物
试剂 MitoPeDPP Si-DMA MitoSOX
原理 MitoPeDPP是一种新型荧光染料，由于其具有三苯基膦结构，因此可以穿过细胞膜并在线粒体中聚集。聚集在线粒体内膜上的MitoPeDPP可以被脂质过氧化物氧化而释放出强荧光。 该试剂是一种细胞渗透性荧光探针，积聚在线粒体中，与线粒体中产生的单线态氧发生反应，发出红色荧光。 该试剂是一种细胞渗透荧光探针，积聚在线粒体中，与线粒体中产生的超氧化物反应，发出红色荧光。
固定细胞染色 – – –
活细胞染色 Yes Yes Yes
活细胞染色后固定 – – –
染色时间 > 15 min > 45 min > 10 min
Ex/Em 452/ 470 644/ 670 510/ 590
产品货号 M466 MT05 –

引用论文

① H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, N. Saitoh, S. Hino and M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Reports, 2017, 18(9), 2148.
② L. Garcia-Prat, M. Martinez-Vicente and P. Munoz-Canoves, “Autophagy: a decisive process for stemness”, Oncotarget, 2016, 7(11), 12286.
③ M. Bitar, S. Abdel-Halim and F. Al-Mulla, “Caveolin-1/PTRF upregulation constitutes a mechanism for mediating p53-induced cellular senescence: implications for evidence-based therapy of delayed wound healing in diabetes”, Am J Physiol Endocrinol Metab., 2013, 305(8), E951.
④ C. Wiley, M. Velarde, P. Lecot, A. Gerencser, E. Verdin, J. Campisi, et. al., “Mitochondrial Dysfunction Induces Senescence with a Distinct Secretory Phenotype”, Cell Metab., 2016, 23(2), 303.
⑤ E. Liao, Y. Hsu, Q. Chuah, Y. Lee, J. Hu, T. Huang, P-M Yang & S-J Chiu, “Radiation induces senescence and a bystander effect through metabolic alterations.”, Cell Death Dis., 2014, 5, e1255.
⑥ K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, A. Murayama, J. Yanagisawa and K. Kimura, “Perturbation of Ribosome Biogenesis Drives Cells into Senescence through 5S RNP-Mediated p53 Activation”, Cell Rep. 2015, 10(8), 1310.
⑦ M. J. Son, Y. Kwon, T. Son and Y. S. Cho, “Restoration of Mitochondrial NAD+ Levels Delays Stem Cell Senescence and Facilitates Reprogramming of Aged Somatic Cells”, Stem Cells. 2016, 34(12), 2840.