细胞通过摄入各种各样的营养物质并在胞内的代谢作用下产生能量。营养物代谢的过程随着细胞外环境、细胞状态、细胞种类的不同亦不尽相同。近年来的研究发现，营养代谢不仅与能量的产生密切相关，还与基因表达等各种各样的细胞调节机制有关。葡萄糖是最重要的一种营养物质，细胞摄取葡萄糖的过程对于研究和理解细胞机能非常重要。细胞摄取葡萄糖的评价方法主要是放射性同位素示踪法。但是由于放射性同位素示踪法操作繁杂，泛用性并不高。另外，还有一种使用2-Deoxy-D-glucose(2-DG)的酶循环法，该方法虽然可以进行孔板检测，但是无法用于荧光显微镜和流式细胞仪观察。因此，最近常用的方法是通过葡萄糖类似物2-NBDG的荧光检测法1)。然而，2-NBDG也有荧光强度弱、灵敏度低的问题，而且被细胞摄取的2-NGDG还有从细胞中向外泄漏的情况出现。同仁化学研究新开发的荧光葡萄糖类似物Glucose Uptake Probe-Blue是一种比2-NBDG灵敏度更高的葡萄糖摄取能力检测试剂。而且使用本试剂盒中包含的Washing and Imaging (WI) Solution可以抑制探针从细胞内泄漏，得到重现性更高的实验数据。

与传统方向相比的优势！ 4大特征

Glucose Uptake Probe-Blue是蓝色荧光染料，可以轻松得与其他颜色的荧光染料共染色。另外，由于采用高亮度的荧光染料，相较于传统方法(2-NBDG)可以在更短时间内进行高灵敏度检测。

① 与其他荧光染料的共染色

可以根据实验需求，选择其他荧光染料与Glucose Uptake Probe进行共染色，一次检测多个指标。下图是用Glucose Uptake Probe Blue与脂肪滴(红色：Lipi-Red 货号LD03)共染色脂肪细胞分化而来的3T3-L1细胞的荧光图像。

<观测条件>

细胞： 3T3-L1

检测条件：

Glucose Uptake Probe-Blue：Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Lipi-Red：Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

② 可用荧光显微镜或流式细胞仪检测

下面是分别使用不含葡萄糖的培养基以及高葡萄糖浓度的培养基培养A549细胞并用Glucose Uptake Probe-Blue进行染色的实验结果。可以观察到高浓度葡萄糖对Glucose Uptake Probe-Blue摄入的抑制作用。结果分别用荧光显微镜和流失细胞仪进行检测。

细胞：A549

检测条件

Glucose Uptake Assay Kit-Blue：Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

③ 快速检测

使用高亮度的Glucose Uptake Probe-Blue，即使使用2-NBDG完全相同的实验步骤，也可以大幅缩短实验时间。

操作的前处理、染色(进入细胞内的过程)的步骤只需要清洗3次，非常简便。

④  减少荧光染料的泄漏

使用试剂盒附带的WI Solution清洗细胞，可以抑制染料进入细胞后的泄漏，得到重现性更高的数据。详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。

与传统法的比较

*以上结果源自A549细胞实验的结果，其他细胞系的向胞外泄露的时间可能不同。

与Glucose Assay Kit的不同点

Glucose Uptake Probe-Green和Glucose Assay Kit-WST(货号:G264)的不同点。

1.Glucose Assay Kit-WST可以定量检测细胞上清液中葡萄糖的消费量。

Glucose Uptake Assay Kit无法定量检测葡萄糖。

2.Glucose Uptake Assay Kit-Green可短时间内检测葡萄糖摄取能力的差值。

Glucose Assay Kit-WST无法在短时间内检测葡萄糖量的变化。

详细的实验数据请参考Glucose Uptake Assay Kit-Green 货号UP02的页面。

实验例1：Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用

HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后，使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：HepG2细胞

使用培养基：MEM (5.5 mmol/l Glucose)

培养条件：5 µmol/l Cytochalasin B / MEM （5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS）, 37℃, 24 h

染色条件：Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM （0 mol/l Glucose）, 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例2：Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进

胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。

荧光显微镜观察

(Scale Bar: 50 μm)

<观测条件>

细胞：mouse adipocyte

使用培养基：DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)

刺激条件：0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min

染色条件：Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min

检测仪器：荧光显微镜；

Glucose Uptake Assay Kit-Blue: Ex = 340-380 nm; Em = 435-485 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Green: Ex = 450-490 nm; Em = 500-550 nm

Glucose Uptake Assay Kit-Red: Ex = 533-557 nm; Em = 570-640 nm

实验例：饥饿培养诱导细胞自噬以及葡萄糖摄取能力的变化

用自噬体染色试剂DAPRed和自噬溶酶体染色试剂DALGreen染色HeLa细胞后，再用不含氨基酸的培养基饥饿培养3小时诱导细胞自噬。通过荧光显微镜观察发现DAPRed和DALGreen的荧光强度增强，证明细胞自噬的发生，另外通过Glucose Uptake Probe-Blue观察到细胞摄取葡萄糖的能力上升。

<检测条件>

Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm

Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm

Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm

Scale bar: 50 μm