Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号:C548

Cell Cycle Assay Solution Deep Red试剂货号:C548
细胞周期检测试剂盒-深红色
Cell Cycle Assay Solution Deep Red
商品信息
储存条件:0-5 ℃
运输条件:常温

特点:

·检测时间短

·固定和不固定都可以

·悬浮细胞和贴壁细胞都可以

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选择数量:

选择规格:
50 tests
价格:
¥1280.00期货(会员请登录查看专享价!)
细胞周期
产品概述
产品特性
实验案例
常见问题Q&A
参考文献

产品概述

  细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义

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产品特性

产品特点:检测时间短

碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。

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实验案例

对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期

用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。

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示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化

阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09)

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常见问题Q&A

Q1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗?
A1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以使用。
Q2:胰酶会影响检测吗?
A2:如果实验中有胰酶残留,会影响检测;

如果回收细胞时使用胰酶,请确保按照方案进行清洁操作,去除残留胰酶。

Q3:需要固定细胞吗?
A3:固定和不固定细胞都可以。
Q4:如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存?
A4:都可以,本公司实际对比案例:

分别在保存固定细胞前后做了染色实验,检测结果没有差异

・将固定细胞冷藏(4℃)后保存1周,根据使用说明书对细胞进行染色。

・根据使用说明书对固定细胞进行染色,将细胞冷藏(4℃)后保存1周。

*冷冻保存细胞的话有可能会沉淀不溶物,所以不推荐冷冻保存。

Q5:用Cell Cycle Assiay  Soluton染色后,为了除去过量的试剂可以清洗细胞吗?
A5:不推荐染色后清洗细胞。

由于洗涤时的离心操作,有可能影响细胞周期解析的实验结果。

Q6:做流式检测时,应该注意哪些方面呢?
A6:流式检测时,需要在合适的条件下进行测检测。

以下列举了一些失败的案例。

1、检测通道选择不合适

例如一般的细胞周期检测都会使用PI(PE)通道,但是我们试剂盒选择PI通道并不能得到最适结果,请参照一下波段选择最适通道:

2、检测时电压过高(或过低)。

当流式检测时电压过高(或过低)时,都无法得到最适结果。

请通过直方图将G0/G1期、S期、G2/M期调整为清晰的测量电压。

3、细胞数量选择不合适

例如流式检测是圈门选择不恰当,会导致结果不好。

分析时请对选择所有细胞。

参考文献

1)細胞(HCAECs)

N. Sasaki, Y. Itakura and M. Toyoda, “Rapamycin promotes endothelial-mesenchymal transition during stress-induced premature senescence through the activation of autophagy”, Cell Commun. Signal, 2020, 18(1), 43

2)細胞(ARPE-19)

T. Yamazaki, H. Suzuki, S. Yamada, K. Ohshio, M. Sugamata, T. Yamada and Y. Morita, “Lactobacillus paracasei KW3110 Suppresses Inflammatory Stress-Induced Premature Cellular Senescence of Human Retinal Pigment Epithelium Cells and Reduces Ocular Disorders in Healthy Humans”, Int J Mol Sci, 2020, 21(14), 5091

2)細胞(MIA PaCa-2)

N. Sasaki, F. Gomi, F. Hasegawa, K. Hirano, M. Fujiwara, M. Toyoda and T. Ishiwata, “Characterization of the metastatic potential of the floating cell component of MIA PaCa-2, a human pancreatic cancer cell line”, Biochem. biophys. res. commun, 2020, 522(4), 881-888

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Cell Cycle Assay Solution Blue试剂货号:C549
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特点:

·检测时间短

·固定和不固定都可以用

·悬浮细胞核贴壁细胞都可以用

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细胞周期
产品概述
产品特性
实验案例
常见问题Q&A

产品概述

细胞周期的调控系统与细胞增殖密切相关。一个细胞产生两个子细胞的细胞分裂是细胞周期的一部分。细胞周期可以通过流式细胞术测量细胞DNA染色,然后分析染色细胞核在细胞周期阶段的比例来分析。细胞周期分为两个主要阶段:间期和有丝分裂(M)期。间期由G1期(发生在细胞分裂之前的DNA合成准备)、S期(DNA合成和复制)和G2期(具有重复染色体的单个细胞)组成。M期包括有丝分裂和胞质分裂。细胞周期的进展受细胞周期蛋白和细胞周期蛋白依赖性激酶的调控。分析细胞周期检查点的作用机制,对确定抗癌药物及其他药物的作用具有重要意义

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产品特性

产品特点:检测时间短

碘化丙啶(PI)通常用于使用流式细胞仪进行细胞周期分析。与这种分析方法相比,深红色细胞周期测定溶液具有良好的膜渗透性,并使用对DNA具有高特异性的染料,因此仅需将试剂添加到细胞悬液中就可以分析细胞周期。此外,深红色细胞周期测定解决方案中还提供了633 nm激光器,使您可以同时使用高度通用的488 nm激光器。

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实验案例

对比实验:准确的判段活细胞的细胞周期

用细胞周期流式检测试剂(蓝色和深红色)染色的活CHO细胞,同时使用广泛应用的PI染色产品和同仁已有的细胞周期检测试剂盒,进行了类似的实验。结果,通过细胞周期流式检测试剂获得的结果与PI染色结果相同(如下所示)。与四种不同的产品相比,我们的产品在活细胞中获得了清晰的直方图峰。

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示例:抗癌剂引起的细胞功能的变化

阿霉素(DOX)在细胞周期的G2 / M期抑制细胞增殖,并诱导细胞衰老。将DOX加入A549细胞后,G2 / M期的峰值增高(Cell Cycle Assay Solution Deep Red、Blue;C548\C549),诱导细胞衰老(Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal;SG03)和线粒体膜电位发生变化(JC-1 MitoMP Detection Kit;MT09)

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常见问题Q&A

Q1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以检测吗?
A1:悬浮细胞和贴壁细胞都可以使用。
Q2:胰酶会影响检测吗?
A2:如果实验中有胰酶残留,会影响检测;

如果回收细胞时使用胰酶,请确保按照方案进行清洁操作,去除残留胰酶。

Q3:需要固定细胞吗?
A3:固定和不固定细胞都可以。
Q4:如果需要对要检测的固定细胞进行保存,是应该染色前保存还是染色后保存?
A4:都可以,本公司实际对比案例:

分别在保存固定细胞前后做了染色实验,检测结果没有差异

・将固定细胞冷藏(4℃)后保存1周,根据使用说明书对细胞进行染色。

・根据使用说明书对固定细胞进行染色,将细胞冷藏(4℃)后保存1周。

*冷冻保存细胞的话有可能会沉淀不溶物,所以不推荐冷冻保存。

Q5:用Cell Cycle Assiay  Soluton染色后,为了除去过量的试剂可以清洗细胞吗?
A5:不推荐染色后清洗细胞。

由于洗涤时的离心操作,有可能影响细胞周期解析的实验结果。

Q6:做流式检测时,应该注意哪些方面呢?
A6:流式检测时,需要在合适的条件下进行测检测。

以下列举了一些失败的案例。

1、检测通道选择不合适

例如一般的细胞周期检测都会使用PI(PE)通道,但是我们试剂盒选择PI通道并不能得到最适结果,请参照一下波段选择最适通道:

2、检测时电压过高(或过低)。

当流式检测时电压过高(或过低)时,都无法得到最适结果。

请通过直方图将G0/G1期、S期、G2/M期调整为清晰的测量电压。

3、细胞数量选择不合适

例如流式检测是圈门选择不恰当,会导致结果不好。

分析时请对选择所有细胞。

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商品信息
储存条件:0-5度保存,避光
运输条件:室温

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·日本原装进口试剂盒

·固定和不固定都可使用

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细胞周期
活动进行中
试剂盒内含
产品概述
所需的设备和材料
溶液制备
基本操作
常见问题Q&A

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产品概述

  DNA含量分析在流式细胞检测中,占有相当大的比例。通过这种方法,研究者可以进行抗癌药物的毒性评估,并对恶性肿瘤细胞的预后效果及进展程度进行分析。在细胞周期检测中,DNA含量也同样作为重要的分析手段而被广泛应用。通过细胞DNA含量的测定,可计算各细胞周期的百分率,也可通过DNA片段化检测、DNA双染标记等方法检测细胞凋亡。

Cell Cycle Assay Kit-PI/RNase Staining试剂盒,可快速完成细胞周期的分析,操作简便。本产品使用碘化丙啶 (PI) 作为DNA荧光染料,通过流式细胞术得到细胞周期中G0/G1,G2和S期细胞的比例。

所需的设备和材料

– 流式细胞仪(碘化丙啶PI:λex=535 nm,λem=617 nm)

– 37℃培养箱

– PBS缓冲液

– 1.5 ml微量管

– 100-1000 μl、20-200 μl、2-20 μl移液器

溶液制备

本产品在固定细胞及不细胞固定的情况下皆可使用。

配置Working solution (1 sample)

取500 μl Assay Buffer 后,分别加入25 μl PI Solution和2.5 μl RNase Solution。

*工作液易遇光分解,请在使用前立即配置并用铝箔纸包裹避光保存。

配置好的工作液1天内用完。

基本操作

非固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中,在1,000×g离心3 min b)

3. 去除上清液后加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000×g离心3 min。

4. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

5. 在4℃避光培养30 min。

6. 涡旋振荡使细胞分散,在37℃避光培养30 min。

7. 涡旋振荡使细胞分散,用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块 c)

8. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。

c) 样品处理后,剩余部分无法继续保存并使用。

固定细胞

1. 将细胞密度调整为1-5×106cells/ml a)

2. 取1 ml的细胞悬液加入到1.5 ml微型管中,在1,000×g 离心3 min。

3. 去除上清,并在细胞团中加入1 ml的-20℃保存的70%乙醇。

4. 涡旋振荡使细胞分散,在4℃下静置2 h b)

5. 在1,000×g 离心3 min后,去除乙醇 c)

6. 加入1 ml PBS缓冲液清洗细胞,在1,000×g 离心3 min。

7. 去除上清液后加入0.5 ml Working Solution。

8. 涡旋振荡使细胞分散,在37℃避光培养30 min。

9. 涡旋振荡使细胞分散,在4℃避光培养30 min。

10. 涡旋振荡使细胞分散,用尼龙筛网过滤,以去除样品中的细胞团块 d)

11. 用流式细胞仪检测。

a) 贴壁细胞用胰蛋白酶-EDTA消化细胞后,用PBS洗涤并离心收集细胞。

b) 根据不同的细胞种类,需适当调整固定时间。

c) 根据不同的细胞种类,需适当调整转速与离心时间。

d) 样品处理后可以在4℃以下保存并继续使用,但是保存时间长短与细胞种类有关。

常见问题Q&A

Q1、C543用于分散细胞团聚的筛网的品牌、型号信息?
A1:FALCON 5mL Polystyrene Round-Bottom Tube with Cell-Strainer Cap 型号:352235
Q2:实验需要在37度、4度环境中分别培养30min,这个先后顺序对实验结果有影响吗?
A2:从做出的实验结果来看,没有影响。可以自由选择。
Q3:流式管作用是什么?
A3:检测时必须将细胞悬液放入流式管中,流式管的最上方有滤膜,这层滤膜的作用是把细胞打散,使其不团聚,也方便流式仪器吸取细胞的时候更容易)

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