实验例1:Cytochalasin B对葡萄糖摄取的抑制作用
HepG2细胞经过葡萄糖转运蛋白抑制剂Cytochalasin B处理后,使用本试剂盒对葡萄糖摄取能力的抑制作用进行高灵敏度观察以及数值化的检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞:HepG2细胞
使用培养基:MEM (5.5 mmol/l Glucose)
培养条件:5 µmol/l Cytochalasin B / MEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS), 37℃, 24 h
染色条件:Glucose Uptake Probe (500倍稀释)/DMEM (0 mol/l Glucose), 37℃, 15 min
检测仪器:荧光显微镜; 滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
荧光酶标仪
<检测条件>
Ex: 488 nm; Em: 520 nm
实验例2:Insulin(胰岛素)对细胞葡萄糖摄取能力的促进
胰岛素对脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力的影响通过本试剂盒进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞:mouse adipocyte
使用培养基:DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
刺激条件:0 or 1 µmol/l Insulin / DMEM (0 mmol/l Glucose , serum free), 37℃, 15 min
染色条件:Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
检测仪器:荧光显微镜; 滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
荧光酶标仪检测
<检测条件>
Ex: 488 nm; Em: 520 nm
※由于脂肪细胞的特性,很难在孔板上均匀分布,所以实验数据会有一些孔间差。
<实验操作>
1.脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中,过夜培养。
2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后,加入不含葡萄糖的培养基(0 or 1 μmol/l Insulin)。
3.在37℃下培养15 min。
4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution, 37℃下培养15 min。
5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后,再次添加WI Solution(4℃)。
6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。
实验例3:前脂肪细胞和细胞脂肪细胞的葡萄糖摄取能力的比较
使用本试剂盒对前脂肪细胞(preadipocyte)和脂肪细胞(adipocyte)的葡萄糖摄取能力进行高灵敏度检测。
荧光显微镜观察
(Scale Bar: 50 μm)
<观测条件>
细胞:preadipocyte, adipocyte
使用培养基:DMEM (5.5 mmol/l Glucose, 10% FBS)
染色条件:Glucose Uptake Probe-Green (500倍稀释) /DMEM (0 mmol/l Glucose, serum free), 37℃, 15 min
检测仪器:荧光显微镜; 滤光片:GFP (Ex: 470 /40 nm; Em: 525 /50 nm)
荧光酶标仪检测
<检测条件>
Ex: 488 nm; Em: 520 nm
※由于脂肪细胞的特性,很难在孔板上均匀分布,所以实验数据会有一些孔间差。
<实验操作>
1.前脂肪细胞和脂肪细胞分别接种到不同的ibidi 96孔板中,过夜培养。
2.用不含葡萄糖的DMEM培养基清洗细胞2次后,加入不含葡萄糖的培养基。
3.在37℃下培养15 min。
4.加入用不含葡萄糖的培养基500倍稀释的Probe solution, 37℃下培养15 min。
5.用预冷至4℃的WI Solution(1x)清洗3次后,再次添加WI Solution(4℃)。
6.分别用荧光显微镜和荧光酶标仪检测。
实验例4:饥饿培养引起的细胞自噬和葡萄糖摄取变化
用自噬体染料DAPRed和自噬溶酶体染料DALGreen染色HeLa细胞后,用不含氨基酸的培养基培养3小时诱导细胞自噬。通过DAPRed和DALGreen的荧光强度增高确认细胞发生了细胞自噬,另外通过使用Glucose Uptake Probe-Blue发现细胞摄取葡萄糖的能力上升。
(Scale Bar: 50 μm)
<检测条件>
荧光显微镜
Blue: Ex = 340-380 nm, Em = 435-485 nm
Green: Ex = 450-490 nm, Em = 500-550 nm
Red: Ex = 533-557 nm, Em = 570-640 nm