Glutamate Assay Kit-WST试剂盒货号:G269 谷氨酸的定量检测试剂盒

Glutamate Assay Kit-WST
商品信息
储存条件:0-5度保存,避光,防潮
运输条件:室温

特点:

● 享有显色底物WST专利

● 用于L-Glutamate的定量

产品文献
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1set
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试剂盒内含
产品概述
原理
操作步骤
实验例
常见问题Q&A
参考文献

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Glutamine Assay Kit-WST    谷氨酰胺的定量检测

NO.3.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽定量

NO.4.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.5.    Mito-FerroGreen    铁离子荧光探针

 

试剂盒内含

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产品概述

谷氨酸不仅用于蛋白质和谷胱甘肽的生物合成,而且还作为神经递质发挥重要作用,谷氨酸过多被认为是引起神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病的原因。根据文献报道,胱氨酸/谷氨酸的转运蛋白(xCT)具有吸收胱氨酸放出谷氨酸的功能,而抑制xCT会诱导细胞发生铁依赖性的死亡—铁死亡,近年来针对xCT的癌症研究越来越多。

Glutamate Assay Kit-WST是谷氨酸的定量检测试剂盒。细胞培养基中或细胞内的谷氨酸都可以通过WST的还原反应进行定量,谷氨酸定量的最低浓度为5 μmol/l。此外,本试剂盒还可以使用96孔板进行多样品批量检测。

原理

       本试剂盒通过WST的还原反应对细胞和培养基中的谷氨酸进行定量。此外,本试剂盒还包含谷氨酸标准溶液,可用于通过制作标准曲线来定量样品中谷氨酸的浓度。

 

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操作步骤

 只需将细胞培养上清液或组织/细胞裂解溶液转移到孔板中,加入试剂后孵育即可。

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实验例

标准曲线的实验例:

样品中的谷氨酸浓度可通过使用该试剂盒的谷氨酸标准溶液制作标准曲线来确定。如果谷氨酸浓度为0.5 mmol/l或更高,则可以通过稀释样品进行检测。

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谷氨酰胺和谷氨酸的检测实验例:

将A549细胞接种在6孔板中,用Glutamine Assay Kit-WST和Glutamate Assay Kit-WST分别检测细胞培养上清液中谷氨酰胺和谷氨酸浓度随培养时间的变化。

结果,培养基中的谷氨酰胺浓度随培养时间增加而降低,而谷氨酸浓度则升高。

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铁死亡研究中谷氨酸和谷胱甘肽的检测实验例:

据报道通过弹性蛋白,抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)造成铁依赖性的细胞死亡,即细胞铁死亡。在通过弹性蛋白处理后的A549细胞中,确认谷氨酸的释放量和细胞内谷胱甘肽的量。结果显示,通过弹性蛋白处理的细胞中谷氨酸释放的量减少,抑制胱氨酸的摄取,从而导致谷胱甘肽的量减少。

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Sulfasalazine (SSZ) 引起的细胞内代谢变化实验例:

将已知会抑制胱氨酸/谷氨酸转运体(xCT)的Sulfasalazine(SSZ)加入到A549细胞后,确认谷氨酸释放量、细胞内ATP、α-酮戊二酸(α-KG)、谷胱甘肽(GSH)以及ROS的变化。

结果显示,SSZ加入后细胞内ATP、谷胱甘肽(GSH)和谷氨酸释放量减少,细胞内α-酮戊二酸和ROS增加。1612749142364629.png

<使用产品>

· 细胞内GSH:GSSG/GSH Quantification Kit II(货号:G263)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ROS:ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-(货号:R252)⬅电脑浏览点击品名(手机浏览点击此处)

· 细胞内ATP:ATP Assay Kit-Luminescence(货号:A550)

· 细胞内α-KG:α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric(货号:K261)

<实验条件>

细胞:A549细胞 (1 x 106 cells)  药物处理时间:48 h

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1622087244529743.png1622087268638819.png

参考文献) Shogo Okazaki et al.,”Glutaminolysis-related genes determine sensitivity to xCT-targeted therapy in head and neck squamous cell carcinoma”.Cancer Sci.,2019,doi:10.1111/cas.14182.

常见问题Q&A

Q1:一个试剂盒可以检测样品的数量是多少?
A1:制备标准曲线和样品(n=3),可以检测的样品数量如下所示。

100 tests

样品数量(n=3) 24个样品(参照下图)

谷氨酸标准溶液和样品的96孔板排列示意图(n=3)

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Q2:配制后的Working solution可以保存多久?
A2:Working solution无法保存,需要现配现用。此外光会影响Working solution的稳定性,所以配制后请避光。

※Working solution配制后,避光室温条件下4 h稳定。当暴露于光线下,溶液的颜色会变成褐色。

Q3:是否可以定量D-Glutamate?
A3:该试剂盒是用于L-Glutamate定量,无法定量D-Glutamate。
Q4:是否可以检测含有还原性物质的样品?
A4:如果样品中含有还原性的物质,则WST染料也会发生显色,此时无法准确定量谷氨酸浓度。实验中如遇到以上情况,可以准备药物对照(不含细胞含药物的培养基+试剂)。
Q5:待测样品可以保存吗?
A5:我们确认过细胞培养上清液样品可以-20°C保存1个月。

细胞裂解样品也可以-20°C保存1个月。 但是,在保存之前请使用试剂盒中的Filtration Tube进行脱蛋白处理。

Q6:为什么我的样品孔没有显色?
A6:样品中的谷氨酸浓度可能低于检测限(5 µmol/l),谷氨酸浓度低于5 µmol/l的样品无法用该试剂盒检测。

如果待测样品被稀释,则稀释样品中含有的谷氨酸浓度可能低于5 µmol/l。请减少稀释比例,从而将检测样品的谷氨酸浓度调整到最低检测限以上。

Q7:是否可以使用450 nm以外波长的滤光片进行检测?
A7:也可以使用490 nm的滤光片。但是,吸光度会低于在450nm处的吸光度。(见下图)

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参考文献

1)Cobler,L.et al.,”xCT inhibition sensitizes tumors to γ-radiation via glutathione reduction”,Oncotarget,2018,9,32280-32297.

2)Tobias,M.et al.,”Role of GPX4 in ferroptosis and its pharmacological implication”,Free Radical Bioglogy and Medicine,2019,133,144-152.

 

3)K. Danchana, H. Iwasaki, K. Ochiai, H. Namba, T. Kaneta, “Determination of glutamate using paper-based microfluidic devices with colorimetric detection for food samples”, Microchem. J., 2022, doi:10.1016/j.microc.2022.107513.

4)Z. Xie, T. Kawasaki, H. Zhou, D. Okuzaki, N. Okada and M. Tachbana, “Targeting GGT1 Eliminates the Tumor-Promoting Effect and Enhanced Immunosuppressive Function of Myeloid-Derived Suppressor Cells Caused by G-CSF”, Front. Pharmacol., 2022, doi:10.3389/fphar.2022.873792.

铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号:M489 铁死亡荧光试剂 (Fe2+荧光法)

铁离子荧光探针—Mito-FerroGreen货号:M489
铁死亡荧光试剂 (Fe2+荧光法)
Mito-FerroGreen
商品信息
储存条件:-20度保存,避光
运输条件:室温

特点:

● 定位线粒体

● 更深层次铁离子探究

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选择规格:
50μg*2
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铁死亡检测方案
产品概述
测定原理
产品特点
实验例
参考文献
常见问题Q&A
规格性状

产品概述

研究证实铁是生物体内量最多的过渡金属元素。其参与多种生理活动。近几年,细胞内的游离铁离子由于具有很高的反应性,和细胞损伤、死亡有一定的关联而得到了越来越多的关注。在细胞内游离铁离子以稳定的Fe2+和 Fe3+形式存在。从细胞内的还原环境,金属转运体及Fe2+的水溶性考虑,认为揭示细胞内Fe2+的行为比Fe3+更重要。Mito-FerroGreen是一种新型荧光探针,用于检测线粒体 (铁硫簇和血红素蛋白的合成场所) 内亚铁离子Fe2+。

该产品已在岐阜药科大学药物化学实验室的 永澤秀子 和 平山祐 博士的指导下开发。Mito-FerroGreen和Fe2+反应后的荧光强度上升不可逆,与Fluo-3(货号:F019)这类可以实时监测钙离子的荧光探针有所不同。

测定原理

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产品特点

铁离子检测试剂的选择

可以根据自己的实验方法和实验仪器选择检测试剂

 

FerroOrange Mito-FerroGreen
细胞内分布 细胞内 线粒体
荧光特性 λex : 543 nm、λem : 580 nm λex : 505 nm、λem : 535 nm
检测仪器 荧光显微镜 荧光显微镜 (FITC、GFP)
(滤镜)
检测对象 活细胞 活细胞
染色次数 24 μg可染色35 mm dish 17块板 50 μg可染色35 mm dish 5块板
(终浓度 1 μmol/l時) (终浓度 5 μmol/l時)

实验例

1.线粒体定位

为了确认Mito-FerroGreen的是否特异性地在线粒体内定位,与线粒体染色试剂(MitoBright Deep Red※)一同进行染色,实验结果证实了Mito-FerroGreen选择性地染色在线粒体内。

向HeLa细胞中添加5μmol/ l的Mito-FerroGreen和200 nmol/l的线粒体染色探针MitoBright Deep Red,并在CO2培养箱中培养30分钟,然后添加100μmol/ l的硫酸铁铵(II),并将混合后的细胞溶液在CO2培养箱中培养1小时后通过观察荧光。

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Mito-FerroGreen

激发波长:488 nm

发射波长:500-565 nm

MitoBright Deep Red

激发波长:640 nm

发射波长:656-700 nm

2.线粒体内的铁离子荧光成像

在含有血清的MEM培养基中接种HeLa细胞,并加入Mito-FerroGreen,通过荧光检测HeLa细胞众线粒体内的二价铁(左图)。而在添加了铁离子的HeLa细胞中,观察到了Mito-FerroGreen的荧光明显增强(中间图)。在添加了铁螯合剂的细胞中,几乎未观察到Mito-FerroGreen的荧光(右图)。 以这种方式,证实了线粒体中铁含量的差异和荧光强度的差异是成相关性的。

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3.对二价铁离子的高度选择性和高信号

向1ml 50mmol/l HEPES Buffer(pH7.4)中加入2μl 1mol/l Mito-FroGreen、2μl 10mmol/l各种金属以及20μl 1mg/ml酯化酶,在室温下反应1小时后测定荧光强度。

激发波长:500 nm

发射波长:535 nm

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4.适用于通用滤光片

Mito-FerroGreen的激发波长为488nm,最大激发波长可达505nm。

向3ml 50 mmol/l HEPES Buffer (pH7.4) 中加入 6μl 1mol/l Mito-FroGreen、6μl 10mmol/l硫酸铵铁(Ⅱ)以及20μl 1mg/ml酯化酶。在37℃下反应1小时后检测荧光强度。

激发波长:500 nm

发射波长:535 nm

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参考文献

1) T. Hirayama,  S. Kadota, M. Niwa  and  H. Nagasawa, “A mitochondria-targeted fluorescent probe for selective detection of mitochondrial labile Fe(II)”, Metallomics., 2018, DOI: 10.1039/C8MT00049B

2) T. Issitt, E. Bosseboeuf, N. Winter, N. Dufton, G. Gestri, V. Senatore, A. Chikh, A. Randi, C. Raimondi, “Neuropilin-1 controls endothelial homeostasis by regulating mitochondrial function and iron-dependent oxidative stress via ABCB8”, iScience., 2018,DOI: 10.1016/j.isci.2018.12.005 .

3) E. E. Mon, F. Y. Wei, R. N. R. Ahmad, T. Yamamoto, T. Moroishi and K. Tomizawa, “Regulation of mitochondrial iron homeostasis by siderofexin 2 “, J Physiol Sci., 2018,doi:10.1007/s12576-018-0652-2.

4) M. Fujimaki, N. Furuya, S. Saiki, T. Amo, Y. Imamichi and N. Hattori, “Iron supply via NCOA4-mediated ferritin degradation maintains mitochondrial functions”, Mol. Cell. Biol.., 2019,doi: 10.1128/MCB.00010-19.

5) K. Tomita, M. Fukumoto, K. Itoh, Y. Kuwahara, K. Igarashi, T. Nagasawa, M. Suzuki, A. Kurimasa and T. Sato, “MiR-7-5p is a key factor that controls radioresistance via intracellular Fe2+ content in clinically relevant radioresistant cells.”, Biochem Biophys Res Commun.., 2019,doi: 10.1016/j.bbrc.2019.08.117.

6) Y. Wang and M. Tang, “PM2.5 induces ferroptosis in human endothelial cells through iron overload and redox imbalance”, Environ. Pollut., 2019, 264, doi: 10.1016/j.envpol.2019.07.105.

7) KF. Yambire, C. Rostosky, T. Watanabe, D. Pacheu-Grau, S. Torres-Odio,A. Sanchez-Guerrero,O. Senderovich, EG. Meyron-Holtz,I.Milosevic, J. Frahm, AP. West and N. Raimundo, “Impaired lysosomal acidification triggers iron deficiency and inflammation in vivo.”, Elife, 2019, 3, (8), doi:10.7554/eLife.51031.

8) H. Nishizawa, M. Matsumoto, T. Shindo, D. Saigusa, H. Kato, K. Suzuki, M. Sato, Y. Ishii, H. Shimokawa and K. Igarashi, “Ferroptosis is controlled by the coordinated transcriptional regulation of glutathione and labile iron metabolism by the transcription factor BACH1″,  J. Biol. Chem.,  2019,doi: 10.1074/jbc.RA119.009548.

9)Y. akashima, A. Hayano and B. Yamanaka, Metabolome analysis reveals excessive glycolysis via PI3K/AKT/mTOR and RAS/MAPK signaling in methotrexate-resistant primary CNS lymphoma-derived cells.”, Clin. Cancer Res., 2020, DOI:10.1158/1078-0432.

常见问题Q&A

Q1:是否可以对酵母进行染色吗?
A1:我们公司有酵母染色的实验例,染色的具体实验步骤请联系我们公司的销售人员。
Q2:推荐使用的滤光片波长是多少?
A2:检测时推荐的滤光片如下:

激发波长:450~500 nm

发射波长:515~550 nm

规格性状

性状:本品溶于乙腈、甲醇、二甲醇。

纯度(HPLC):90.0%以上

荧光光谱:适合测试

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291 Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒

Iron Assay Kit -Colorimetric-试剂盒货号:I291
Iron Assay Kit -Colorimetric-组织铁离子定量试剂盒
Iron Assay Kit -Colorimetric-
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

● 适合组织检测

● 配有标准品,可定量二价、三价铁含量

● 吸光度法

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产品文献
选择规格:
50tests
现货
 
组织/细胞检测
试剂盒配套计算器(点击查看下载)
活动进行中
试剂盒内含
产品概述
原理
金属离子选择性
加标回收实验
实验例
参考文献

活动进行中

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凑单关联产品TOP5

NO.1.    FerroOrange    细胞亚铁离子检测   

NO.2.    Liperfluo    细胞脂质过氧化物检测

NO.3.    Cell Counting Kit-8    细胞增殖毒性检测

NO.4.    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-    ROS检测

NO.5.    GSSG/GSH Quantification Kit II    氧化型/还原型谷胱甘肽

 

试剂盒内含

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产品概述

铁是生物体内最重要的金属元素之一,生物体内铁元素的含量虽少,但有着重要的生理作用。近年来,随着铁死亡概念的提出,细胞内铁离子的代谢过程的研究逐渐成为了研究热点。同仁化学研究所开发的 Iron Assay Kit-Colorimetric-试剂盒 是一套操作简便的比色法铁离子检测试剂盒。与其他市面上的检测试剂盒 相比 ,可以在更短的时间内进行快速检测。通过比较组织裂解液中的铁离子探针 3-(2-Pyridyl)-5,6-bis(5-sulfo-2-furyl)-1,2,4-triazine, disodium salt的 吸光度与还原成二价铁离子的三价铁标准品的吸光度,即可确定组织样品中的二价铁含量。同时,还可以通过试剂盒中的还原剂将样品中的三价铁还原成二价铁,以确定总铁含量,进而计算出样品中三价铁的含量。

原理

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金属离子选择性

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加标回收实验

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实验例

组织样品中的Fe2+和 Fe3+的检测

1. 称量 100 mg肝脏组织 。

2. 加入 1 ml冷 PBS,移液器吹打 20次, Vortex振荡 10 s 14,000 RPM离心 4 min,去除上清 。

3. 将样品转移至研钵,加入液氮充分研磨成粉末后,加入 1.3 ml Assay Buffer,回收至微管中。

4. 将含有样品的微管置于超声波水浴中 5 min。(为防止样品温度上升,每 1 min间隔置于冰浴上 20 s)。

5. 16,000 g离心 10 min,除去不溶物。

6. 取 1300 μl上清液,每管分别加入 400 μl上清液,制成二价铁样品、总铁样品、样品空白。

7. Standard管 中加入 Reducer solution。 (参考图 2 H管 30 μl、 G~C管 20 μl、 B管 40 μl、 A管 20 μl)。

二价品样品管中加入 20 μl Assay Buffer。

总铁样品管中加入 20 μl Reducer solution。

样品空白管中加入 20 μl Assay Buffer。

将所有的 Standard管、样品管、样品空白管 37 培养 15 min。

8. 参考表 1和表 2,加入至 96孔板中 37 培养 60 min,检测 593 nm处的吸光度。

9. 将酶标仪数据拷贝至 “Iron Assay Kit – Excel表 ”,自动计算 出二价铁和三价铁浓度。

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参考文献

No.       检测对象                                           引用 (含链接) 影响因子
1 组织

(小鼠肿瘤组织)

H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X. Li, “Self-assembled FeS-based cascade   bioreactor with enhanced tumor penetration and synergistic treatments to trigger   robust cancer immunotherapy”, Acta Pharm. Sin. B2021,   doi:10.1016/j.apsb.2021.05.005. 7.097
2 细胞

Kasumi-1

(人急性白血病细胞)

L.   Zhang, Y. Song, K. Cao, Y. Du, M. Han, Z. Shi, F. Yan and S. Feng, “Hepcidin-Based   Nanocomposites for Enhanced Cancer Immunotherapy by Modulating Iron   Export-Mediated N6-Methyladenosine RNA Transcript”, Adv. Funct.   Mater.2021, doi: 10.1002/adfm.202107195. 18.808
3 细胞

(II型肺泡细胞)

H.   Cheng, D. Feng, X. Li, L. Gao, S. Tang, W. Liu, X. Wu, S. Yue, C. Li, Z. Luo,   “Iron   deposition-induced ferroptosis in alveolar type II cells promotes the   development of pulmonary fibrosis”, Biochim. Biophys. Acta,   Mol. Basis Dis.2021, doi: 10.1016/j.bbadis.2021.166204. 5.187
4 细胞

MV4-11; Kasumi-1; NB4

(白血病细胞)

Y.   Du, M. Han, K. Cao, Q. Li, J. Pang, L. Dou, S. Liu, Z. Shi, F. Yan and S.   Feng, “Gold   Nanorods Exhibit Intrinsic Therapeutic Activity via Controlling N6‑Methyladenosine   Based Epitranscriptomics in Acute Myeloid   Leukemia”, ACS Nano2021, doi:   10.1021/acsnano.1c05547. 15.881
5 组织

(人软骨组织)

H.   Ren, J. Yong, Q. Yang, Z. Yang, Z. Liu, Y. Xu, H. Wang, X. Jiang, W. Miao, X.   Li, “Contribution   of ferroptosis and GPX4’s dual functions to osteoarthritis progression”,   EBioMedicine2022, doi: 10.1016/j.ebiom.2022.103847. 8.143
6 组织

(小鼠肺、肝脏、肾脏)

T.   Wu, X. Wang, M. Chen, X. Zhang, J. Zhang, J. Cheng, L. Kong, M. Tang,”Respiratory exposure to graphene   quantum dots causes fibrotic effects on lung, liver and kidney of mice”,   Food Chem. Toxicol.2022, doi: 10.1016/j.fct.2022.112971. 6.023
7 组织

(小鼠海马组织)

T.   Wu, X. Wang, J. Cheng, X. Liang, Y. Li, M. Chen, L. Kong and M. Tang, “Nitrogen‑doped   graphene quantum dots induce ferroptosis through disrupting calcium   homeostasis in microglia”, Part. Fibre Toxicol.2022,   doi: 10.1186/s12989-022-00464-z. 9.4
8 组织

(宫颈管粘膜)

T.   Wang, M. Gong, Y. Cao, C. Zhao, Y. Lu, Y. Zhou, S. Yao, J. Chen, C. Zhao and   R. Ju, “Persistent   ferroptosis promotes cervical squamous intraepithelial lesion development and   oncogenesis by regulating KRAS expression in patients with high risk-HPV   infection”, 2022Cell Death Discovery, doi:   10.1038/s41420-022-01013-5. 5.241
9 组织

(小鼠肺组织)

M.   Li, L. Fu, B. Lv, Y. Xiang, H. Xiang, D. Xu, H. Zhao, “Arsenic   induces ferroptosis and acute lung injury through mtROS-mediated   mitochondria-associated endoplasmic reticulum membrane dysfunction”,   Ecotoxicol. Environ. Saf.2022, doi: 10.1016/j.ecoenv.2022.113595. 6.291
10 细胞

BEL-7402, SMMC-7721

(人肝癌细胞系)

L.   Guan, F. Wang, M. Wang, S. Han, Z. Cui, S. Xi, H. Xu and S. Li, “Downregulation of HULC   Induces Ferroptosis in Hepatocellular Carcinoma via Targeting of the   miR-3200-5p/ATF4 Axis”, 2022Oxid. Med. Cell.   Longevity, doi: 10.1155/2022/9613095. 6.543
11 组织

(小鼠肺部组织)

Z.   Zeng, H. Huang, J. Zhang, Y. Liu, W. Zhong, W. Chen, Y. Lu, Y. Qiao, H. Zhao,   X. Meng, F. Zou, S. Cai, H. Dong, “HDM induce airway   epithelial cell ferroptosis and promote inflammation by activating ferritinophagy in asthma”,   FASEB J.2022, doi: 10.1096/fj.202101977RR. 5.191
12 组织

(大豆叶片)

Y.   Cheng, H. Zhang, W. Zhu, Q. Li, R. Meng, K. Yang, Z. Guo, Y. Zhai, R. Ji, H.   Peng, D. Dou, M. Jing, “Ferroptosis   induced by the biocontrol agent Pythium oligandrum enhances   soybean resistance to Phytophthora sojae”,   Environ. Microbiol., doi: 10.1111/1462-2920.16248. 5.476
13 组织

(小鼠睾丸组织)

Y.   Zhao, H. Zhang, J. Cui, J. Wang, M. Chen, H. Wang, X. Li, J. Li, “Ferroptosis is   critical for phthalates driving the blood-testis barrier dysfunction via   targeting transferrin receptor”, Redox Biol.2022,   doi: 10.1016/j.redox.2022.102584. 10.787
14 组织

(小鼠结肠组织)

F.   Yang, Y. Chen, Y. Xiao, H. Jiang, Z. Jiang, M. Yang, M. Li, Y. Su, Z. Yan, Y.   Lin, D. Li, “pH-sensitive   Molybdenum (Mo)-based polyoxometalate nanoclusters have therapeutic efficacy   in Inflammatory Bowel disease by counteracting ferroptosis”, Pharmacol.   Res.2023, doi: 10.1016/j.phrs.2023.106645. 10.334
15 组织

(小鼠肺部组织)

W.   Tang, J. Qin, Y. Zhou, W. Wang, F. Teng, J. Liu, L. Yi, J. Cui, X. Zhu, S.   Wang, J. Dong, Y. Wei, “Regulation of   ferroptosis and ACSL4-15LO1 pathway contributed to the anti-asthma effect of   acupuncture”, Int. Immunopharmacol.2023, doi:   10.1016/j.intimp.2022.109670. 5.714
16 组织

(小鼠心脏组织)

H.   Hu, L. Li, H. Zhang, Y. Zhang, Q. Liu, M. Chen, J. Ning, Y. Pang, W. Hu, Y. Niu,   R. Zhang, “Mechanism   of YY1 mediating autophagy dependent ferroptosis in PM2.5 induced cardiac fibrosis”, Chemosphere2023,   doi: 10.1016/j.chemosphere.2023.137749. 8.943
17 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

L.   Kang, D. Wang, T. Shen, X. Liu, B. Dai, D. Zhou, H. Shen, J. Gong, G. Li, Y.   Hu, P. Wang, X. Mi, Y. Zhang, X. Tan, “PDIA4 confers   resistance to ferroptosis via induction of ATF4/SLC7A11 in renal cell   carcinoma”, Cell Death Dis.2023, doi:   10.1038/s41419-023-05719-x. 9.685
18 细胞

(HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞)

C.   Dong, C. Song, Z. He, Q. Song, T. Song, J. Liu, Y. Xiong, X. Su, J. Zhou, X.   Yang, W. Liao, “Protective   efficacy of Schizandrin B on ameliorating   nephrolithiasis via regulating GSK3β/Nrf2 signaling-mediated ferroptosis in vivo   and in vitro”, 2023Int. Immunopharmacol.,   doi:10.1016/j.intimp.2023.110042. 5.714
19 组织

(小鼠肺部组织)

B.   Guo, Z. Zuo, X. Di, Y. Huang, G. Gong, B. Xu, L. Wang, X. Zhang, Z. Liang, Y.   Hou, X. Liu, Z. Hu, “Salidroside   attenuates HALI via IL-17A-mediated ferroptosis of alveolar   epithelial cells by regulating Act1-TRAF6-p38 MAPK pathway”, 2022,   Cell Commun. Signaling, doi: 10.1186/s12964-022-00994-1. 7.525
20 组织

(小鼠睾丸组织)

J.   Ding, B. Lu, L. Liu, Z. Zhong, N. Wang, B. Li, W. Sheng, Q. He, “Guilu-Erxian-Glue   alleviates Tripterygium wilfordii polyglycoside-induced oligoasthenospermia in rats by   resisting ferroptosis via the Keap1/Nrf2/GPX4 signaling pathway”, Pharm.   Biol.2023, doi:10.1080/13880209.2023.2165114. 3.889
21 细胞

(人髓核细胞)

X.   Yang, Y. Chen, J. Guo, J. Li, P. Zhang, H. Yang, K. Rong, T. Zhou, J. Fu, J.   Zhao, “Polydopamine   Nanoparticles Targeting Ferroptosis Mitigate Intervertebral Disc Degeneration   Via Reactive Oxygen Species Depletion, Iron Ions Chelation, and GPX4   Ubiquitination Suppression”, Adv. Sci., 2023, doi:10.1002/advs.202207216. 17.521
22 组织

(小鼠心脏组织)

J.   Pan, W Xiong, A. Zhang, H. Zhang, H. Lin, L. Gao, J. Ke, S. Huang, J. ZHang,   J. Gu, A. Chang, C. Wang, “The   Imbalance of p53–Park7 Signaling Axis Induces Iron Homeostasis Dysfunction in   Doxorubicin-Challenged Cardiomyocytes”, Adv. Sci, 2023,   doi:10.1002/advs.202206007. 17.521
23 细胞

(H9c2, 4T1)

T.   Chen, Y. Qin, Y. Li, Y. Li, J. Luo, L. Fan, M. Feng, Z. Wang and Y. Zhao, “Chiral Polymer Micelles   Alleviate Adriamycin Cardiotoxicity via Iron Chelation and Ferroptosis   Inhibition”, Adv. Funct. Mater., 2023, doi:10.1002/adfm.202300689. 19.923
24 细胞

(乳腺癌细胞)

Z.   ZHu, H. Shen, J. Xu, Z. Fang, G. Wo, Y. Ma, K. Yang, Y. Wang, Q. Yu, J.   Tang., “GATA3   mediates doxorubicin resistance by inhibiting CYB5R2-catalyzed iron reduction   in breast cancer cells”, Drug Resistance Updates, 2023,   doi:10.1016/j.drup.2023.100974. 22.841
25 组织

(the brains of 3 × Tg-AD mice)

Xinlu Li, Jianfeng Chen, Wennuo Feng ,Chao Wang, Minyu Chen, Yifan Li, Jinghong Chen, Xinwei Liu, Qiong Liu, Jing Tian,“Berberine ameliorates iron levels and ferroptosis in the brain of 3 × Tg-AD mice”2023, PHYTOMEDICINE, doi:10.1016/j.phymed.2023.154962

 

7.9
26 组织

(Testicular tissues)

Lipeng Li , Zijie Pei , Ruiting Wu , Yaling Zhang , Yaxian Pang , Huaifang Hu , Wentao Hu , Zihan Geng , Tengfei Feng , Yujie Niu , Guimin Hao , Rong Zhang“FDX1 regulates leydig cell ferroptosis mediates PM2.5-induced testicular dysfunction of mice”,Ecotoxicology and Environmental Safety,2023,doi.org/10.1016/j.ecoenv.2023.115309 6.8
27 细胞(macrophage) Wenlin Yuan , Yuting Yang , Yingming Wei , Xufei Yu , Jiaqi Bao , Jiahui Zhong , Zhongxiu Wang , Lili Chen“Macrophage ferroptosis promotes MMP2/9 overexpression induced by hemin in hemorrhagic plaque”,Thromb Haemost2023,doi.org/10.1016/j.intimp.2023.110916 6.7
28 细胞(HT-22) Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”,Antioxidants2023,doi.org/10.3390/antiox12122097 7.0

DPPP试剂货号:D350 二苯基-1-芘基膦 DPPP

DPPP试剂货号:D350
二苯基-1-芘基膦
DPPP
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储存条件:室温,避光
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分子式:

C28H19P

分子量:

386.42

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氧化应激检测

关联产品

ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-试剂
ROS检测
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒-GSSG/GSH Quantification Kit II
氧化型/还原型谷胱甘肽定量试剂盒
超氧化物歧化酶检测——SOD Assay Kit
超氧化物歧化酶(SOD)检测试剂盒-WST
二价铁离子检测探针—FerroOrange
细胞亚铁离子检测荧光探针
Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测
细胞脂质过氧化物检测试剂盒

DNA损伤定量试剂盒 DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02

DNA损伤定量试剂盒——DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting货号:DK02
DNA损伤定量试剂盒
DNA Damage Quantification Kit -AP Site Counting
商品信息
储存条件:0-5度保存
运输条件:室温

特点:

•可以检测基因组DNA样品的碱基位点数量

•采用方便的比色法检测

•检测范围:40个碱基位点/ 1×105 碱基对DNA

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DNA损伤思维导图
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DNA损伤检测方案
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原理
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DNA损伤丨从实验思路到检测指标  PDF下

指标 关联指标干货参(点击查看) 检测指标(点击查看)
DNA损伤检测
γ-H2AX DNA损伤检测试剂盒- γH2AX(绿、红、深红)
AP位点 DNA损伤检测试剂盒(AP位点法)
核小体 Nucleolus Bright (绿、红)
细胞周期 Cell Cycle Assay Kit – PI/RNase Staining
DNA损伤关联指标 氧化损伤 DMPO
BMPO
TEMP
SOD Assay Kit
DPPH Antioxidant Assay Kit
凋亡 Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit/PI
Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit/PI
Cell Cycle Assay Solution Deep Red/Blue
JC-1 MitoMP Detection Kit
Caspase-3 Assay Kit
铁死亡 Lipid Peroxidation Probe -BDP 581/591 C11
Liperfluo
GSSG/GSH Quantification Kit II
Iron Assay Kit
Mito-FerroGreen
衰老 Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
Cellular Senescence Plate Assay Kit – SPiDER-βGal
SPiDER-βGal
自噬 Mitophagy Detection Kit
DALGreen – Autophagy Detection
DAPGreen – Autophagy Detection
DAPRed – Autophagy Detection

*点击即可跳转至详情页

试剂盒内含

1622430311953692.png

产品概述

DNA的氧化损伤是由于DNA与活性氧 (ROS) 尤其是羟自由基之间的相互作用造成的。由超氧阴离子和过氧化氢通过Fenton反应产生的羟自由基在DNA中产生多重修饰。羟自由基对脱氧核糖基团的氧化攻击将导致DNA释放自由碱基,产生链断裂、各种糖修饰以及单个无碱基位点 (AP位点) 。事实上AP位点是由ROS产生的损伤的主要类型。醛反应性探针 (ARP;N’-氨氧基甲基羰基肼-D-生物素) 特异性地与AP位点的开环上的醛基反应。通过这个反应可以检测到导致醛基形成的DNA修饰。用过量ARP试剂反应后,DNA上的所有AP位点均用生物素做了标签。可以用亲和素-生物素法,用连接到亲和素上的过氧化物酶或碱性磷酸酶做比色法检测来对这些带有生物素标签的AP位点进行计数。DNA损伤定量试剂盒包含用于检测每1×105个碱基对中1-40个AP位点的所有必需溶液。

*本试剂盒仅适用于基因组DNA中无碱基位点 (Abasic Sites)的检测。

原理

DNA损伤在除了复制过程中的DNA聚合酶错误外,保留有机体遗传信息的DNA在体内还受到环境辐射,紫外线,化学物质(如烷基化剂)和代谢物(如活性氧)的破坏,接收。如果这些错误和伤害得不到适当的修复,它们将导致突变,从而导致癌症和衰老。

DNA损伤部位有修复结构,其中之一就是去除碱修复。此时,将出现一个称为AP位点的基础位点(apurinic/apyrimidinic位点)。换句话说,AP位点的检测是可以测量DNA损伤位点的有效方法。

ARP(N’-氨基氧基甲基羰基肼基-D-生物素)是已知可以与该AP位点进行生物素特异结合的试剂。-Nucleostain-DNA Damage Quantification Kit-AP Site Counting-是一种可以通过使用ARP将DNA生物素化并固定在96孔微板上,可以简单地定量样品DNA中的AP 位点的试剂盒。

该试剂盒包含具有与AP位点的标准DNA,并且可以使用HRP标记的链霉亲和素通过生物素检测方法对AP位点进行定量。

使用方法请看实验例。

*冷藏保存中或恢复到室温时,有时会在管状管中看到水滴状的液粒。

这是由干燥防止剂液粒化而成的,产品的性能没有问题。

*本套装中含有加入了溶液的试剂组件。

溶液可能会粘附在试管或瓶盖的内壁上,因此在打开前应先摇匀

1609381194576943.png

技术信息

除试剂盒以外必要的物品

・10μl,200μl,1 ml微量移液器(可变型)

・200μl多通道移液器(可变型)

・培养箱(37℃)

・酶标仪

・0.5 ml,1.5 ml离心管

・离心机

・DNA纯化试剂盒

・纸巾

本公司出售各种DNA纯化试剂盒。

Get pureDNA Kit-Cell, Tissue(Code:GK03)

关于DNA提纯的问题,请咨询同仁化学。

操作方法

image.png

常见问题Q&A

Q1: 是否可以创建40个以上AP位点/ 100,000个标准溶液?
A1:该试剂盒的标准DNA是0-40个AP位点/ 100,000ARP-DNA。但我们已经准备了多达50个AP站点/ 100,000个的ARP-DNA(暂时没有做到更多)。从理论上讲,可以制备更多的ARP-DNA,但这么做的话我们无法保证和保持校准线的线性程度。

如果要检测更高浓度的碱基损伤,但样品DNA没有相同浓度的损伤,您可以用0AP 位点-DNA(测定范围内稀释)后再进行测定,之后再换算实际AP数比较好。

Q2: AP位点是DNA的一个基本损伤位点,被用作氧化应激的指标,除了AP位点之外,还有其他氧化应激指标吗?
A2:我们创建了一个文档,概述了氧化应激的各种标记物。

从实验者的角度,描述了每种氧化应激标记的特性和检测样品的处理方法,因此请参考以下文档(日文)。

https://www.dojindo.co.jp/technical/beginner/stressmarker.pdf

Q3:建议在DNA的纯度为吸光度为1.8以上进行检测。是否能够测量至1.5?
A3:因为吸光度在1.5内没有做过类似实验,所以暂时无法确认。

我们用吸光度为1.6~1.7的DNA进行检测,但不能看到很大的变化。

所以推荐1.8或更高。

纯度低的话可能意味着蛋白质污染。低纯度蛋白质具有阻断作用,可能使DNA粘附在板上。

请使用尽可能高的纯度,因为它可能会阻止这种情况

Q4:是否可以存储提取的DNA而无需将其转换为ARP?
A4:存储是不可取的,因为这会增加AP位点的数量。 (冷藏和冷冻)

如果要在不进行ARP化的情况下进行存储,请使用乙醇沉淀,制粒并冷冻保存。AP站点确实是容易发生剪切的部位。

但是,如果以catallist free的状态保存的话,即使在3’侧有断开也不会影响ARP的检测。

相反,如果提取的DNA储存在非冷冻状态的环境中,

由自然产生的去除碱形成的AP位点是一个更重要的问题。

所以在这种情况下,如果你的样品在正确存储标准DNA是可以进行修饰的。

ARP修饰后AP位点稳定,建议提取后迅速进行APR处理。

Q5:这个试剂盒可以检测什么?
A5:您可以定量DNA中的AP位点。AP位点是[apurinic / appyrimidinic site]的缩写,作用于受损的DNA。一般在去除碱修复过程中会出现。DNA的损伤除了复制时DNA polymerase的错误之外,还受到紫外线,化学物质(如烷基化剂)和代谢物(如活性氧)的影响。

通过测定AP位点可以检测DNA损伤。

Q6:这个试剂盒能测定的样品数量是多少?
A6:20samples为20个样品。

每个Filtration Tube都有20个samples。

因为一个样品一般使用一个Filtration Tube,所以这个Tube的数量即是可测定的样品数。

20samples的测定用的板也是1块板。

Q7:96孔板和过滤管中有溶液剩余,请告诉我废弃的方法
A7:多余的溶液请在确认以下成分信息后,按照政策规定的废弃规则废弃。

<配套试剂成分>

・ARP-DNA standard solution(稀释水后废弃,不含有害成分)

・ARP solution(稀释后作废,不含有害成分)

・DNA binding solution(稀释水后废弃,不含有害成分)

・Washing buffer(稀释水后废弃,不含有害成分)

・HRP-Striptavidin(稀释水后废弃,不含有害成分)

・TE buffer(可溶于水,EDA・2NA 0.1%以下)

・Substrate solution(稀释水后废弃,不含有害成分)

参考文献

1) A. Sancar and G. B. Sancar, “DNA Repair Enzymes”, Annu. Rev. Biochem., 1988, 57, 29.

2) T. Lindahl and B. Nyberg, “Rate of Depurination of Native Deoxyribonucleic Acid”, Biochemistry, 1972, 11, 3610.

3) M. Liuzzi and M. Talpaert-Borle, “A New Approach to the Study of the Base-excision Repair Pathway Using Methoxyamine”, J. Biol. Chem., 1985, 260, 5252.

4) M. Weinfeld, M. Liuzzi and M. C. Paterson, “Response of Phage T4 Polynucleotide Kinase Toward Dinucleotides Containing Apurinic Sites: Design of a 32P-postlabeling Assay for Apurinic Sites in DNA”, Biochemistry, 1990, 29, 1737.

5) B. X. Chen, K. Kubo, H. Ide, B. F. Erlanger, S. S. Wallace and Y. W. Kow, “Properties of a Monoclonal Antibody for the Detection of Abasic Sites, a Common DNA Lesion”, Mutat. Res., 1992, 273, 253.

6) J. A. Gralnick and D. M. Downs, “The YggX Protein of Salmonella enterica Is Involoved in Fe(II) Trafficking and Minimizes the DNA Damage Cause by Hydroxyl Radicals:Residue CYS-7 is Essential for YggX Function”, J. Biol. Chem., 2003, 278, 20708.

7) J. W. Pippin, R. Durvasula, A. Petermann, K. Hiromura, W. G. Couser and S. J. Shankland, “DNA Damage is a Novel Response to Sublytic Complement C5b-9 Induced Injury in Podocytes”, J. Clin. Invest., 2003, 111, 877.

8) S. Watanabe, T. Ichimura, N. Fujita, S. Tsuruzono, I. Ohki, M. Shirakawa, M. Kawasuji and M. Nakao, “Methylated DNA-binding Domain 1 and Methylpurine DNA Glycosylase Link Transcriptional Repression and DNA Repair in Chromatin”, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2003, 100, 12859.

9) M. Endres, M. Ahmadi, I. Kruman, D. Biniszkiewicz, A. Meisel and K. Gertz, “Folate Deficiency Increases Postischemic Brain Injury”, Stroke, 2005, 36, 321.

10) J.-M. Li, M. Mogi, K. Tsukuda, H. Tomochika, J. Iwanami, L.-J. Min, C. Nahmias, M. Iwai and M. Horiuchi, “Angiotensin II-Induced Neural Differentiation via Angiotensin II Type 2 (AT2) Receptor-MMS2 Cascade Involving Interaction between AT2 Receptor-Interacting Protein and Src Homology 2 Domain-Containing Protein-Tyrosine Phosphatase 1”, Mol. Endocrinolo., 2007, 21(2):499.

11) D. R. McNeill and D. M. Wilson III, “A Dominant-Negative Form of the Major Human Abasic Endonuclease Enhances Cellular Sensitivity to Laboratory and Clinical DNA-Damaging Agents”, Mol. Cancer Res., 2007, 5(1), 61.

4-PDS试剂货号:P017 4,4′-Dithiodipyridine 2645-22-9

4-PDS试剂货号:P017
4,4′-Dithiodipyridine
2645-22-9
商品信息
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分子式:

C10H8N2S2

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220.32

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2-PDS试剂货号:P016 2,2′-Dithiodipyridine 2127-03-9

2-PDS试剂货号:P016
2,2′-Dithiodipyridine
2127-03-9
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分子式:

C10H8N2S2

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220.32

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Liperfluo-细胞脂质过氧化物检测
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DTNB试剂货号:D029 5’5-二硫(2-硝基苯甲酸) DTNB

DTNB试剂货号:D029
5’5-二硫(2-硝基苯甲酸)
DTNB
商品信息
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分子式:

C14H8N2O8S2

分子量:

396.35

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Total Glutathione Quantification Kit试剂盒货号:T419 总谷胱甘肽定量试剂盒

Total Glutathione Quantification Kit试剂盒货号:T419
总谷胱甘肽定量试剂盒
Total Glutathione Quantification Kit
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MDA检测试剂盒货号:M496 MDA检测 MDA Assay Kit

MDA检测试剂盒货号:M496
MDA检测
MDA Assay Kit
商品信息
储存条件:-20度保存,避光
运输条件:常温

特点:

 

● 细胞、组织样品均可检测

● 操作更加简单

● 采用荧光法灵敏度更高

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100tests
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产品概述
试剂盒内含
测定原理
产品特点
实验例
产品文献

产品概述

丙二醛(MDA)是脂质过氧化物分解后形成的一种化合物。因此,MDA 是检测细胞和组织中脂质过氧化物的最常见的指标之一,在氧化应激、铁死亡等领域的研究中被广泛使用。MDA Assay Kit 可以检测样品中的 MDA 浓度,通过硫代巴比妥酸(TBA)与水解产生的 MDA 反应形成的 TBA 复合体的吸光度或荧光强度来检测样品中的丙二醛(MDA)。试剂盒中配有抗氧化剂(Antioxidant),可以防止样品在反应过程中发生不必要的氧化,从而确保获得准确的实验结果。

试剂盒内含

微信截图_20220104144012.png

测定原理

本试剂盒采用经典的TBA法,通过检测MDA/硫代巴比妥酸(TBA)复合体的荧光或吸光度来检测细胞或组织中的MDA浓度。此外,试剂盒中还附带MDA标准溶液,以便通过标准曲线检测样品中的MDA。

1643342259946206.jpg

产品特点

简化操作步骤

一般的MDA检测试剂盒(TBA法),作为底物的硫代巴比妥酸(TBA)需要天平称量和高温加热溶解的步骤。而同仁化学研究所的MDA试剂盒中的TBA无需称量和加热溶解的操作,从而减少由于称量等造成的误差,使得实验结果的孔间差更小。同时,还可大幅缩短操作所需的时间。

1641278613634226.png

细胞、组织样品均可检测

细胞样品通过荧光法检测。组织样品可以根据样品中MDA的含量在荧光法和吸光度法之间自由选择。具体可参考下表。

1641278820640086.png

实验例

由于Erastin可以抑制xCT(胱氨酸/谷氨酸转运体),是最常见的铁死亡诱导剂之一。使用同仁化学研究所的MDA试剂盒检测Erastin处理的HepG2(人肝癌细胞)中MDA的变化。通过标准曲线(用BCA法蛋白定量校准后),计算样品中MDA的浓度。可以发现,Erastin处理的细胞中,MDA含量明显上升。

微信截图_20220104144843.png

微信截图_20220104145033.png

产品文献

1、K. Igarashi, H. Iwai, K. Tanaka, Y. Kuwahara, J. Kitanaka, N. Kitanaka, A. Kurimasa, K. Tomita, T. Sato, “Neuroprotective effect of oxytocin on cognitive dysfunction, DNA damage, and intracellular chloride disturbance in young mice after cranial irradiation”, 2022, Biochem. Biophys. Res. Commun., doi:10.1016/j.bbrc.2022.04.099.

2、J. Zhu, X. Wang, Y. Su, J. Shao, X. Song, W. Wang, L. Zhong, L. Gan, Y. Zhao, X. Dong, “Multifunctional nanolocks with GSH as the key for synergistic ferroptosis and anti-chemotherapeutic resistance”, 2022, doi:10.1016/j.biomaterials.2022.121704.

3、B. Yang, G. Joe, W. Li, Y. Shimizu, H. Saeki, “Comparison of Maillard-Type Glycated Collagen with Alginate Oligosaccharide and Glucose: Its Characterization, Antioxidant Activity, and Cytoprotective Activity on H2O2-Induced Cell Oxidative Damage”, 2022, doi:10.3390/foods11152374.

4、L. Dong, Z. Jiang, L. Yang, F. Hu, W. Zheng, P. Xue, S. Jiang, M. E. Andersen, G. He, M. J. C. Crabbe, W. Qu, “The genotoxic potential of mixed nitrosamines in drinking water involves oxidative stress and Nrf2 activation”, 2022, doi:10.1016/j.jhazmat.2021.128010.

5、C. Hou, L. Xiao, X. Ren, L. Cheng, B. Guo, M. Zhang, N. Yan., “EZH2-mediated H3K27me3 is a predictive biomarker and therapeutic target in uveal melanoma”, 2022, Front. Genet., doi:10.3389/fgene.2022.1013475.

6.Lizhong Yao, Junyi Hou, Xiongyan Wu, Yifan Lu, Zhijian Jin, Zhenjia Yu, Beiqin Yu, Jianfang Li, Zhongyin Yang, Chen Li, Min Yan, Zhenggang Zhu, Bingya Liu, Chao Yan, Liping Su,“Cancer-associated fibroblasts impair the cytotoxic function of NK cells in gastric cancer by inducing ferroptosis via iron regulation”,2023Redox Biology,doi.org/10.1016/j.redox.2023.102923

6、Zixuan Yuan,ORCID,Xiaoming Zhou ,Yan Zou ,Bingtao Zhang ,Yao Jian ,Qi Wu ,Shujuan Chen and Xin Zhang“Hypoxia Aggravates Neuron Ferroptosis in Early Brain Injury Following Subarachnoid Hemorrhage via NCOA4-Meditated Ferritinophagy”,Antioxidants2023,doi.org/10.3390/antiox12122097

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