胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05

胱氨酸摄取能力检测试剂盒—Cystine Uptake Assay Kit货号:UP05
胱氨酸摄取能力检测试剂盒
Cystine Uptake Assay Kit
商品信息
储存条件:-20度保存
运输条件:常温

特点:

● 可用荧光酶标仪高通量筛选

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产品概述
检测原理
检测实例
与传统方法比较
常见问题Q&A
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产品概述

胱氨酸(Cystine)是抗氧化物质谷胱甘肽(GSH)的来源,在细胞内的氧化还原平衡中发挥着重要的作用。在癌症研究领域,Sulfasalazine、Erastin等xCT(胱氨酸/谷氨酸反向转运体)抑制剂可以改变细胞内的氧化应激平衡,进而引发细胞死之一的铁死亡。而在免疫研究领域,据报道,巨噬细胞和中性粒细胞在免疫刺激剂的作用下,xCT的表达会增高并增加细胞内的GSH水平,以平衡自身出于攻击癌细胞目的所释放的ROS。因此,无论是对癌细胞的研究还是免疫细胞的研究都离不开胱氨酸摄取能力这一重要指标。

图片1.png

检测原理

试剂盒内含的胱氨酸类似物(Cystine Analog, CA)与胱氨酸一样可以通过xCT的转运进入细胞内。细胞裂解后通过添加Reducing Agent还原CA并与检测试剂FOdA特异性反应,生成可产生荧光的物质。[专利申请中]

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检测实例

xCT抑制剂Sulfasalazine, Erastin的抑制效果评价

使用本试剂盒对xCT抑制剂Sulfasalazine和Erastin的抑制效果进行评价。荧光结果显示,两种抑制剂均对胱氨酸的摄取有明显的抑制作用。

微信截图_20211115090942.png

与传统方法比较

以往在胱氨酸摄取检测时一般采用同位素示踪法,下面是本试剂盒与同位素示踪法结果的比较。

微信截图_20211115091458.png

常见问题Q&A

Q1:氨基酸类似物(CA)具体是通过哪种转运体进入细胞内的?
A1:Cystine Analog是通过胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)进入细胞内的。
Q2:目前有检测实绩的细胞有哪些?
A2:下列细胞都有检测实绩:人胶质母细胞瘤细胞, A172

人类肺泡基底上皮细胞, A549

人恶性黑色素瘤细胞, A375

人结肠癌细胞, HCT116

人肝癌细胞, HepG2

人早幼粒白血病, HL60

人纤维肉瘤细胞, HT1080

小鼠胚胎成纤维细胞, MEF

人小细胞肺癌细胞, SBC-5

人胶质瘤细胞, U-251 MG

Q3:氨基酸类似物(CA)进入细胞后会被分解、代谢掉吗?
A3:氨基酸类似物(CA)的构造非常稳定,实验范围内的操作不会被分解或代谢。
Q4:可以用这个试剂盒进行定量检测胱氨酸吗?
A4:本试剂盒不是胱氨酸定量检测试剂盒。
Q5:可以用这个试剂盒对进入细胞内的胱氨酸定量检测吗?
A5:不能定量检测进入细胞内的胱氨酸,本试剂盒是针对细胞摄取胱氨酸能力的数值化检测试剂盒。
Q6:观察不到荧光变化的时候,应该怎么办?
A6:延长CA Uptake solution与细胞的共培养时间(0.5 ~ 1 h)。
Q7:背景荧光较高时,应该怎么办?
A7:环境中可能有未被细胞摄取的胱氨酸类似物残存,用PBS清洗后再进行检测。
Q8:配制CA Uptake solution时,除了不含胱氨酸的无血清培养基以外,还可以使用哪些Buffer?
A8:检测HeLa细胞时,有过使用HBSS或含有0.1% Glucose PBS(+)进行配制的成功实例。
Q9:如何用细胞数对荧光强度进行补正?
A9:可以通过细胞核染色试剂进行补正。也可以使用同仁化学研究所的 Cell Count Normalization Kit (货号C544)进行细胞数补正。
Q10:一般使用哪种孔板比较好?
A10:

下列厂家得孔板有过检测实绩:

公司名/ 产品名/ 货号

Ibidi/ μPlate 96 well ibiTreat black S 15/ Ib89626

AGC techno glass/ EZVIEW Glass Bottom Culture Plate LB 96well/ 5866-096

Thermo Fisher/ 96 Well Black/Clear Bottom Plate, TC Surface, Pack of 10/ 165305

Q11:Cystine uptake solution可以长期保存吗?
A11:CA Uptake solution无法长期保存,请提前计算好用量,务必现用现配。

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