PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504 细胞膜染色试剂—绿色

PlasMem Bright Green细胞膜染色试剂货号:P504
细胞膜染色试剂—绿色
PlasMem Bright Green
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细胞染色
产品特性
与其他公司产品的比较
细胞膜上的停留时间
实验例
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常见问题Q&A
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产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用,并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此,细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病(如离子通道病Channelopathy)有很密切的关联,被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色,小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时,可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

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与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点(细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差)。并且分别有Green/ Red两种产品,方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

染色后

的清洗

含血清

培养基

停留

时间

染色后

的固定

PlasMem Bright 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P 需要 不可使用 可以
T公司 产品D 需要 可使用 不可以
T公司 产品C 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

*通过细胞核染色试剂染色后,神经细胞的形态变化(凝集)的比较得出的结论

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞,经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现,与其他公司的细胞膜染色试剂相比,PlasMem Bright系列产品的染色时间更长,膜上的停留时间也更长。

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实验例

实验例:ES细胞群内部的细胞膜染色

将小鼠ES细胞在涂有明胶的玻璃底皿中培养4天,并将获得的细胞群,用PlasMem Bright Green(200倍稀释)染色15分钟,并使用共聚焦显微镜(Zeiss:LSM710)中观察。

结果,细胞群内部的细胞膜也可以用PlasMem Bright Green可视化观察。

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<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm.

*此实验例由庆应义塾大学医学院的石津 大嗣老师提供。

实验例:轴突神经细胞形态和线粒体定位的观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞,分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

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(比例尺:200 μm)

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体(MitoBright LT Red【红】):Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核(Hoechst33342【蓝】):Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

(1)诱导神经芽细胞(SH-SY5Y)为神经细胞。

(2)去除上清液,添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342(终浓度:5μg/ml)以及MitoBright LT Red(终浓度0.1 μmol/l)。

(3)培养30分钟。

(4)去除上清液,添加HBSS。

(5)使用荧光显微镜观察。

实验例:神经芽细胞(SH-SY5Y)中的线粒体检测

分别用PlasMem Bright Green (绿)、MitoBright LT Red (红)、Hoechst 33342 (蓝) 对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y进行染色,用共聚焦显微镜获得3D图像。可以鲜明的观察到细胞形态以及线粒体和细胞核的情况。

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(比例尺:10 μm)

<观察条件>

细胞膜(PlasMem Bright Green【绿】):Ex.488 nm/Em.500-560 nm。

线粒体(MitoBright LT Red【红】):Ex.561 nm/Em.560-620 nm。

细胞核(Hoechst33342【蓝】):Ex.405 nm/Em.400-450 nm。

<实验步骤>

(1)使用HBSS清洗SH-SY5Y细胞。

(2)添加使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green、Hoechst 33342(终浓度:5μg/ml)以及MitoBright LT Red(终浓度0.1 μmol/l)。

(3)培养10分钟。

(4)使用HBSS清洗细胞2次

(5)使用荧光显微镜观察。

  实验例:脑源性小鼠神经母细胞瘤的延时成像

使用培养基中稀释200倍的PlasMem Bright Green,染色N1E-115细胞30分钟并进行延时成像时,可以清楚地观察到神经细胞内树突和突起中的变化。

 

<培养条件>

・细胞:N1E-115细胞(脑源性小鼠神经母细胞瘤)

・培养基:5%FBS,1%含谷氨酰胺的D-MEM(低葡萄糖)

・培养设备:35 mm 玻璃底皿

<拍摄条件>

・成像设备:带培养箱的荧光显微镜

・拍摄时间:1小时,拍摄间隔:2分钟

*此实验例由芝浦理工大学系统科学与工程学院的涌澤 充 様、福井 浩二教授提供。


 实验例:与外泌体共染色

 

向PlasMem Bright Green染色的HeLa细胞中加入外泌体膜荧光染色试剂盒(ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red)染色的外泌体。可以观察到,由活细胞的细胞膜产生的内体(Endosome)中的外泌体,以及没有摄入外泌体的内体。另外,即使在固定染色的细胞之后,也可以像活细胞一样使存在于细胞膜来源的囊泡(内体)中的外泌体可视化。

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(比例尺:5 μm)

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(比例尺:10 μm)

<观察条件>

细胞膜 (PlasMem Bright Green, 绿)  Ex. 488 nm / Em. 500-560 nm。

外泌体 (ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red, 红)  Ex. 561 nm / Em. 560-620 nm。

 

<实验步骤>

(1)接种Hela细胞,24小时培养。

(2)去除上清液,添加使用培养基稀释的PlasMem Bright Green(100倍稀释)。

(3)培养10分钟。

(4)使用HBSS清洗细胞3次。

(5)添加175 μlMEM培养基与ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Red染色过的Exosome溶液25 μl。

(6)在CO2培养箱中过夜培养。

(固定情况下)细胞使用HBSS清洗2次后添加4%PFA,培养15分钟后,使用HBSS清洗细胞2次。

(7)使用共聚焦显微镜观察

 

 实验例:烟草BY2细胞的膜染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色烟草BY2细胞5分钟,清洗后每5分钟拍摄一次并进行长时间观察。实验中可以清晰的观察到BY2细胞膜的荧光以及细胞分裂所形成的细胞板。

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

・转盘式共聚焦显微镜观察

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

・图中的时间按照00:00 (小时:分钟)表示

 

 实验例:拟南芥根的染色

用PlasMemBright Green (200倍稀释)染色拟南芥根15分钟,采用Z轴景深连续拍照的方法进行荧光观察,可以清晰的观察到立体的细胞膜分布情况。

 

(数据由名古屋大学栗原大辅老师友情提供)

<检测条件>

 

・转盘式共聚焦显微镜观察,Z轴摄影

・Ex: 488 nm; Em: 520/35 (502.5-537.5 nm)

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常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞?
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性,否则会操造成没有荧光。

Q2:  是否可以进行动态荧光成像?
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外,长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害,也更容易使荧光染料分解,请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释?
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么?
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后,是否可以马上观察?
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况,请问是什么原因?
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况,可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂,随着时间的推移,通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分,有染色后24 h的照片。

2)荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上,如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

image.png

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产品文献

编号 文献 IF
1 The formation of migrasomes is   initiated by the assembly of sphingomyelin synthase 2 foci at the leading   edge of migrating cells,

Nature Cell Biology,2023 ,25(8):1173-1184.

2023 21

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505 细胞膜染色试剂—红色

PlasMem Bright Red细胞膜染色试剂货号:P505
细胞膜染色试剂—红色
PlasMem Bright Red
商品信息
储存条件:-20度保存,避光防潮
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100 μl
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细胞染色
产品特性
与其他公司产品的比较
细胞膜上的停留时间
实验例
关联产品
常见问题Q&A

产品特性

细胞膜起着分隔细胞内和细胞外的作用,并且与细胞的移动和生长、神经信号的传达等细胞功能密切相关。因此,细胞膜的异常与各种细胞状态异常所造成的疾病(如离子通道病Channelopathy)有很密切的关联,被认为是非常重要的生物标记物之一。

由于操作简便并且可用于活细胞染色,小分子荧光探针是最常用的细胞膜染色方法。但是小分子荧光探针普遍存在细胞内停留时间短、水溶性差的问题。而PlasMem Bright是一种克服了现有小分子荧光探针问题的产品。 用PlasMem Bright观察细胞膜时,可以在染色后的1天以上进行长时间的荧光观察。

与其他公司产品的比较

PlasMem Bright系列产品克服了现有市面上的细胞膜染色试剂的诸多缺点(细胞毒性高、停留时间短、不同实验系的兼容性差)。并且分别有Green/ Red两种产品,方便多重染色时自由选择。

产品名 细胞

毒性

染色后

的清洗

含血清

培养基

停留时间 染色后

的固定

PlasMem Bright 不需要 可使用 24 h 可以(PFA)
S公司 产品P 需要 不可使用 可以
T公司 产品D 需要 可使用 不可以
T公司 产品C 需要 可使用 1.5 h 可以(PFA)

细胞膜上的停留时间

使用各种细胞膜染色试剂进行染色HeLa细胞,经过24 h培养后对各染色试剂的荧光图像进行比较。结果发现,与其他公司的细胞膜染色试剂相比,PlasMem Bright系列产品的染色时间更长,膜上的停留时间也更长。

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实验例

 

实验例:通过悬浮细胞观察内吞作用对温度依赖性的变化

本实验使用ECGreen内吞检测试剂(产品代码:E296)和PlasMem Bright Red染色,对Jurkat细胞内吞时对温度的依赖性变化

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<检测条件>

内体检测(ECGreen, 绿色): Ex. 405 nm / Em. 500 – 560 nm

细胞膜检测 (PlasMem Bright Red,红色): Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm

<实验步骤>

(1)在样品管中加入Jurkat细胞悬液(10%FBS,RPMI)并在4℃或37℃孵育30min。

(2) 使用步骤(1)配置的细胞悬浮液将ECGreen溶液稀释1000倍。

(3) 4℃或37℃孵育30min。

(4) 用HBSS清洗细胞两次。

(5) 加入含有PlasMem Bright Red(100倍稀释)的培养基,悬浮细胞。

(6) 将悬浮液转移到成像板上,并使用共聚焦显微镜观察细胞。

实验例:神经细胞的形态和轴突内线粒体局部观察

由神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分化诱导的神经细胞,分别用PlasMem Bright Red (红)、MitoBright LT Green (绿)、Hoechst 33342 (蓝) 进行染色。可以鲜明的观察到细胞的形状以及轴突内的线粒体。

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 实验例:观察巨噬细胞摄入外泌体

使用MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS (Wako)提取人牙龈组织的间质干细胞(GMSC)产生的外泌体,并使用ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green (货号:EX01)进行染色。然后将其加入由人类外周血单核细胞(PBMC)分化的人类巨噬细胞中,用PlasMem Bright Red对巨噬细胞进行染色。

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(数据由九州大学附属医院 口腔功能修复科 福田隆男老师友情提供)

 

<检测条件>
外泌体(Mem Dye – Green):Ex 488 nm / Em 490 – 540 nm
细胞膜(PlasMem Bright Red): Ex. 561 nm / Em. 560 – 700 nm
细胞核(DAPI):Ex. 345 nm / Em. 455 nm

<实验操作>
1. 将多聚赖氨酸包被载玻片(poly-L-lysine coated slides)放置在24 孔板中进行外周血单个核细胞(PBMC)的分化诱导(7 days)。
2. 根据ExoSparkler Exosome Membrane Labeling Kit-Green的操作说明书对10 µg的外泌体进行染色。
3. 将标记好的外泌体,按照1 µg/mL添加到24孔板中,培养3 h。

4. 用PBS清洗细胞1次。
5. 添加用培养基配置好的PlasMem Bright Red (1/100稀释),在CO2培养箱内静置15 min。
6. 用PBS清洗细胞3次。
7. 用4% PFA,室温下固定15 min。
8. 用PBS清洗细胞3次。
9. 用含DAPI的封片剂 (Invitrogen:ProLong™ Gold Antifade Mountant with DAPI)进行封片。
10. 激光共聚焦显微镜LSM 700 confocal microscope (Carl Zeiss) 观察。

 

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常见问题Q&A

Q1:   是否可以用固定化细胞?
A: 可以用4% 多聚甲醛(PFA)进行固定。

但是请注意不可以改变细胞膜的渗透性,否则会操造成没有荧光。

Q2:  是否可以进行动态荧光成像?
A:可以。   但是请注意将激发光保持在最低水平并提高检测灵敏度。另外,长时间的激发光照射可能会对细胞造成伤害,也更容易使荧光染料分解,请考虑采用时间间隔等方法尽量避免。
Q3:   在配制Working solution的时候是否可以用无血清培养基或Buffer进行稀释?
A: 可以。
Q1:  染色后清洗细胞时建议使用什么?
A: 无血清培养基、PBS、HBSS等各种缓冲液均可以使用。
Q4:   添加Working solution后,是否可以马上观察?
A:添加后马上观察也可以。操作手册上的步骤是加入试剂后培养5 min再观察。
Q5:   细胞膜以外的地方也有被染色的情况,请问是什么原因?
A: 感觉观察到细胞膜以外也被染色的情况,可能有如下两个原因

1) 细胞膜上的试剂,随着时间的推移,通过细胞内吞作用进入细胞内。

请参考本产品网页上“细胞膜上的停留时间”的部分,有染色后24 h的照片。

2)荧光成像时的焦点在底面(细胞底部的接触面)上,如下图A。

荧光成像时的焦点请尽量像下图B那样调整Z轴的高度。

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