特点:
● 细胞上清液和细胞样品均适用
● 稳定性好
●可使用酶标仪高通量筛选
产品解说
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凑单关联产品TOP5
NO.1. Lactate Assay Kit-WST 乳酸检测
NO.2. Glucose Uptake Probe-Green 葡萄糖摄取检测
NO.3. Cell Counting Kit-8 细胞增殖毒性检测
NO.4. FerroOrange 细胞亚铁离子检测
NO.5. Liperfluo 细胞脂质过氧化物检测
试剂盒内含
50 tests | 200 tests | |
Dye Mixture | ×1 | ×1 |
葡萄糖标准品(10 mmol/l)(红盖) | 150 μl×1 | 600 μl×1 |
酶(绿盖) | ×1 | ×1 |
Assay Buffer | 3.5 ml×1 | 14 ml×1 |
Reconstitution Buffer(蓝盖) | 350 μl×1 | 1.4 ml×1 |
概述
葡萄糖是一种提供体内能量来源的最重要的物质,也是一种主要能量代谢指标。它不仅是糖尿病和肥胖研究的糖代谢指标,在癌症研究中,也常和乳酸一起作为体内细胞代谢的检测指标。最新的研究表明,抑制与葡萄糖代谢和脂质代谢有关的酶的活性,可以抑制癌细胞的生长。
葡萄糖检测试剂盒(Glucose Assay Kit-WST)可以定量检测能量代谢的底物-葡萄糖,通过测定WST反应的吸光度来定量细胞培养基上清液中的葡萄糖。检测限可达浓度为0.02 mmol/l的葡萄糖,适合用96孔板检测,可以同时检测多个样品。
原理
*本试剂盒可以检测细胞上清液*的葡萄糖的含量,通过检测WST甲赞的吸光度来测定。另外,试剂盒里有葡萄糖标准液,可以制作标准曲线,测定样品中的葡萄糖浓度。
*要测定细胞上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有检测细胞上清液以外的实验例?”。
操作步骤
制作葡萄糖标准曲线
可以用试剂盒中的葡萄糖标准液制作出葡萄糖标准曲线,然后通过标准曲线求出样品中的葡萄糖浓度。当葡萄糖浓度在0.5 mmol/l以上时,可以通过稀释样品进行检测。
实验例
用Phloretin抑制葡萄糖的摄取
1. 制备所需浓度Phloretin的Jurkat细胞悬液 (5×105 cells/ml,在RPMI培养基中含有10%的胎牛血清和1%的青霉素-链霉素)。
2. 在6孔板中接种1×106 cells/孔的细胞悬液,在37℃,5% CO2培养箱中过夜培养。
3. 将细胞悬液转移到锥形管中,在1,500 rpm离心5 min。
4. 吸取100 µl上清液至1.5 ml微型管中,用超纯水稀释30倍。
5. 按照葡萄糖标准液的制备方法制备葡萄糖标准液。
6. 在96孔板中分别加入50 µl的样品或葡萄糖标准液。
7. 在每孔中加入50 µl工作液。
8. 在37℃培养箱中培养30 min。
9. 用酶标仪检测450 nm处的吸光度,根据葡萄糖的标准曲线计算样品的葡萄糖浓度。
Phloretin抑制葡萄糖的摄取
实验证实,细胞培养基上清液中的葡萄糖摄入量减少与Phloretin (一种葡萄糖转运抑制剂)浓度之间有依存关系。
常见问题Q&A
Q1:是否可以检测2-Deoxy-D-glucose? |
A1:可以检测2-Deoxy-D-glucose。 |
Q2:Working Solution的稳定性如何? |
A2:Working Solution无法保存,请现配现用。由于对光不稳定,因此配制后请避光,在室温和避光条件下可保存4小时(当Working Solution在曝光下,溶液颜色会由红色变为橙色,背景升高)。 |
Q3:当有还原性物质存在时是否还可以用这个试剂盒检测? |
A3:如果样品中含有还原性的物质,则也会和WST染料发生显色,此时无法准确定量葡萄糖浓度。实验中如遇到以上情况,可以设定药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)作为背景对照,并从标准曲线和样品的吸光度中减去它。 |
Q4:是否有检测细胞上清液以外的实验例? |
A4:有测定细胞内葡萄糖的实验例。操作详情,请参考常见问题FAQ“Q5”。其他的样品没有实验例。 |
Q5:是否可以检测细胞内葡萄糖? |
A5:细胞内葡萄糖也可以检测,请参考下面的样品制备步骤。 请准备「0.1%Triton X-100水溶液」和「滤膜(分子量:10KD )」 (1)将细胞*1悬液收于1.5 ml微量管中。 ※测定所需的细胞数,需要根据细胞种类进行调整。 |
Q6:一个试剂盒可以检测样品的数量。 |
A6:制备标准曲线和样品(n=3)时,可以检测的样品数量如下所示。
标准曲线:8个点(0, 0.0157, 0.0313, 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5, 1 mmol/l)(n=3) 96孔板排列示意图(n=3) |
Q7:可以测量L-Glucose吗? |
A7:本产品用于β-D-Glucose测量,不能测量L-Glucose。 |
参考文献
No | 检测对象 | 文献 |
1 | 小鼠血清 | Increased levels of Aβ42 decrease the lifespan of ob/ob mice with dysregulation of microglia and astrocytes, FASEB J., 2019,DOI: 10.1096/fj.201901028RR |
2 | 链霉菌 | Enhancement of metabolic flux toward ε-poly-l-lysine biosynthesis by targeted inactivation of concomitant polyene macrolide biosynthesis in Streptomyces albulus, J. Biosci.Bioeng., 2020,DOI: 10.1016/j.jbiosc.2019.12.002 |
3 | HCT116细胞 | Serine racemase enhances growth of colorectal cancer by producing pyruvate from serine, Nat. Metab., 2020, 2(1), 81 |
4 | P388白血病细胞 | 2-Deoxy-D-glucose enhances the anti-cancer effects of idarubicin on idarubicin-resistant P388 leukemia cell, Oncol. Lett., 2020, 20(1), 962-966 |
5 | 小鼠精子细胞 | Macrophage ubiquitin‑specific protease 2 contributes to motility, hyperactivation, capacitation, and in vitro fertilization activity of mouse sperm, Cellular and Molecular Life Sciences, 2020, doi: 10.1007/s00018-020-03683-9 |
*要测定细胞培养上清液以外的样品,请事先查看常见问题FAQ“是否有除检测细胞上清液以外的样品检测实验例”。